(柳州市妇幼保健院柳州市出生缺陷预防与控制重点实验室广西柳州545001)(柳州市妇幼保健院医学遗传科广西柳州545001）
【摘要】目的：通过分析26346例不孕不育患者的染色体核型检结果，探讨人类染色体变异与生殖异常的关系。方法：选取2016年1月－2018年12月因不孕不育来我院生殖助孕中心门诊就诊的26346例患者，进行外周血淋巴细胞培养、制片、G显带及染色体核型分析，必要时行C或N显带技术辅助诊断。结果：26346例患者中检出1126例染色体核型异常，检出率为4.27%，其中检出染色体非多态性核型（包括染色体数目异常和染色体结构异常）485例，占受检人数的1.84%；检出染色体多态性641例，占受检人数的2.43%。结论：染色体异常是导致不孕不育及不良孕产史的重要原因，对不孕不育、流产、胚停及生育畸形儿的患者应进行常规染色体检查，以便排除遗传因素影响，为临床诊断提供依据。
【关键词】不孕不育；细胞遗传学；外周血；染色体异常
【中图分类号】R329.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2019）27-0246-03
近年来，不孕不育已逐渐成为影响我国已婚人群生殖健康的重要疾病之一，约7%～15%的育龄夫妇受其困扰[1]。不孕不育分原发性和继发性。根据中国人口协会对我国不孕不育现状调查显示，引起不孕不育的原因很多，主要有遗传和环境因素、母体感染及内分泌失调等，其中原发性不孕占60%以上，染色体核型异常是造成原发性不孕不育的原因之一，其中染色体数目或结构异常在妊娠人群中的检出率为5%～10%[2-3]。现对2016年1月－2018年12月26346例不孕不育患者染色体核型进行细胞遗传学分析，探讨染色体异常与不孕不育的关系。
1.资料与方法
1.1一般资料
选取2016年1月－2018年12月来我院生殖中心门诊就诊的不孕不育患者26346例，年龄在20～60岁，主要临床表现为不孕不育及不良妊娠史等。患者均进行详细体检，询问其有无家族遗传及不良接触史等。
1.2方法
取患者2ml外周血于肝素抗凝管中，分2线接种，按常规方法收获染色体后行G显带。经蔡司系统扫描，计数20个分裂相，分析5个及以上核型，如有发现嵌合体或异常细胞时，再增加计数至100个分裂相，必要时行C、N显带辅助诊断。按照人类细胞遗传学国际命名体制（ISCN2016）标准对患者染色体命名。
2.结果
26346例患者中共检出非多态性染色体核型（包括染色体数目异常及结构异常）485例，占受检总人数的1.84%（485/26346）；检出染色体多态性641例，占受检总人数的2.43%（641/26346）。两者共1126例，其中男性有631例（占56.04%），女性495例（占43.96%），检出率为4.27%（1126/26346）。485例不孕不育患者染色体异常核型分布见表1。9号臂间倒位和D、G组随体/随体柄异常检出率较高，构成比分别为61.93%（397/641）和13.26%（85/641），其他1、9、16号染色体次溢痕增加；D、G组短臂出现异染色质；Y长臂异染色质增加或减少（大/小Y）等见表2。
3.讨论
目前临床研究发现染色体异常在一般人群中的发生率为0.47%～0.84%，在不孕不育患者比率中占0.8%～12.5%，是一般人群的10倍以上[4]，提示说明染色体异常改变了其基因携带的遗传信息，从而引起不孕不育、流产、畸形儿等临床问题。本院就诊的不孕不育患者染色体异常发生率为4.27%与周黎明等报道结果相近[5]。异常核型中男性631例（占56.04%），女性495例（占43.96%），男性核型的异常率比女性高。以下将探讨染色体数目和结构异常及多态性与不孕不育之间的关系。
