H3N2犬流感病毒M1蛋白的原核表达及鉴定

H3N2犬流感病毒M1蛋白的原核表达及鉴定

论文摘要

为制备犬流感病毒(H3N2) M1蛋白纯品,针对M1基因序列设计引物,用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因片段,扩增产物克隆至表达载体pET-SUMO中并转化至宿主菌BL21(DE3),诱导表达目的蛋白,探索纯化工艺,制备目的蛋白,并用Western blot检测纯化的M1目的蛋白。通过PCR成功扩增出大小为771 bp的M1基因,成功构建p ET-SUMO-M1表达载体,表达的融合蛋白相对分子量为41 kD,主要以可溶形式表达,纯化后获得蛋白纯品,Western blot检测显示用M1蛋白(28 k D)免疫小鼠制备的多抗能与制备的蛋白纯品发生特异性反应,从而证明蛋白纯品为M1目的蛋白。试验制备出的M1蛋白纯品可为进一步制备通用型抗犬流感病毒抗体提供纯品抗原。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 病毒基因、质粒和菌种
  •     1.1.2 主要试剂
  •     1.1.3 实验动物
  • 2 方法
  •   2.1 引物设计与合成
  •   2.2 M1基因的扩增
  •   2.3 重组表达质粒的构建
  •   2.4 目的蛋白诱导表达及可溶性分析
  •   2.5 表达产物的初步纯化
  •   2.6 目的蛋白的精纯
  •   2.7 M1蛋白多抗的制备
  •   2.8 目的蛋白的鉴定
  • 3 结果与分析
  •   3.1 M1基因的扩增
  •   3.2 重组表达质粒p ET-SUMO-M1的构建及PCR鉴定
  •   3.3 目的蛋白诱导表达及可溶性分析
  •   3.4 重组融合蛋白的纯化和Western blot分析
  •   3.5 目的蛋白的纯化
  •   3.6 M1蛋白多抗的制备
  •   3.7 纯化的目的蛋白的Western blot分析
  • 4 讨论与结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 余晓颖,田园,张国利,吴广谋,刘雨玲,李泽鸿,岳玉环

    关键词: 犬流感病毒,蛋白,原核表达,蛋白纯化

    来源: 中国兽药杂志 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 吉林农业大学生命科学学院,军事医学研究院军事兽医研究所

    基金: 国家重点研发计划(2016YFD0501002)

    分类号: S852.65

    页码: 1-8

    总页数: 8

    文件大小: 847K

    下载量: 92

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