一、Cellular Signaling with Nitric Oxide and Cyclic GMP（论文文献综述）
唐欣[1]（2021）在《细胞色素P450 1A1对巨噬细胞中一氧化氮生成的影响》文中指出目的:研究细胞色素P450 1A1（CYP1A1）对脂多糖（LPS）诱导的活化巨噬细胞中一氧化氮的生成的影响。方法:1.取10只野生型C57BL/6小鼠,提取并体外培养其原代腹腔巨噬细胞（Peritoneal Macrophages,PMs）,分为LPS 0h对照组、LPS 2h组、LPS 6h组、LPS 12h组（LPS终浓度为10mg/L）,采用实时荧光定量PCR（Real Time quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR）检测PMs中CYP1A1的基因表达情况,采用蛋白质印迹法（Western blot,WB）检测PMs中CYP1A1蛋白的表达情况。探究CYP1A1在LPS诱导的炎性巨噬细胞中的变化。2.构建CYP1A1过表达、表达阴性对照载体的RAW264.7细胞株,分为CYP1A1/RAW组及NC/RAW组,通过倒置荧光显微镜检测增强绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP）的表达情况,采用RT-q PCR和WB法验证CYP1A1基因及蛋白是否过表达。3.体外培养CYP1A1过表达、表达阴性对照载体的小鼠巨噬细胞株RAW264.7（分别简写为CYP1A1/RAW、NC/RAW）,分为CYP1A1/RAW+LPS组、NC/RAW+LPS组、CYP1A1/RAW+PBS组、NC/RAW+PBS组,分别用LPS（LPS终浓度为10mg/L）及等体积PBS刺激上述细胞,采用RT-q PCR检测上述细胞中i NOS的基因表达情况,采用Griess法检测细胞培养上清中一氧化氮（Nitric Oxide,NO）的水平,采用WB检测诱导型一氧化氮合酶（inducible Nitric Oxide Synthase,i NOS）蛋白表达以及激活蛋白-1（Activator Protein-1,AP-1）磷酸化水平情况。探究CYP1A1对LPS诱导巨噬细胞生成NO的影响作用。4.取小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞传代培养,分为单独LPS刺激组（LPS终浓度为10mg/L）、单独12（S）-羟基二十碳四烯酸[12（S）-Hydroxyeicosatetraenoic acid,12（S）-HETE]刺激组[12（S）-HETE终浓度为100 nmol/L]、LPS+12（S）-HETE刺激组以及空白对照组,采用RT-q PCR检测上述组别细胞中i NOS的m RNA表达,采用Griess法检测细胞培养上清中NO含量,观察CYP1A1对LPS诱导巨噬细胞生成NO的影响是否与12（S）-HETE有关。5.构建并鉴定过表达CYP1A1基因且突变CYP1A1羟化酶活性位点的RAW264.7细胞株（CYP1A1mutant/RAW简写为CYP1A1m/RAW）。体外培养CYP1A1/RAW及CYP1A1m/RAW细胞,将其分为CYP1A1m/RAW+LPS组、CYP1A1/RAW+LPS组、CYP1A1m/RAW空白组、CYP1A1/RAW空白组,分别给予或不给予LPS（LPS终浓度为10mg/L）刺激,完毕后检测细胞中i NOS的m RNA表达及细胞培养上清中NO含量。观察CYP1A1羟化酶活性是否参与其对LPS诱导巨噬细胞中NO生成的调控。结果:1.与LPS 0h对照组比较,LPS 6h及12h组PMs细胞中CYP1A1 m RNA表达显着升高,CYP1A1的蛋白水平也相应增强,说明LPS诱导的活化巨噬细胞中CYP1A1表达水平明显上调。2.获得稳定过表达CYP1A1的RAW264.7细胞株后,用倒置荧光显微镜观察显示转染成功,同时RT-q PCR和WB的检测结果表明,在相同的时间点,与NC/RAW组细胞相比,CYP1A1/RAW组细胞的CYP1A1 m RNA和蛋白水平均显着升高。3.与NC/RAW+LPS组相比,CYP1A1/RAW+LPS组细胞中i NOS m RNA的表达水平及NO的生成水平均显着增加,与此同时,细胞中AP-1磷酸化水平和i NOS蛋白水平也显着增强,提示CYP1A1可能通过活化AP-1/i NOS通路以促进NO的生成。4.单独给予LPS或LPS联合12（S）-HETE刺激RAW264.7细胞株后,与单独LPS刺激组相比,LPS+12（S）-HETE刺激组细胞中i NOS的m RNA表达和NO的生成并无统计学差异,说明CYP1A1对巨噬细胞生成NO的调控作用与其致炎代谢产物12（S）-HETE无关。5.CYP1A1m/RAW细胞较CYP1A1/RAW细胞中CYP1A1羟化酶活性显着降低,与CYP1A1/RAW+LPS组相比,CYP1A1m/RAW+LPS组中i NOS的m RNA表达及NO的生成无显着差异,说明CYP1A1对NO的调控也不是通过其羟化酶活性而实现。结论:1.LPS可使巨噬细胞中CYP1A1表达水平显着上调。2.CYP1A1过表达可能通过AP-1/i NOS通路促进LPS诱导时巨噬细胞中NO的生成。3.CYP1A1对于巨噬细胞生成NO的调控作用与CYP1A1羟化酶活性及其致炎代谢产物12（S）-HETE无关。
刘琪[2]（2021）在《延边朝鲜族GUCY1A3基因rs7692387位点多态性与冠心病的相关性研究》文中认为目的:探讨GUCY1A3基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）rs7692387位点在中国延边地区朝鲜族人群与冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary artery disease,CAD）的相关研究。方法:本实验将中国延边地区朝鲜族人群纳为实验研究对象,采用病例对照设计,在延边大学附属医院心内科连续收集在2019年8月-2021年2月期间就诊的朝鲜族CAD患者282例（CAD组）,其中男性病例167例,女性病例115例,平均年龄62.60±9.55岁;在健康体检中心随机选取年龄、性别与CAD组相匹配的定期体检的朝鲜族健康人群351例（NGT组）,其中男性病例201例,女性病例150例,平均年龄62.04±9.44岁。采用单碱基延伸的SNa Pshot方法对样本GUCY1A3基因的rs7692387位点进行基因测序及分型,运用SPSS25.0对数据进行统计分析。结果:1.根据一般资料的两组比较结果显示:延边地区朝鲜族全部人群中,CAD组的生化指标TG、LDL水平明显高于对照组（P=0.038;P=0.004）,而CAD组HDL水平明显低于对照组（P=0.001）,其他指标在CAD组与对照组之间的比较均无统计学意义（P>0.05）;延边地区朝鲜族男性人群中,CAD组血清LDL水平显着高于NGT组（P=0.011）,而CAD组血清HDL水平显着低于NGT组（P=0.015）,其他指标在两组间比较均无统计学意义（P>0.05）;延边地区朝鲜族女性人群中,CAD组年龄、合并高血压例数百分比、舒张压、血清TG水平均显着高于NGT组（P=0.001;P=0.001;P=0.009;P=0.001）,而CAD组血清HDL水平显着低于NGT组（P=0.046）,其他指标在两组间比较均无统计学意义（P>0.05）。2.Hardy-Weinberg平衡检验分析:GUCY1A3基因rs7692387等位基因频率和基因型频率在对照组与CAD组中无显着性差异,均已达到遗传平衡（P>0.05）,说明具有良好的群体代表性。3.朝鲜族人群rs7692387位点遗传模型分析及风险评估:CAD组等位基因频率及基因型与对照组比较无明显统计学差异（P=0.425;P=0.731）;构建显性模型和隐性模型进行分析显示:CAD组与NGT组两组比较无统计学差异（P=0.434;P=0.705）;rs7692387位点基因型与等位基因频率和高血压、糖尿病进行比较均无显着相关性（P=0.978,P=0.982;P=0.295,P=0.479）。4.朝鲜族人群男性rs7692387位点遗传模型分析及风险评估:延边地区朝鲜族男性CAD组等位基因频率及基因型与对照组进行比较无明显差异（P=0.442;P=0.739）;构建显性模型和隐性模型进行分析显示:CAD组与NGT组两组比较无统计学差异（P=0.440;P=0.725）。5.朝鲜族人群女性rs7692387位点遗传模型分析及风险评估:（1）朝鲜族人群女性rs7692387位点基因频率分析:延边地区朝鲜族女性CAD组rs7692387-A等位基因频率低于对照组,具有统计学差异（P=0.023）。以G等位基因作为参考,等位基因A可以视为保护性基因,OR值为0.614（95%CI:0.403～0.936）。（2）朝鲜族人群女性rs7692387位点基因型频率分析:rs7692387位点的基因型频率CAD组与NGT组比较无明显差异（P=0.082）。以GG基因型为参考,AA、AG基因型与其进行比较分别为（P=0.156;P=0.051）。（3）朝鲜族人群女性rs7692387位点遗传模型分析结果:显性模型进行分析,延边地区朝鲜族女性CAD组AA+AG基因型频率明显低于NGT组（P=0.027）;OR值为0.565（95%CI:0.339～0.939）,携带AA和AG基因型可能具有保护NGT罹患CAD作用,呈显性遗传模式;隐性模型进行分析,结果表明CAD组与NGT组比较无明显差异（P=0.281）。（4）采用多因素Logistic回归分析显示:朝鲜族人群女性rs7692387显性模型差异具有统计学意义（P=0.013）。OR值为0.491（95%CI:0.280～0.862）。结论:在延边朝鲜族女性人群中,GUCY1A3基因rs7692387位点携带A等位基因的基因型是冠心病的保护性基因,呈显性遗传模式。