性染色体异常是影响不孕不育的重点因素。本研究中于289例性染色体数目异常，其中52例克氏综合征患者，以47,XXY最为常见。Klinefelter综合征患者在不同的年龄段临床表现不同。其他性染色体数目异常的有超雌综合征（1例）、超雄综合征（8例）、Turner综合征（1例）及各综合征相应的嵌合体。嵌合体内含有2种或以上的细胞系，分真性嵌合体和假性嵌合体（淋巴细胞体外培养制片过程中因外界环境及外力造成染色体数目和片段丢失或增加的）。多数研究表明，嵌合体患者的临床表现有高度异质性，与外周血不同核型细胞系或其所占比例关系不大[6]。性染色体数目异常大多表现为性腺发育不全或两性畸形，不能产生正常配子而不孕不育。本研究中与性染色体结构异常相关的病例有16例，其中女性6例，男性10例。6例女性中有3例为X部分缺失即del（X），染色体断裂后未重接且无着丝粒部分片段丢失所致。研究发现在X染色体长臂上有两个“键区域”：Xq13-22，Xq22-26，存在着决定卵巢发育功能的基因[7]。1例为45，X/46，X,r(X)嵌合型伴X环状染色体（r（X））的特纳综合征患者，此类患者大多为新发，极少源自遗传，其表型严重程度与X染色体失活机制有关，环状X染色体没有失活而导致功能性X部分二体，部分基因高表达进而导致严重表型[8-9]。10例男性中有6例为Y缺失，核型为46，X，del(Y)(q11-12)，Y染色体为人体最短的近端着丝粒染色体，其长臂（Yq）上的无精子因子位于Yq11远端的精子发生调控区，具有完成生精过程和维持生精功能作用，Y染色体AZF区域缺失对男性生育能力不利[10-12]。
常染色体异常检出176例包括数目异常（10例）和结构异常（166例）。在不孕不育患者中常染色体异常绝大多数为结构异常，以染色体易位（平衡和罗氏异位）最多见。易位染色体干扰正常染色体减数分裂的配对、分离而形成杂合体。平衡和罗氏易位的患者因遗传物质未增加和减少而表型正常，但其生殖细胞在减数分裂中产生18种配子，与正常配子结合产生的合子仅1种为正常核型，1种为平衡易位型，其余发育成部分三体或单体的不平衡易位胚胎，最终胚胎流产[13]。本文检测出来的47,XN,+mar和46，XX，add/del类型的异常是遗传物质的增加或减少，这与不孕不育发生有直接关系。46,XY女性性反转综合征（Swyer综合征），发病率约为1/100000，其主要临床表现为社会性别和染色体性别不相符合。46,XY女性患者在临床和遗传上有较大的异质性，表现为生殖器官不同程度的发育异常。本文发现4名女性46,XY，原发闭经，性腺发育不全。
常见染色体多态性为1、9、16号异染色质增加、D/G组随体变异、9号臂间倒位及Y染色体变异。本研究中641例多态性病例中9号臂间倒位最多（397例），占多态性的61.93%(397/641)。关于inv(9)存在很多争议，分两种主流：一种认为其对生育及流产无影响，另一种认为其与不孕不育、复发性性流产、葡萄胎、无精症有关[14]，其遗传效应的原理与常染色体1、2、4号等染色体臂间倒位一致，即倒位片段越短，重复和缺失部分越长，形成正常配子和合子可能性就越小，易造成早期流产；若倒位片段越长，重复和缺失的部分越短，形成正常配子和合子可能性就越大。本研究中1、9、16号染色体次缢痕增长共65例，均出现流产和不孕临床症状，是由于高度重复的DNA序列增加影响细胞分裂，同源染色体不正常配对产生不平衡的配子，而形成非整倍体或不平衡的子代造成流产，或形成不平衡的配子不能受精而不孕。D/G组随体区变异共137例，因着丝粒与其随体区邻近，随体变异增加了端着丝粒染色体的不分离，从而形成染色体非整倍体胚胎或异常配子，引发流产或死胎等。Y染色体变异共41例，主要包括Yqh-/Yqh+及Y倒位，Yqh+是由于与Y染色体某些区域的DNA重复表达，与X染色体同源重组时，因有丝分裂发生错误而影响一些基因的正常表达，导致不良妊娠。Yqh-染色体主要是缺失了与男性生殖能力相关的基因位点，导致生精困难。Y染色体倒位的多态性发现在IR3之间发生[15]。IR3反向重复序列的重组影响了细胞减数分裂过程中姊妹染色单体配对、联会及分离，而形成了异常的配子及合子，导致不良妊娠。
通过分析显示，染色体异常是不孕不育的一个重要原因，对不明原因的不孕不育患者应及早进行细胞遗传学检查，必要时可借助基因等分子方面技术做进一步的诊断，避免盲目治疗，节约费用，为不良孕产史患者的治疗提供精准的依据和方向。
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资金项目：柳州市科技重大专项项目(2018AF10501)；广西壮族自治区卫生和计划生育委员会自筹经费科研课题（Z2015192）