乳酸菌胞外多糖对结肠癌HT-29细胞增殖的影响

论文摘要

从15株大连工业大学大连市益生菌功能研究重点实验室保藏植物乳杆菌中筛选出对人结肠癌细胞HT-29抑制率最高的乳杆菌胞外多糖,对其进行分离纯化并研究多糖对HT-29细胞增殖的影响。通过苯酚硫酸法测定15种乳酸菌胞外多糖产量、3-（4,5-二甲基吡啶-2-基）-5-（3-羧基甲氧基苯基）-2-（4-磺苯基）-2H-四唑[3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-5-（3-carboxymethoxyphenyl）-2-（4-sulfophenyl）-2H-tetrazolium,MTS]测定不同浓度的粗多糖对HT-29细胞的抑制率,最终筛选出高产胞外多糖、对HT-29细胞增殖抑制率高的菌株Lactobacillus plantarum12所产胞外多糖,其胞外多糖的糖含量为54%、蛋白含量为3.6%。对其胞外多糖进行DEAE-Sepharose Fast Flow离子柱和Sepharose CL-6B凝胶柱的分离纯化,得到中性多糖组分EPS12-1和酸性多糖组分EPS12-2,2个多糖组分的糖含量分别为31.82%和35.21%,通过MTS法测定L. plantarum12菌所产粗多糖、多糖组分EPS12-1和EPS12-2分别在50、100、250、500μg/mL浓度时对HT-29细胞的抑制率,发现多糖浓度为250μg/mL时,对HT-29细胞增殖达到了最佳抑制效果,抑制率分别为27.58%、7.11%、12.00%。当多糖浓度为250μg/mL时,HT-29细胞凋亡率、活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平、caspase 8活性,均处在较高水平。L. plantarum12胞外多糖通过增加ROS酶活和激活caspase 8来抑制HT-29增殖。

论文目录

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.2 主要仪器设备

1.3 方法

1.3.1 乳酸菌胞外多糖粗糖的提取

1.3.1. 1 菌株富集培养

1.3.1. 2 乳酸菌胞外粗多糖的提取

1.3.2 乳酸菌胞外多糖粗糖的糖浓度及蛋白质含量的测定

1.3.3 不同乳酸菌胞外多糖粗糖对HT-29增殖的影响

1.3.4 胞外多糖粗糖的分离纯化

1.3.5 活性氧（reactive oxygen species, ROS）的测定

1.3.6 Tunel法检测HT-29细胞凋亡

1.3.7 caspase 8活性检测

1.4 统计分析

2 结果与讨论

2.1 乳杆菌所产胞外多糖成分分析

2.2 4株菌胞外多糖对HT-29细胞增殖的影响

2.3 L.plantarum 12粗多糖的分离纯化

2.3.1 L.plantarum 12粗多糖DEAE-Sepharose Fast Flow离子柱纯化

2.3.2 L.plantarum 12粗多糖的Sepharose CL-6B凝胶柱分离纯化

2.3.3 分离纯化后单一组分对HT-29细胞增殖的影响

2.4 L.plantarum 12胞外多糖对HT-29细胞内ROS水平的影响

2.5 L.plantarum 12胞外多糖对HT-29细胞凋亡的影响

2.6 L.plantarum 12胞外多糖对HT-29细胞内caspase 8酶活的影响

3结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张将,蒋凌霜,孙梦莹,牟光庆,李新玲,钱方,妥彦峰

关键词: 乳酸菌,胞外多糖,肿瘤,凋亡

来源: 食品研究与开发 2019年07期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 大连工业大学食品学院,新疆天润乳业股份有限公司

基金: 国家自然科学基金项目(31571813,31671828),2018新疆兵团重大科技计划后补助项目(2018AA009)

分类号: TS201.4

页码: 7-15

总页数: 9

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乳酸菌胞外多糖对结肠癌HT-29细胞增殖的影响

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