陈佳妮[3]（2021）在《小鼠神经细胞中CBS催化生成的H2S对脑微血管内皮细胞增殖、迁移和形成血管的影响及与VEGFR2的关系》文中提出血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）,是一种重要的血管生成调节因子,可增强内皮细胞有丝分裂、增殖和迁移及侧支血管的形成,在生理和病理性的血管生成中发挥着基本作用。VEGF作用是通过其特异的受体血管内皮生长因子受体（Vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR）来发挥的。VEGFR分为VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3三个亚型,其中,血管内皮生长因子受体2（Vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR2）主要参与内皮细胞有丝分裂的发生,介导了VEGF在内皮细胞中的大部分生物学效应。缺血后神经损伤修复过程中,脑血管再生直接关系到神经组织损伤的发展和修复。在血管再生过程中,血管内皮细胞的迁移与增殖是十分关键的环节。内源性硫化氢（Hydrogen sulfide,H2S）是一种气态信号分子,在机体的生理和病理过程中发挥着重要的作用,主要由胱硫醚β合成酶（Cystathionine-β-synthetase,CBS）和胱硫醚-γ-裂解酶（Cystathionine-γ-lyase,CSE）催化L-半胱氨酸（L-cysteine,L-Cys）来生成。CBS和CSE有组织分布特异性,CBS分布在神经细胞中,而CSE分布在血管组织中。因此,神经细胞主要通过CBS催化产生H2S。内源性H2S也是一种重要的血管活性物质,参与血管的生理和病理过程。有研究表明H2S可促进人脐静脉内皮细胞的增殖和迁移,并有研究显示H2S可激活VEGFR2,si RNA介导的VEGFR2基因敲低可抑制H2S诱导的人血管内皮细胞的迁移。但是由脑细胞产生的神经源性H2S是否对脑血管内皮细胞的迁移与增殖产生一定的影响呢?尚未见这方面的研究报道。因此,本课题在体外观察了神经元CBS催化产生的H2S对小鼠脑微血管内皮细胞的增殖、迁移和形成血管的影响,并初步探讨了其作用与VEGFR2的关系。目的:1.观察H2S对内皮细胞增殖迁移的作用。2.探讨VEGFR2与H2S促进内皮细胞增殖迁移作用的关系。3.探讨细胞内游离Ca2+浓度与H2S促进内皮细胞增殖迁移作用的关系。4.观察H2S对内皮细胞血管生成的影响。方法:1.进行三种细胞株的传代培养,利用Transwell系统将小鼠海马神经细胞（HT22细胞）与小鼠脑微血管内皮细胞（b End.3细胞）进行共培养。2.采用siRNA小干扰技术,建立细胞转染模型。3.CCK-8法检测内皮细胞的增殖。4.细胞划痕法和Transwell法检测内皮细胞的迁移。5.甲基蓝法检测共培养体系内H2S的含量。6.钙荧光成像法检测内皮细胞胞内游离Ca2+浓度。7.血管生成实验检测H2S对内皮细胞成管能力的影响。实验结果:1.CCK-8实验结果表明与溶媒对照组比较,加入H2S供体Na HS(1×10-8～1×10-3.5 M)培养24 h时,小鼠脑微血管内皮细胞b End.3细胞和人脐静脉内皮细胞HUVEC细胞增殖有明显的增强（P<0.01）。VEGF164（10 ng/m L）有类似的增强作用（P<0.01）。结果表明外源性H2S对小鼠脑微血管和人脐静脉内皮细胞的增殖有明显的促进作用。与溶媒对照组相比,加入1×10-3.5 M Na HS 1 h时,b End.3细胞和HUVEC细胞的增殖作用不明显,但在6 h时的增殖作用开始增强（P<0.01）,并且在48 h时,Na HS增殖作用进一步增加（P<0.01）。在b End.3细胞和HUVEC细胞中分别加入VEGFR2阻断剂SU5416 10μM培养24 h对这两种细胞的增殖均无明显的影响,但可显着地抑制1×10-3.5 M Na HS引起的b End.3细胞和HUVEC细胞的增殖（P<0.01）,提示外源性H2S促进小鼠脑微血管和人脐静脉内皮细胞增殖作用可能与VEGFR2有关。2.细胞划痕实验中,与溶媒对照组相比,Na HS(1×10-6～1×10-3.5 M)加入24 h可明显并呈浓度依赖性地增加b End.3细胞和HUVEC细胞的迁移面积（P<0.01）;Transwell实验结果表明与溶媒对照组相比,加入Na HS 1×10-3.5 M 24 h可明显地增加b End.3细胞和HUVEC细胞从Transwell上室膜内迁移到膜外的细胞数（P<0.01）。10 ng/m L VEGF164对b End.3细胞和HUVEC细胞的迁移面积和迁移细胞数有类似的作用（P<0.01）。结果表明外源性H2S可明显地促进小鼠脑微血管及人脐静脉内皮细胞的迁移。SU5416单独加入24 h对b End.3细胞和HUVEC细胞的迁移细胞数无明显的影响,但可显着地减少1×10-3.5 M Na HS或10 ng/m L VEGF164引起的b End.3细胞和HUVEC细胞的迁移细胞数的增加（P<0.01）,提示外源性H2S促进小鼠脑微血管及人脐静脉内皮细胞的迁移可能与VEGFR2有关。3.在细胞转染实验中,使用Western bolt法检测b End.3细胞中VEGFR2蛋白的表达。与溶媒对照组相比,转染试剂组和阴性对照组对VEGFR2蛋白的表达并无影响,而使用VEGFR2-si RNA1、VEGFR2-si RNA2、VEGFR2-si RNA3都可以下调VEGFR2蛋白的表达（P<0.05）,但其中VEGFR2-si RNA3下调VEGFR2蛋白的表达尤为显着（P<0.01）。因此,选择VEGFR2-si RNA3作为b End.3细胞中的有效干扰序列,以用于后续实验的研究。4.在小鼠海马神经元HT22细胞与脑微血管b End.3内皮细胞的共培养体系中,H2S合酶CBS底物L-cys（100μM）可明显地增加b End.3细胞增殖和迁移细胞数（P<0.01）;CBS抑制剂AOAA（1 m M）单独使用对b End.3细胞增殖和迁移细胞数无明显的影响,但可显着地减弱L-cys引起的b End.3细胞增殖和迁移细胞数的增加（P<0.01）。结果提示神经元CBS催化生成H2S可促进小鼠脑微血管内皮细胞的增殖和迁移。VEGFR2阻断剂SU5416或VEGFR2-si RNA单用对b End.3细胞增殖和迁移无明显的影响,但可显着地减弱L-Cys促进b End.3细胞增殖和迁移作用,提示HT22神经元CBS催化产生的H2S促小鼠脑微血管b End.3内皮细胞的增殖和迁移作用可能与VEGFR2有关。5.CBS底物L-Cys可显着提高小鼠海马神经元HT22细胞与脑微血管内皮细胞b End.3细胞共培养中的H2S含量（P<0.01）;CBS抑制剂AOAA和VEGFR2阻断剂SU5416或VEGFR2-si RNA单用对共培养中的H2S含量均无明显影响,但AOAA可明显地降低L-Cys引起的H2S含量的提高（P<0.01）,而SU5416或VEGFR2-si RNA3却无明显的影响。结果提示L-Cys可通过小鼠海马神经元CBS催化生成H2S来提高共培养中的H2S含量。6.在小鼠海马神经元HT22细胞与脑微血管内皮细胞b End.3细胞共培养中,加入CBS底物L-Cys可显着提高内皮细胞内Ca2+荧光强度（P<0.01）;加入CBS抑制剂AOAA和VEGFR2阻断剂SU5416或VEGFR2-si RNA单用对内皮细胞内Ca2+荧光强度均无明显影响,但AOAA和SU5416以及VEGFR2-si RNA能够降低L-Cys引起的内皮细胞内Ca2+荧光强度的提高（P<0.05）。结果提示L-Cys可通过小鼠海马神经元CBS催化生成H2S来提高共培养中的内皮细胞内游离Ca2+浓度,并可能与VEGFR2有关。7.在内皮细胞血管生成实验中,加入CBS底物L-Cys可显着提高内皮细胞管生成能力（P<0.01）;单用CBS抑制剂AOAA对内皮细胞管生成能力无明显影响,但AOAA能够降低L-Cys引起的内皮细胞管生成能力的提高（P<0.01）。结果提示L-Cys可通过小鼠海马神经元CBS催化生成H2S来提高共培养中的内皮细胞血管生成的能力。进行VEGFR2-si RNA转染后,与Vehicle组相比,VEGFR2-si RNA本身可以抑制内皮细胞的血管生成能力（P<0.01）,而VEGF164可以促进b End.3细胞的血管生成能力（P<0.01）,Na HS有着相似的作用（P<0.01）。但VEGF164不能促进VEGFR2-si RNA引起的内皮细胞血管生成能力的降低,而Na HS同样不能发挥促进作用,结果提示外源性H2S促进小鼠脑微血管的血管生成可能与VEGF164作用机制相似,可能与VEGFR2有关。结论:1.本研究首次表明小鼠海马神经元CBS可催化L-Cys生成H2S来促进小鼠脑微血管内皮细胞的增殖和迁移,并且神经元CBS催化生成的H2S可能通过激活VEGFR2,导致脑血管内皮细胞内游离Ca2+浓度升高来促进细胞增殖和迁移,至于H2S激活VEGFR2的其它途径及其详细机制有待于今后的进一步研究。2.神经元CBS催化生成的H2S可以促进脑血管内皮细胞的血管生成能力,并且H2S的促血管生成作用可能与VEGF作用相似。
舒海洋[4]（2021）在《嘧啶和吡唑并嘧啶类衍生物的设计、合成及抗炎活性研究》文中指出一氧化氮（NO）是一种生物活性气体,在先天性和适应性免疫反应中具有多种作用。在巨噬细胞中,一氧化氮是由微生物和细胞因子刺激时诱导型一氧化氮合酶产生的,它是宿主防御病原体和免疫调节所必需的。一氧化氮合酶（NOS）通过催化NADPH依赖的L-精氨酸（底物）氧化来产生NO。NOS存在三种不同的亚型,具体取决于其存在的位置,即神经元NOS（n NOS,I型）,诱导型或炎性NOS（i NOS,II型）和内皮型NOS（e NOS,III型）。NO的产生取决于其产生的大小和持续时间,在生理和病理方面均起着作用。i NOS的过度表达会增加NO的生成,最终与超氧自由基反应生成活性氮物质（RNS）,例如三氧化二氮（N2O3）和过氧亚硝酸盐（ONOO-）。这些RNS引发某些炎症或氧化应激途径,从而导致各种病理状况,例如帕金森氏病,阿尔茨海默氏病,多发性硬化,中风,类风湿性关节炎,糖尿病,腹腔疾病和炎症性肠病。迄今为止i NOS的突变分析已确定了对酶功能至关重要的氨基酸集合。当突变为天冬酰胺时,Glu546降低了FMN子域和加氧酶域血红素之间的域间电子转移。在加氧酶结构域的H4B结合口袋中,残基Arg375,Trp455,Trp457和Phe470对于H4B辅因子结合以及随后的酶的二聚化和功能至关重要。i NOS抑制剂主要分为两种,一种与L-Arg具有直接竞争性,它们可逆地抑制L-Arg结合或与L-Arg竞争,另一种是抑制活性i NOS二聚体的形成。但迄今为止,它们在临床试验中均未通过,因此合成有效的i NOS抑制剂是非常有必要的。为了发现和开发针对关节炎的类药物消炎药,我们在以前的基础上发现了的“Hit”有较强的毒性缺点。将化合物与诱导型一氧化氮合酶（PDB ID:1DD7）进行对接,通过空间结构和配体与蛋白的相互作用模式,寻找可以改造的位置。通过分析,共合成有40个新型嘧啶,吡唑并[4,3-d]嘧啶衍生物,筛选对NO的抗炎活性以及对正常肝细胞（LO2）的毒性,平衡毒性和活性之间的关系。通过多个步骤进行了总结,发现标题化合物6e具有较低的毒性(分别针对LO2:IC50>1000μM)和对抑制NO释放的有效作用（10μM时的77%）。
张颖一[5]（2020）在《胃癌中差异表达mRNA、lncRNA、circRNA的鉴定分析及核心circRNA circFOXO3的功能与作用》文中指出目的:胃癌（gastric cancer）是一种常见的恶性肿瘤,因起病隐匿,预后较差,严重威胁人类健康。因此,早期诊断极为重要,但临床尚缺乏该病特异性的生物标记。现有的大量研究显示非编码RNA（ncRNA）在人类癌症的发生和发展中起着至关重要的作用,其中lncRNA和circRNA与m RNA通过形成复杂的竞争性内源性RNA（ce RNA）调控网络参与疾病进程。值得注意的是,目前在胃癌中仍然缺乏对lncRNA、m RNA和circRNA的系统鉴定,并且它们在胃癌中构成的复杂调控网络尚未揭示。因此,本课题旨在探索胃癌中差异表达的m RNA、lncRNA和circRNA,揭露其转录物之间的复杂相互作用,试图为后续胃癌的临床诊断提供理论依据。circRNA由于序列及结构不同于其他ncRNA,从而表现出特有的生物学活性,在许多肿瘤的发生发展中起到关键作用。circ FOXO3是circRNA家族核心成员,已有文献报道显示circ FOXO3通过发挥原癌基因的作用参与了前列腺和脑胶质瘤的发生发展,而其在胃癌中的功能未见报道。本课题拟探究circ FOXO3对于胃癌细胞增殖、周期、转移、侵袭和成瘤的影响以及是否参与胃癌的免疫应答和代谢进程,分析下游靶基因与预后的关系,探索胃癌全新的生物靶标。方法:本课题选用微阵列分析筛选了胃癌中差异表达的m RNA、lncRNA和circRNA,在11个配对胃癌样本中用q RT-PCR验证了随机选择的6个上调基因的表达,并用STRING系统构建了差异表达的m RNA介导的蛋白质-蛋白质相互作用网络、lncRNA介导的顺式调节网络以及circRNA介导的ce RNA网络。另外,使用公共数据库Kaplan-Meier Plotter评估差异表达的m RNA、lncRNA和circRNA,判断其在胃癌中的预后价值。之后采用CCK-8、流式细胞仪、transwell等实验方法检测circFOXO3敲低之后胃癌细胞的增殖,转移和侵袭的变化,并观察其对动物体内成瘤的影响。最后,使用RNA-sequencing技术检测敲低circ FOXO3之后的胃癌细胞中m RNA的表达变化差异,在STRING系统分别构建敲低circ FOXO3后上下调的基因介导的蛋白质-蛋白质相互作用网络,利用GEPIA数据库探究20个circ FOXO3下游核心基因在胃癌中的表达情况,并使用公共数据库Kaplan-Meier Plotter评估circ FOXO3核心下游基因在胃癌中的预后价值。结果:本课题发现922个m RNA、2112个lncRNA和2896个circRNA在胃癌组织中差异表达,并观察到lncRNA lnc-GLI3-4:1、LMF1、OLFM4、HKDCC1、hsa＿circ＿0058819、hsa＿circ＿0058830在胃癌中的表达相较癌旁组织显着升高。生信分析显示胃癌中差异表达的m RNAs参与调控丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢;醛固酮调节钠的重吸收;氨基糖和核苷酸糖代谢;柠檬酸盐循环（TCA循环）;BMP绑定;醛脱氢酶（NAD）活性;胺结合;支链氨基酸分解代谢过程;静脉血管发育。本课题总共鉴定出230个lncRNA-m RNA调节对,KEGG信号通路预测结果显示这些lncRNA参与调控的信号通路包括:粘附连接、醛固酮调节钠的重吸收、轴突指导、B细胞受体信号通路、ARF蛋白信号转导、G蛋白偶联谷氨酸受体结合及L-α-氨基酸跨膜转运。所构建circRNA介导的ce RNA网络共包括34个上调的circRNA,33个下调的circRNA,170个上调的m RNA,153个下调的m RNA和42个mi RNA,生物信息学分析表明这些差异表达的基因与调节支链氨基酸分解代谢过程,糖酵解/糖异生和ARF蛋白信号转导显着相关。通过对已知数据库的分析,Kaplan-Meier生存曲线显示,胃癌患者m RNA中高表达的GPER、COL8A1、GLT25D1、EPOR、ENG、SLC5A5、OMP、NDE1和REM1与较短的总生存时间显着相关;lncRNA中则是高表达的NR＿073084、ENST00000565689、LOXL1-AS1、NR＿110232、ENST00000472494（HOTTIP）和ENST00000469148（PTPRG-AS1）与较短的总生存时间显着相关,其均具有评估预后的价值。本课题发现circ FOXO3在胃癌组织中表达水平显着高于癌旁组织,敲低其能够显着抑制AGS以及N87细胞的增殖、转移和侵袭能力,阻滞细胞周期的进程,并显着抑制动物体内瘤体的增长,故其可能在胃癌中发挥着原癌基因的效应。利用RNA-sequencing技术检测敲低circ FOXO3前后胃癌细胞中m RNA的表达变化,总共得到5104个差异基因。其中2378个基因的表达水平在敲低后显着上调,2726个基因的表达水平在敲低后显着下调。生物信息学预测显示circ FOXO3敲低后上调表达的基因主要富集在防御反应、固有免疫应答、免疫反应、病毒防御反应、免疫效应过程中。circ FOXO3敲低后下调表达基因广泛参与到代谢、翻译、有机物生物合成、生物合成、细胞周期等生物进程。本课题所构建的敲低circ FOXO3后上下调基因介导的蛋白质-蛋白质相互作用网络揭露了三个上调表达/三个下调表达的核心PPI网络,其内20个circ FOXO3下游核心基因中,CDK1、MYC、BRCA1、MCM3、RFC4、MX1、ISG15、OAS1、STAT1、DDX58、IFI35、RSAD2、B2M、DDX60、IFI27在胃癌中显着高表达。有趣的是,高表达的BRCA1、IFI35、MCM3、DDX60与胃癌患者较长的总体生存时间呈现明显相关性,而高表达的MX1、ISG15、DDX58、IFI27、RPS28、RPS20则与较短总生存显着相关。结论:本课题对胃癌中差异表达的m RNA、lncRNA和circRNA进行了综合分析,首次构建了复杂的调控网络以揭示这些RNA之间的相互作用,发现某些核心m RNA和lncRNA的失调与胃癌患者的总生存时间有关,为深入理解胃癌进展的机制以及探索胃癌的潜在治疗和预后靶标提供了有用的信息。通过对调控网络中处于核心地位的环状RNA circ FOXO3的进一步研究,证明了其在胃癌组织中显着高表达,而敲低circ FOXO3则能够显着降低胃癌细胞的增殖、周期、转移、侵袭进程和体内成瘤能力,且得知其可能参与肿瘤的免疫应答和代谢进程相关的信号通路调控,并发现数个circ FOXO3核心下游基因在胃癌中显着高表达且与患者的生存时间显着关联。首次,我们阐明了circ FOXO3在胃癌中的原癌效应,为寻找胃癌全新的生物靶标提供了思路。
黄品[6]（2020）在《基于金属有机聚合物膜界面的一氧化氮电化学传感研究》文中提出一氧化氮（NO）作为一种自由基小分子,是生物体内重要的细胞信号传导物质,在血管舒张,细胞凋亡和先天免疫反应等生理功能中起到重要作用。人体必需的NO可以在无生长因子的培养基中增强内皮细胞增殖,加速伤口愈合,但超标的NO也可能导致肿瘤疾病或诱发炎症。由于NO在生物体内的多重作用,发展生物组织和供体药物中NO释放量的检测方法具有重要意义。在现有的多种检测方法中,NO电化学传感器因其设备小巧、操作简单、响应快、灵敏度高等优点备受关注。目前,NO电化学传感器的研究热点主要在于开发高灵敏度、高选择性的NO传感膜界面材料。金属有机聚合物（MOPs）由于具有不饱和金属配位点和结构多样性等特点,在催化和分离领域受到广泛关注,近年来也开始应用于电化学传感器领域,但基于MOPs的NO电化学传感及电催化机理研究较少。本论文采用电化学沉积的方法构建了两种基于MOPs纳米材料的NO电化学传感膜界面,制备了两种高灵敏度高选择性的NO电化学传感器,并对NO自由基在药物及小鼠肝细胞内的释放进行了分析检测。主要内容包括以下两个部分:（1）采用阴极电沉积的方法在玻碳电极上沉积了Fe（II）-BTC聚合物纳米薄膜,制备了一种新型的NO模拟酶传感器。通过扫描电子显微镜,X射线能谱分析和傅里叶变换红外光谱等手段对Fe（II）-BTC聚合物薄膜的形貌和组成进行表征。采用伏安法,电化学阻抗谱,计时库仑法和计时电流法等多种技术研究了模拟酶传感器的电化学响应,提出了NO的电催化氧化机理。该模拟酶传感器对NO的电化学氧化表现出良好的催化活性,催化过程遵循Michaelis–Menten行为。该模拟酶传感器不仅具有制备简便,成本低,稳定性高的特点,而且具有较宽的线性检测范围(18 nmol L-1–9μmol L-1)和较低的检出限(7.2 nmol L-1)。该传感器被成功用于NO供体药物硝普钠（SNP）的NO光释放检测。（2）采用水热法合成了氨基官能化的Cu-MOFs,将Cu-MOF/Nafion分散液涂布在玻碳电极表面,通过电化学方法沉积纳米金颗粒（Au NPs）,制备得到了一种基于Cu-MOF/Nafion/Au NPs纳米复合膜界面的NO电化学传感器。通过扫描电镜,红外光谱等手段对传感界面材料进行了表征。扫描电镜结果显示Cu-MOF/Nafion/Au NPs复合膜具有特异的银耳花状结构。采用循环伏安法,电化学阻抗谱,计时电流法等电化学技术研究了该纳米复合材料对NO的电催化氧化性能。该NO电化学传感器的电流响应与NO浓度在18 nmol L-1–144μmol L-1范围内显示出两段良好的线性关系,检出限为1.8nmol L-1。另外,该传感器对NO具有较好的选择性,可以用于小鼠肝组织中NO的释放检测。
王申锋[7]（2020）在《“固元颗粒”免疫增强剂研制及其在鸡疫苗免疫中的应用》文中提出中药具有很好的增强免疫力的作用,成为当前替代饲料中抗生素添加的一个重要方向。“固元颗粒”原方出自《新药转正标准》,由黄芪和生晒参芦头配方而成,其功效是益气固本。如果直接将其应用于兽医临床,提高动物的免疫功能,成本偏高,很难在养殖业中推广。但是,人用中药加工过程中产生的一些附属提取物,以及在非贵重药材中提取到的一些有效成分,成本相对较低,具有开发兽医临床用药的潜力。为此,我们以黄芪多糖（Astragalus Polysaccharides,APS）和人参茎叶皂苷（Ginseng Stem-leaf Saponins,GSLS）代替“固元颗粒”配方中的黄芪和生晒参芦头,大幅降低成本,配伍组方,制成可溶性颗粒,称为兽用“固元颗粒”,用于增强动物抗病能力和疫苗免疫效果。本论文研究该制剂工艺、质量标准,并评估其对鸡的安全性、有效性和最适添加量。检测该制剂对免疫抑制条件下鸡和小鼠的免疫调节作用,初步揭示其对蛋鸡淋巴细胞TLR4信号通路的激活及相关细胞因子的分泌机制,并在蛋鸡鸡群进行应用试验,为预防禽病毒性疾病提供新方法。主要结果总结如下:1.优化并确定了“固元颗粒”的制剂工艺。通过制剂成型工艺预实验、辅料选择、润湿剂筛选和验证试验确定了最佳成型工艺。配方为:APS 110 g、GSLS100 g、蔗糖590 g和糊精200 g。制备工艺为:将上述原材料混合均匀,采用75%乙醇为润湿剂,制软材,制粒,60℃烘干,整粒。所得颗粒易成型,颗粒完整,细粉较少。3个试验批次所得颗粒质量一致,该工艺稳定可行。2.建立了“固元颗粒”中人参皂苷Rg1、Re、Rd含量的高效液相色谱测定方法。通过精密度试验、重复性试验、稳定性试验及回收率试验证实,RSD<2%,测定三批“固元颗粒”,每1 g颗粒中Rg1+Re+Rd总量均在30 mg以上。该方法操作简便,测量准确,可作为对该制剂质量控制的内容记入质量标准。3.“固元颗粒”具有良好的安全性和有效性。对鸡按推荐量的1、3、5、10倍（0.05、0.15、0.25和0.5 g/kg体重）剂量混饮,连续7 d,停药后继续饲养2周。记录鸡行为、体重的变化,检测血常规和血液生化指标以及脏器指数,结果均未见异常,表明该制剂对鸡临床用药具有较高的安全性。另外,不同剂量的“固元颗粒”均可有效提高蛋鸡的抗体效价水平、红细胞花环率和生产性能指标,其中50 mg/kg为最适应用剂量。“固元颗粒”对注射新城疫（ND）疫苗的鸡群具有免疫增强作用。使用50mg/kg该颗粒对鸡进行免疫调节试验,测定脏器指数、新城疫抗体效价和脾淋巴细胞转化指数,证实用药2-3周后其体内NDV抗体效价显着高于对照组（P<0.05）。“固元颗粒”对免疫抑制鸡具有免疫调理作用。对经环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）导致的免疫抑制鸡使用“固元颗粒”后,可使其免疫抑制现象得到显着缓解（P<0.05）。另外,在疫苗免疫后7、14和21d,上述4个给药处理组的脾淋巴细胞经刀豆蛋白A（ConA）和LPS诱导,淋巴细胞刺激指数均显着高于CTX组（P<0.05）。“固元颗粒”对免疫抑制小鼠亦有免疫调节作用。“固元颗粒”中、高剂量组可显着提高免疫抑制小鼠的脾脏指数和胸腺指数（P<0.05）。给药15 d后,免疫抑制小鼠IL-2和IFN-γ含量接近正常小鼠水平,其中“固元颗粒”中剂量组（50 mg/kg）效果最为明显。另外,各剂量组的脾淋巴细胞转化率与CTX组相比较极显着提升（P<0.01）。4.“固元颗粒”促进蛋鸡淋巴细胞TLR4信号通路的激活及相关细胞因子的分泌。分离蛋鸡外周血淋巴细胞,与不同浓度的“固元颗粒”（终浓度200、100、50、25、0μg/mL,阳性对照为浓度100μg/mL的APS）分别培养16 h、24h、32 h、48 h,采用RT-PCR方法检测淋巴细胞中TLR4、MyD88、TRAF-6、TRIF、IRF3、IFN-βmRNA表达量。收集培养24 h的淋巴细胞上清液,用ELISA测定cGMP、cAMP、NO、iNOS和Ca2+的含量。结果显示,“固元颗粒”通过TLR4受体激活MyD88依赖性和TRIF依赖性两条信号通路,还可降低鸡外周淋巴细胞培养上清中cAMP的含量,提高cGMP、Ca2+、NO和iNOS的含量,从而调节蛋鸡的免疫功能。5.“固元颗粒”在鸡群中应用可促进疫苗免疫效果。随机选择2栋鸡舍,分为“固元颗粒”+疫苗免疫组和单独疫苗免疫组,各3100只鸡,按剂量50 mg/kg体重饮水进行临床应用试验。结果显示,与单独疫苗对照组相比,“固元颗粒”试验组的疫苗免疫抗体效价显着提高,发病率和死亡率分别下降0.7和0.8个百分点,表明“固元颗粒”在大群临床试验中,能够有效降低发病率和死亡率,增加养殖收益。综上所述,本研究确定了“固元颗粒”稳定的制备工艺并制定了其质量标准,证实制剂安全有效。初步证实该颗粒制剂可通过TLR4受体激活MyD88和TRIF通路,降低cAMP含量,提高cGMP、Ca2+、NO、iNOS含量,从而调节鸡的免疫应答。“固元颗粒”能够明显提高蛋鸡的疫苗免疫后特异性抗体的分泌水平,降低发病率和死亡率,具有较好的应用前景。
张肖倩[8]（2020）在《参附芎泽方对HFpEF大鼠心脏微血管的保护及机制研究》文中指出[目的]本研究通过观察参附芎泽方对HFpEF模型Dahl-ss大鼠的心脏功能,心脏微血管改变及心肌VEGF信号通路相关蛋白表达的影响,旨在探讨参附芎泽方治疗HFpEF的作用及机制,为中医药防治HFpEF提供可靠的实验依据。[方法]1实验分组与样本采集1.1实验分组:将20只SPF级雄性Dahl-ss大鼠（180-200g）按随机数字表法分为对照组（control）、模型组（HFpEF）、中药组（SFXZF）、西药组（LCZ696）各5只。对照组（control）大鼠采用0.3%NaCl饮食喂养8周;模型组（model）大鼠采用8%NaCl高盐饮食喂养8周;中药组（SFXZF）为HFpEF造模成功后,采用参附芎泽方灌胃给药6.4g/ml,每天1次,共8周;西药组（LCZ696）为HFpEF造模成功后,采用沙库巴曲缬沙坦灌胃给药60mg/kg,每天1次,共8周。1.2样本采集:大鼠进行行为学指标检测后,给予戊巴比妥钠（30 mg/kg,腹腔注射）麻醉成功,复查M型超声心动图,心电图,腹主动脉取血,迅速取出心脏并去除大血管、脂肪等非心肌组织。分离的心脏组织一部分在4%多聚甲醛溶液中固定,另一部分置于-80℃冰箱保存备用。2检测指标:2.1行为学检测:观察各组大鼠一般情况,主要包括体质量、肛温、跑步实验、游泳力竭实验等。2.2心功能检测:M型超声心动图观测LVEF变化情况;心电图测量心率及各波电压时间变化情况;ELISA法检测大鼠血清指标观察BNP及NT-ProBNP变化情况。2.3形态学检测:HE染色法观察大鼠心肌细胞和心脏微血管形态学改变,Masson染色观察大鼠心肌组织和心脏血管周围胶原纤维增生情况;免疫组化检测VEGF的阳性表达情况,免疫荧光检测:vWF和CD31的表达情况。2.4 Western Blotting检测:各组大鼠心肌组织的cdc42、p38、MAPKAPK和HSP27蛋白表达变化。[结果]1行为学检测1.1体质量与control组相比,8%NaCl高盐饮食喂养8周中,model组大鼠体质量显着减少（P<0.05）,呈显缓慢增长后下降趋势;药物干预8周后,与model组相比,SFXZF组和LCZ696组大鼠体质量增加,呈上升趋势（P<0.05）,差异具有统计学意义;表明参附芎泽方可改善大鼠消瘦症状。1.2肛温与control组相比,model组大鼠肛温降低（P<0.05）,与model组相比,SFXZF组和LCZ696组大鼠肛温升高（P<0.05）,差异具有统计学意义;与control组相比,SFXZF组和LCZ696组相比大鼠肛温无明显变化（P>0.05）。1.3跑步实验:与control组相比,model组大鼠跑步时间缩短（P<0.05）;与model组相比,SFXZF组和LCZ696组大鼠跑步时间延长（P<0.05）,差异具有统计学意义;与control组相比,SFXZF组和LCZ696组相比大鼠跑步时间无明显变化（P>0.05）。1.4游泳力竭实验:与control组相比,model组大鼠游泳力竭时间缩短（P<0.05）;与model组相比,SFXZF组和LCZ696组大鼠游泳力竭时间延长（P<0.05）,差异具有统计学意义;与control组相比,SFXZF组和LCZ696组相比大鼠游泳力竭时间无明显变化（P>0.05）。2心功能检测2.1大鼠超声心动图与control组相比,model组大鼠LVEF值降低（P<0.05）;与model组相比,SFXZF组和LCZ696组大鼠LVEF值升高（P<0.05）,差异具有统计学意义。2.2大鼠心电图与control组相比,model组大鼠心率增加,P波振幅增大,PR间期时长缩短,T波振幅减小（P<0.05）;与model组相比,SFXZF组和LCZ696组大鼠心率减慢,P波振幅减小,PR间期时长延长,T波振幅增大（P<0.05）,差异具有统计学意义。2.3大鼠血清BNP及NT-ProBNP改变与control组相比,model组大鼠血清BNP及NT-ProBNP显着增加（P<0.05）,与model组相比,SFXZF组和LCZ696组大鼠血清BNP及NT-ProBNP减小（P<0.05）;与control组相比,SFXZF组和LCZ696组相比大鼠血清BNP及NT-ProBNP无明显变化（P>0.05）。结果表明,参附芎泽方可以改善大鼠心力衰竭程度。3形态学检测:3.1 HE染色:control组心肌细胞排列整齐,细胞核大小基本一致,心肌纤维横纹清晰,无肿胀及萎缩,具有较好连续性,呈相对平行排列分布;血管壁结构完整,薄厚均一,血管内膜排列规则,呈正常的血管环状形态。与control组比较,model组心肌细胞排列紊乱,血管壁结构紊乱,薄厚不一,细胞核大小不一致,心肌纤维大部分可见断裂、溶解;血管病变严重,血管基底膜增厚。与model组相比,LCZ696组和SFXZF组心肌细胞排列较整齐,心肌细胞大小基本一致,血管壁结构完整规则,薄厚均一,血管环状形态相对规整,model组相比血管的结构病变情况好转。结果表示,参附芎泽方能够促进心肌细胞恢复正常,减轻心肌纤维断裂、溶解,改善心脏血管内皮损伤。3.2Masson染色:control组心肌细胞排列整齐,细胞间质及血管周围略有少量蓝色胶原纤维;与control组相比,model组视野显示,大量的胶原纤维呈蓝色分布在心肌间质中,血管周围可见大量纵横交织的胶原纤维,胶原纤维堆积显着增加,纤维化程度显着加重（P<0.05）,差异具有统计学意义。与model组相比,LCZ696组和SFXZF组胶原纤维呈分支状排列在心肌细胞间质中,血管周围胶原纤维堆积程度减轻,心肌纤维化程度显着减缓（P<0.05）,差异具有统计学意义。详情如图8。参附芎泽方能够减少心射血分数保留型心力衰竭大鼠心肌胶原纤维沉积,减少其血管周围胶原纤维沉积。3.3免疫组化染色:大鼠心脏组织VEGF免疫组化control组大鼠心肌血管壁周围可见少量阳性表达,与control组相比,model组黄褐色颗粒显着增加,VEGF蛋白表达明显增加（P<0.05）,差异具有统计学意义;与model组相比,SFXZF组和LCZ696组VEGF蛋白呈现不同程度的下降,（P<0.05）,差异具有统计学意义。结果说明参附芎泽方能够降低VEGF蛋白表达。3.4免疫荧光:各组大鼠心脏组织vWF阳性表达与control组相比,model组vWF蛋白表达显着增加（P<0.05）,差异具有统计学意义;与model组相比,SFXZF组和LCZ696组大鼠vWF蛋白表达显着减小（P<0.05）,差异具有统计学意义;与control组相比,SFXZF组和LCZ696组相比大鼠vWF蛋白表达无明显变化（P>0.05）。各组大鼠心脏组织CD31阳性表达与control组相比,model组CD31蛋白表达显着增加（P<0.05）,差异具有统计学意义;与model组相比,SFXZF组和LCZ696组大鼠CD31蛋白表达显着减少（P<0.05）,差异具有统计学意义;与control组相比,SFXZF组和LCZ696组相比大鼠CD31蛋白表达无明显变化（P>0.05）。4 Western Blotting大鼠心脏VEGF通路相关蛋白表达免疫组化及Western Blot检测方法观察,探究参附芎泽方对HFpEF大鼠VEGF传导途径的具体影响。与control组相比,model组p38、HSP27、cdc42、MPKAPK均显着蛋白上调（P<0.05）,与model组相比,SFXZF组和LCZ696组该蛋白均显着下调（P<0.05）,差异具有统计学意义。表明参附芎泽方能够上调HFpEF模型大鼠心肌细胞VEGF传导途径p38、HSP27、cdc42、MPKAPK蛋白。[结论]1参附芎泽方可以明显改善HFpEF大鼠心功能,改善心脏微血管损伤,心肌损伤,减少大鼠心肌纤维化组织及血管周围胶原纤维表达。2参附芎泽方干预HFpEF的机制可能是通过抑制心肌组织VEGF通路相关蛋白cdc42、p38、MAPKAPK和HSP27等蛋白的表达,改善心脏微血管障碍,减轻HFpEF。
刘雪琪[9]（2020）在《吴茱萸次碱衍生物Ru-4对肾毒性急性肾损伤的防治作用及相关机制研究》文中进行了进一步梳理背景和目的:急性肾损伤（Acute kidney injury,AKI）以是一种由多病因引起的,以肾功能迅速下降为特征的临床综合征。引起AKI的原因包括药物毒性,缺血再灌注,脓毒血症等。AKI是住院患者最常见的并发症之一,其发病率日益增加,尤其在老年人中具有高发病率和高死亡率,尽管有一定比例AKI患者肾脏会发生自我修复过程,但严重或反复发生的AKI仍可能转变为慢性肾脏病（CKD）甚至终末期肾脏病。由于目前AKI的治疗仅包括对症支持治疗和肾脏替代治疗,仍缺乏有效的治疗药物和关键靶点,因此寻找AKI的治疗药物具有重要意义。传统中药（TCMs）是以传统中医药理论作为指导,拥有独特的应用形式和理论体系,被用于疾病的防治以及具有保健作用的天然药物或其加工替代品,主要包括植物药、矿物药、动物药等等。由于它具有较低毒副作用的特点,近年来越来越多的研究尝试将中药运用于临床疾病的治疗,而青蒿素在疟疾治疗中的成功应用更证实了天然化合物的潜在价值。本课题组前期通过构建体外和体内AKI模型,初步鉴定出一系列具有抗炎、抗细胞死亡作用的中药单体及其衍生物包括汉黄芩素、葛根素、淫羊藿苷、原儿茶醛、吴茱萸次碱等。前期研究结果显示,从传统中药吴茱萸中提取出的化学单体吴茱萸次碱（Ru）对肾小管上皮细胞损伤具有良好的保护作用。我们通过对吴茱萸次碱的结构改造,增加其选择性,降低其副作用,获得了一系列3-芳香族磺酰胺取代的吴茱萸次碱衍生物。本课题进一步探究吴茱萸次碱衍生物对顺铂诱导的急性肾损伤的保护功能及其作用机制,为急性肾损伤寻找潜在的治疗靶点和新的思路。方法:体外实验:选取第6至15代之间的人肾小管上皮细胞（HK2）用于实验。首先通过MTT筛选药物最适治疗浓度。该实验分为六组:正常对照组,单独给药组,顺铂模型组,低剂量给药组,中剂量给药组,高剂量给药组。提取细胞蛋白和m RNA,通过Western blot,免疫荧光,Real-time PCR检测肾脏损伤因子1（KIM-1）表达,采用Western blot,Real-time PCR检测肾脏炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6的释放,炎症通路关键蛋白NF-kB-P65的磷酸化,运用Western blot检测程序性坏死关键蛋白RIPK1/RIPK3/MLKL的表达,凋亡金指标Cleaved-Caspase3的变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平。最后运用Western blot检测氧化应激NOX家族重要成员NOX1,NOX2,NOX4的表达,DCF、DHE检测细胞内氧化应激水平。运用公共预测网站DS2017进行药物靶点预测,采取分子对接、CESTA实验验证药物与靶点PDE4B的结合。运用Western blot,免疫荧光检测靶蛋白PDE4B的表达。通过si RNA转染沉默PDE4B表达,运用Western blot,Real-time PCR检测PDE4B沉默后,吴茱萸次碱衍生物对肾小管上皮细胞炎症反应,细胞程序性死亡的影响。采用PDE4抑制剂咯利普兰（Rolipram）作为阳性对照组,运用Western blot,Real-time PCR检测药物选择性抑制PDE4B是否具有更好的保护作用。体内实验:通过小鼠腹腔注射顺铂（20 mg/kg）构建急性肾损伤模型,分别给予吴茱萸次碱四号衍生物Ru-4（25,50,和100 mg/kg）治疗。该实验分为六组（n=8）:正常对照组,单独给药组,顺铂模型组,低剂量给药组,中剂量给药组,高剂量给药组,吴茱萸次碱母核给药组。造模成功后,通过血肌酐和尿素氮检测观察各组小鼠肾功能变化,运用PAS染色对比各组肾小管形态学改变,通过Western blot,免疫组化,Real-time PCR检测肾脏损伤因子1（KIM-1）表达。同样采用Western blot,免疫组化,Real-time PCR检测肾脏炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6的m RNA表达水平,炎症通路关键蛋白NF-kB-P65的磷酸化,以及药物靶蛋白PDE4B的表达变化。最后运用Western blot检测程序性坏死关键蛋白RIPK1/RIPK3/MLKL的表达,凋亡金指标Cleaved Caspase3的变化以及氧化应激NOX家族重要成员NOX1,NOX2,NOX4的表达。结果:体外实验:MTT显示,在吴茱萸次碱系列衍生物中,Ru-4和Ru-7具有最好的细胞保护作用。同时Western blot结果表明Ru-4具有比吴茱萸次碱母核以及Ru-7更好的减轻肾小管上皮细胞损伤的作用。免疫荧光,Real-time PCR同样证实Ru-4可以减轻KIM-1的表达。Western blot,Real-time PCR也表明Ru-4可以减轻炎症因子TNF-α,IL-1β,IL-6的释放以及NF-kB-P65的磷酸化。此外,流式细胞术显示在经过Ru-4治疗后,细胞凋亡水平明显减轻,Western blot同样表明程序性坏死关键蛋白RIPK1/RIPK3/MLKL以及凋亡金指标Cleaved Caspase3的减少。最后DCF染色、DHE染色以及Western blot也证实了Ru-4可以减轻氧化应激的发生。通过分子生物学预测,分子对接以及细胞热位移实验（CESTA）均证实了磷酸二酯酶4B（PDE4B）为Ru-4的可能作用靶点。Western blot、免疫荧光也表明Ru-4可以减轻PDE4B蛋白水平的表达,并增加c AMP的含量。同时我们在沉默PDE4B的细胞上,予以Ru-4治疗后,Western blot结果显示PDE4B沉默可以减轻肾小管上皮细胞损伤,但药物无法进一步逆转顺铂诱导的细胞损伤。同时Western blot也表明加入PDE4抑制剂咯利普兰（rolipram）干预后,靶向抑制PDE4B在顺铂处理后的肾小管上皮细胞中具有更好的保护作用。因此我们证明了Ru-4通过PDE4B依赖的途径发挥作用。体内实验:血清肌酐和尿素氮结果表明,Ru-4可以明显逆转顺铂诱导的肾功能减退。同样肾脏PAS染色显示药物减轻肾小管扩张。Western blot、免疫组化和Real-time PCR证实急性肾损伤标志蛋白肾损伤因子1（KIM-1）也有所减轻。同时我们也发现Ru-4可以缓解顺铂诱导的肾脏细胞程序性死亡、炎症反应以及氧化应激的发生。结论:（1）体外研究显示,Ru-4抑制顺铂诱导的肾小管上皮细胞损伤、炎症反应、程序性死亡和氧化应激,并具有比传统PDE4抑制剂咯利普兰更好的细胞保护作用;（2）体外研究显示,经过公共预测网站、分子对接以及CESTA实验证明Ru-4可能通过靶向PDE4B发挥作用。在PDE4B沉默的细胞中,Ru-4不能进一步减轻顺铂诱导的HK2细胞损伤、炎症反应及程序性死亡,提示Ru-4可能通过PDE4B依赖性机制对顺铂诱导的HK2细胞损伤起保护作用;（3）体内实验显示,Ru-4有效抑制顺铂诱导的小鼠急性肾损伤导致的肾功能下降、细胞程序性死亡、炎症反应和氧化应激的发生,具有良好的应用前景;
杨华珍[10]（2020）在《锰氧化物功能纳米材料用于抑制内皮炎症防治动脉粥样硬化研究》文中研究表明动脉粥样硬化（AS）是指在动脉血管壁上积聚类似于黄色粥样状的脂质斑块的慢性炎症性疾病。研究显示,在AS病变易发区,血液流动方式由层流变为湍流,产生异常的剪切应力,使血管内皮细胞中促炎因子水平升高,从而激活多个炎症信号传导通路,导致血管内皮细胞中氧化还原态失衡,蛋白质发生氧化修饰以及生物学形态、结构、功能状态的改变,最终导致斑块的形成。近年来,由AS引发的多种急性心脑血管事件逐年升高,已成为威胁人类健康的第一大疾病。因此,如何有效的治疗AS是现阶段心血管领域的一大难题。目前常用于防治AS的手段主要是药物治疗（调血脂、抗血小板、抗凝等）和外科手术等。但是上述方法均存在不足之处,例如烟酸和他汀类药物容易导致肝功能异常、胃肠道症状、白内障等副作用,并且药物缺乏靶向性、特异性不强,调控方式不可控;而外科手术治疗价格昂贵且容易复发,不能从根本上阻止斑块的发展。因此,如何安全有效的治疗AS,仍然是心血管研究领域的重难点。近年来,逐渐兴起的纳米技术为解决上述问题提供了契机,许多基于纳米材料的治疗方法受到广泛关注和研究。纳米材料具有较高的时空分辨率,已成为调控蛋白质功能的有力的工具,有望从分子水平上,发展一种安全高效、特异性强、毒副作用小、生物相容性好的策略用于精准调控细胞信号通路来防治AS斑块的形成。已有研究证明稳定层流诱导的高剪切应力和抗氧化效应能够通过调控相应的信号通路起到抗AS的作用。但目前已开发的层流模拟剂和抗氧化药物均存在毒副作用大、靶向性不强以及生物利用度低等缺陷。研究表明,锰氧化物纳米材料因其具备优良的物理化学特性,例如电磁、光电以及催化性能等,使它在疾病诊疗等方面有着极大的应用前景。MnO2纳米颗粒能够在斑块微环境下分解成Mn2+,以模拟层流效应。而Mn3O4是一种抗氧化剂,可以逆转蛋白质巯基亚硝基化作用,起到抗炎的效果。因此,锰氧化物纳米材料有望为AS的防治提供有力工具。鉴于此,本文利用锰氧化物纳米材料,并予以仿生内皮细胞膜、内皮靶向肽功能化修饰,基于Mn2+对整合素的激活和Mn3O4的抗氧化特性,实现了炎症信号通路的精准调控以及提高了对斑块的靶向能力,有助于对AS进行高效的抗炎抗氧化治疗:1.针对血管中暴露于稳定血流诱导的层状剪切应力（LSS）的区域具有抗炎和AS保护作用,我们设计了一种仿生的高性能层流模拟剂。主要由还原性可分离的牛血清白蛋白（BSA）-MnO2纳米颗粒和内皮细胞（EC）膜包裹构成,用于精准调控炎症信号通路以延缓AS的发生。得益于表面的功能化,MnO2纳米颗粒被赋予了同源靶向和免疫逃逸能力,极大地改善了其在体内的斑块积累和保留能力。一旦进入斑块内,EC-BSA-MnO2纳米颗粒中的MnO2会与大量斑块代谢物（H2O2和H+）发生反应,原位可控释放Mn2+,从而有效抑制整合素偶联的炎症信号通路。并且,高脂饮食的载脂蛋白E缺陷（ApoE-/-）小鼠的主动脉内巨噬细胞累积和斑块形成明显减少,且无明显毒副作用。因此,本研究结果表明,这种还原性分离的仿生纳米颗粒EC-BSA-MnO2是一种安全有效的延缓AS的工具。2.针对核转录因子KLF4发生亚硝基化后,其转录活性和核定位会降低,进而导致血管内皮功能受损。因此,我们构建了一种功能化的四氧化三锰（Mn3O4）纳米材料,以精准高效调控内皮炎症。此材料是由花状的Mn3O4纳米颗粒和血管内皮细胞靶向肽（VHPK）构成,VHPK上的NH2-和Mn3O4纳米颗粒的-COOH通过反应生成酰胺键连接在一起。研究结果发现,我们合成的VHPK-Mn3O4不仅具有良好的生物相容性,而且还能够特异性地靶向血管内皮细胞。在细胞水平上,VHPK-Mn3O4可通过抗氧化作用有效逆转GSNO诱导下的KLF4的亚硝基化,增强其核定位和转录翻译能力,从而靶蛋白eNOS水平升高,有明显的抗炎效果,后期研究有望实现活体内AS斑块的有效治疗。
二、Cellular Signaling with Nitric Oxide and Cyclic GMP（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Cellular Signaling with Nitric Oxide and Cyclic GMP（论文提纲范文）
（1）细胞色素P450 1A1对巨噬细胞中一氧化氮生成的影响（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 细胞色素P4501A1在感染和炎症中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（2）延边朝鲜族GUCY1A3基因rs7692387位点多态性与冠心病的相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表(Abbreviations) |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验仪器 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验研究对象 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.5 统计学分析 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 DNA电泳结果 |
| 3.2 基因测序结果 |
| 3.3 朝鲜族人群rs7692387位点SNP与冠心病相关性 |
| 3.4 朝鲜族人群男性rs7692387位点SNP分析 |
| 3.5 朝鲜族人群女性rs7692387位点SNP分析 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 综述 GUCY1A3基因研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录:攻读学位期间发表的文章 |
（3）小鼠神经细胞中CBS催化生成的H2S对脑微血管内皮细胞增殖、迁移和形成血管的影响及与VEGFR2的关系（论文提纲范文）
| 英文缩略词(Abbreviation) |
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 细胞株 |
| 2.2 药品与试剂 |
| 2.3 仪器与设备 |
| 3 实验方法与研究内容 |
| 3.1 实验相关溶液和药物的配制 |
| 3.2 细胞处理 |
| 3.2.1 细胞培养与传代 |
| 3.2.2 细胞冻存 |
| 3.2.3 细胞复苏 |
| 3.2.4 细胞共培养 |
| 3.2.5 si RNA转染处理 |
| 3.3 Western blot法检测VEGFR_2蛋白的表达 |
| 3.3.1 提取总蛋白 |
| 3.3.2 BCA法测蛋白的浓度 |
| 3.3.3 蛋白变性 |
| 3.3.4 WB实验 |
| 3.4 CCK-8 增殖实验 |
| 3.5 细胞划痕实验 |
| 3.6 Transwell细胞迁移实验 |
| 3.7 内源性H_2S含量的甲基蓝法 |
| 3.8 细胞内游离Ca~(2+)浓度的钙荧光成像法 |
| 3.9 内皮细胞成管实验 |
| 3.10 统计学处理 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 外源性H_2S引起的内皮细胞的增殖迁移及与VEGFR_2的关系 |
| 4.1.1 Na HS促进小鼠脑微血管和人脐静脉内皮细胞的增殖 |
| 4.1.2 SU5416对Na HS诱导的小鼠脑微血管和人脐静脉内皮细胞的增殖的影响 |
| 4.1.3 Na HS促进小鼠脑微血管和人脐静脉内皮细胞迁移及SU5416 对其的影响 |
| 4.2 神经源性H_2S引起的小鼠脑微血管内皮细胞的增殖迁移及与VEGFR_2的关系 |
| 4.2.1 L-Cys单用及合用AOAA或 SU5416 对小鼠海马神经元和内皮细胞共培养中H_2S生成的影响 |
| 4.2.2 神经元CBS产生的H_2S促进b End.3 内皮细胞的增殖和迁移 |
| 4.2.3 阻断VEGFR_2对神经元CBS产生的H_2S促 b End.3 细胞的增殖和迁移的影响 |
| 4.2.4 L-Cys单用及合用AOAA或 SU5416对共培养中小鼠脑微血管内皮细胞的胞内游离的Ca~(2+)浓度的影响 |
| 4.2.5 神经元CBS产生的 H_2S的促增殖和迁移作用在VEGFR_2-si RNA转染的 b End.3 细胞中的变化 |
| 4.3 外源性和神经源性H_2S对小鼠脑微血管内皮细胞生成血管的影响及与VEGFR_2的关系 |
| 4.3.1 NaHS对小鼠脑微血管内皮细胞生成血管的影响及与VEGFR_2的关系 |
| 4.3.2 神经元CBS产生的H_2S对小鼠脑微血管内皮细胞生成血管的影响 |
| 5 讨论 |
| 5.1 H_2S在内皮细胞的增殖和迁移中的作用 |
| 5.2 神经源性H_2S在脑血管内皮细胞的增殖、迁移中的作用.. |
| 5.3 神经源性H_2S在脑血管内皮细胞形成血管中的作用 |
| 5.4 神经源性H_2S促进脑血管内皮细胞增殖、迁移和形成血管作用的机制 |
| 5.4.1 促进脑血管内皮细胞增殖、迁移作用与VEGFR_2的关系 |
| 5.4.2 通过脑血管内皮细胞VEGFR_2升高胞内游离Ca~(2+)来促细胞增殖和迁移 |
| 5.4.3 促进脑血管内皮细胞形成血管作用与VEGFR_2的关系 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 H_2S 与血管生成生物学 |
| 参考文献 |
（4）嘧啶和吡唑并嘧啶类衍生物的设计、合成及抗炎活性研究（论文提纲范文）
| 中英文缩写词对照(Abbreviations) |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1.前言 |
| 1.1 本课题的实验设计思路 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 材料与试剂——化学合成 |
| 2.1.2 材料与试剂——抗炎活性筛选和机制研究 |
| 2.2 仪器与设备 |
| 2.2.1 仪器与设备——化学合成 |
| 2.2.2 仪器与设备——抗炎活性筛选和机制研究 |
| 2.3 化学合成方法 |
| 2.3.1 化合物5a-g的合成 |
| 2.3.2 化合物6a-g的合成 |
| 2.3.3 化合物7a-g的合成 |
| 2.3.4 化合物8a-g的合成 |
| 2.3.5 化合物11a-d的合成 |
| 2.3.6 化合物12a-c的合成 |
| 2.3.7 化合物13a-e的合成 |
| 2.4 MTT法检测嘧啶类衍生物的细胞毒性 |
| 2.5 NO 产生评价 |
| 3.结果 |
| 3.1 化学合成部分 |
| 3.2 MTT法检测化合物对RAW264.7 细胞活力的影响 |
| 3.3 化合物抑制NO的释放实验 |
| 3.4 化合物对人正常肝细胞的毒性 |
| 3.5 化合物油水分配系数测定 |
| 3.6 化合物油水分配系数测定和毒性分析 |
| 4.构效关系分析 |
| 5.结论 |
| 6.参考文献 |
| 附图:(化合物核磁谱图) |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 诱导型一氧化氮合酶:调控、结构和抑制 |
| 参考文献 |
（5）胃癌中差异表达mRNA、lncRNA、circRNA的鉴定分析及核心circRNA circFOXO3的功能与作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 胃癌中差异表达的mRNA、lncRNA和circRNA调控网络的构建及分析 |
| 一、实验方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 circFOXO3在胃癌增殖和转移进程中的功能 |
| 一、材料和试剂 |
| 二、实验方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结与展望 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（6）基于金属有机聚合物膜界面的一氧化氮电化学传感研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 一氧化氮概述 |
| 1.1.1 NO的形成 |
| 1.1.2 NO的作用 |
| 1.1.3 常见的NO检测方法 |
| 1.2 纳米材料在NO检测中的应用 |
| 1.2.1 碳纳米材料 |
| 1.2.2 金属纳米材料 |
| 1.2.3 金属氧化物纳米材料 |
| 1.2.4 其他纳米材料 |
| 1.3 金属有机聚合物 |
| 1.3.1 金属有机配合物 |
| 1.3.2 金属有机框架 |
| 1.3.3 金属有机聚合物在电化学传感中的应用 |
| 1.4 本课题选题依据与研究内容 |
| 第2章 基于Fe(II)-BTC纳米界面的NO模拟酶传感器的制备及应用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 仪器与试剂 |
| 2.2.2 NO饱和溶液的制备 |
| 2.2.3 NO模拟酶传感器的制备 |
| 2.2.4 NO电化学测定程序 |
| 2.2.5 实际样品检测 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 Fe(II)-BTC的 SEM表征和红外表征 |
| 2.3.2 Fe(II)-BTC的电化学性能表征 |
| 2.3.3 Fe(II)-BTC成膜机理探究 |
| 2.3.4 p H值对NO氧化的影响 |
| 2.3.5 Fe(II)-BTC膜催化NO氧化机理 |
| 2.3.6 NO模拟酶传感器的安倍响应 |
| 2.3.7 NO模拟酶传感器的催化动力学 |
| 2.3.8 NO模拟酶传感器的稳定性、重复性以及抗干扰能力考察 |
| 2.3.9 实际样品分析 |
| 2.4 结论 |
| 第3章 基于Cu-MOF/Nafion/Au NPs复合膜界面的NO传感器的制备与应用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 仪器与试剂 |
| 3.2.2 NO传感器的制备 |
| 3.2.3 NO电化学分析程序 |
| 3.2.4 小鼠肝组织中NO释放监测 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 复合膜的SEM表征和红外表征 |
| 3.3.2 复合膜的电化学表征 |
| 3.3.3 复合膜制备条件优化 |
| 3.3.4 NO在不同膜电极上的响应 |
| 3.3.5 NO传感器的安倍响应 |
| 3.3.6 NO传感器的重现性和稳定性和抗干扰能力 |
| 3.3.7 小鼠肝组织中NO释放的在线检测 |
| 3.4 结论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（7）“固元颗粒”免疫增强剂研制及其在鸡疫苗免疫中的应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 中药免疫增强剂的研究进展 |
| 1.1 免疫增强剂的分类 |
| 1.2 中药免疫增强剂概述 |
| 1.3 中药免疫增强剂的有效成分 |
| 1.4 中药免疫增强剂的作用机理 |
| 1.5 人参、黄芪免疫增强作用研究进展 |
| 1.6 中药免疫增强剂在养禽业中的应用 |
| 第二章 中药对TOLL样受体和信号传导的研究进展 |
| 2.1 先天性免疫 |
| 2.2 ToLL样受体 |
| 2.3 中药对TLRs信号传导途径的研究 |
| 2.4 中药对信号转导的影响 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第一章 “固元颗粒”制剂工艺研究 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二章 “固元颗粒”质量标准研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 “固元颗粒”的安全性和有效性研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.3 试验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 “固元颗粒”对蛋鸡TLR4 信号通路及胞内分子的调节 |
| 4.1 材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 “固元颗粒”在蛋鸡疫苗免疫中的应用 |
| 5.1 材料 |
| 5.2 方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（8）参附芎泽方对HFpEF大鼠心脏微血管的保护及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 综述 |
| 1 射血分数保留型心力衰竭定义及流行病学 |
| 2 射血分数保留型心力衰竭的西医治疗 |
| 3 射血分数保留型心力衰竭的机制 |
| 3.1 心脏微循环障碍在射血分数保留型心力衰竭中的作用 |
| 3.2 VEGF信号通路在心脏微循环障碍的作用 |
| 4 射血分数保留型心力衰竭的中医治疗 |
| 4.1 中医对于射血分数保留型心力衰竭的认识 |
| 4.2 中医药防治射血分数保留型心力衰竭的研究现况 |
| 实验研究 |
| 实验一:大鼠射血分数保留型心力衰竭的模型制备 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二:参附芎泽方对HFpEF大鼠心脏微血管保护作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三:VEGF通路在参附芎泽方保护HFpEF大鼠心脏微血管的作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 中英文对照表 |
| 致谢 |
| 在学期间主要成果 |
（9）吴茱萸次碱衍生物Ru-4对肾毒性急性肾损伤的防治作用及相关机制研究（论文提纲范文）
| 中文英文缩写词对照表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 2.实验材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 药物制备 |
| 2.3 实验试剂 |
| 2.3.1 抗体 |
| 2.3.2 主要试剂 |
| 2.4 仪器与设备 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 动物模型 |
| 3.2 细胞培养 |
| 3.3 MTT实验检测细胞活性 |
| 3.4 Western Blot |
| 3.4.1 蛋白提取 |
| 3.4.2 SDA-PAGE电泳 |
| 3.4.3 转膜 |
| 3.4.4 抗体孵育 |
| 3.4.5 显影 |
| 3.5 RNA提取和Real-time PCR |
| 3.5.1 RNA提取 |
| 3.5.2 RNA浓度测定 |
| 3.5.3 cDNA合成 |
| 3.5.4 Real-time PCR 扩增 |
| 3.6 流式细胞术 |
| 3.7 DCF检测 |
| 3.8 DHE检测 |
| 3.9 PDE4B si RNA转染实验 |
| 3.10 免疫荧光 |
| 3.11 分子对接 |
| 3.12 细胞热位移实验 |
| 3.13 血肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN)的检测 |
| 3.14 糖原染色和免疫组化实验 |
| 3.15 统计学方法 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 吴茱萸次碱及其衍生物减轻顺铂诱导的肾小管上皮细胞损伤 |
| 4.1.1 MTT检测吴茱萸次碱及其衍生物对人肾小管上皮细胞活性的影响 |
| 4.1.2 吴茱萸次碱及其衍生物减轻顺铂介导的HK2细胞损伤 |
| 4.2 吴茱萸次碱衍生物Ru-4减轻顺铂介导的细胞程序性死亡 |
| 4.3 吴茱萸次碱衍生物 Ru-4 减轻顺铂诱导的细胞炎症反应 |
| 4.4 吴茱萸次碱衍生物Ru-4减轻顺铂介导的细胞氧化应激反应 |
| 4.5 靶点预测 |
| 4.6 吴茱萸次碱衍生物Ru-4与PDE4B的结合 |
| 4.7 吴茱萸次碱衍生物Ru-4抑制顺铂刺激的HK2细胞中PDE4B信号传导 |
| 4.8 吴茱萸次碱衍生物Ru-4 通过PDE4B依赖性机制抑制顺铂诱导的炎症反应 |
| 4.9 吴茱萸次碱衍生物Ru-4通过PDE4B依赖性机制减少顺铂诱导的细胞损伤 |
| 4.10 与使用经典PDE4 抑制剂咯利普兰(rolipram)相比,吴茱萸次碱衍生物Ru-4 靶向PDE4B具有更好的细胞保护作用 |
| 4.11 吴茱萸次碱衍生物Ru-4在顺铂诱导的小鼠急性肾损伤中的保护作用 |
| 4.11.1 PAS染色和肾功能检测证实Ru-4减轻顺铂诱导的小鼠急性肾损伤 |
| 4.11.2 吴茱萸次碱衍生物Ru-4改善顺铂诱导的肾脏炎症反应 |
| 4.11.3 吴茱萸次碱衍生物Ru-4通过减轻细胞死亡并抑制NOX介导的氧化应激反应来预防顺铂引起的 AKI 的发生发展 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 7 参考文献 |
| 8 附录 |
| 9 致谢 |
| 10 综述 PDEs在肾脏疾病中的新发现 |
| 参考文献 |
（10）锰氧化物功能纳米材料用于抑制内皮炎症防治动脉粥样硬化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 动脉粥样硬化概述 |
| 1.1.1 动脉粥样硬化的研究现状 |
| 1.1.2 动脉粥样硬化的发生机制 |
| 1.1.3 动脉粥样硬化的治疗策略 |
| 1.2 动脉粥样硬化与炎症 |
| 1.2.1 动脉粥样硬化与内皮炎症 |
| 1.2.2 动脉粥样硬化与剪切应力 |
| 1.2.3 动脉粥样硬化与蛋白质巯基亚硝基化 |
| 1.3 动脉粥样硬化与纳米防治 |
| 1.3.1 纳米材料的简介 |
| 1.3.2 动脉粥样硬化的纳米防治 |
| 1.3.3 锰氧化物纳米材料的性质与应用 |
| 1.4 本论文的选题背景和研究意义 |
| 第二章 还原可降解的仿生智能纳米颗粒用于精准调控整合素偶联炎症信号以延缓动脉粥样硬化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 仪器与试剂 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 EC-BSA-MnO_2 的合成与表征 |
| 2.3.2 pH/H2O_2 响应的仿生智能纳米颗粒EC-BSA-MnO_2的Mn2+释放 |
| 2.3.3 EC-BSA-MnO_2 的同源靶向能力和免疫逃逸能力 |
| 2.3.4 EC-BSA-MnO_2 体外激活整合素信号 |
| 2.3.5 EC-BSA-MnO_2 的药物代谢动力学、体内斑块靶向能力和Mn2+的释放行为 |
| 2.3.6 EC-BSA-MnO_2 的抗脉粥样硬化效应 |
| 2.4 结论 |
| 第三章 功能化的抗氧化剂四氧化三锰纳米颗粒通过逆转KLF4的亚硝基化来抑制内皮炎症 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 仪器与试剂 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 VHPK-Mn_3O_4 的合成与表征 |
| 3.3.2 VHPK-Mn_3O_4 的细胞靶向性 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 作者发表的学术论文及参与的课题 |
| 致谢 |
四、Cellular Signaling with Nitric Oxide and Cyclic GMP（论文参考文献）
- [1]细胞色素P450 1A1对巨噬细胞中一氧化氮生成的影响[D]. 唐欣. 遵义医科大学, 2021(01)
- [2]延边朝鲜族GUCY1A3基因rs7692387位点多态性与冠心病的相关性研究[D]. 刘琪. 延边大学, 2021(02)
- [3]小鼠神经细胞中CBS催化生成的H2S对脑微血管内皮细胞增殖、迁移和形成血管的影响及与VEGFR2的关系[D]. 陈佳妮. 安徽医科大学, 2021(01)
- [4]嘧啶和吡唑并嘧啶类衍生物的设计、合成及抗炎活性研究[D]. 舒海洋. 安徽医科大学, 2021(01)
- [5]胃癌中差异表达mRNA、lncRNA、circRNA的鉴定分析及核心circRNA circFOXO3的功能与作用[D]. 张颖一. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(05)
- [6]基于金属有机聚合物膜界面的一氧化氮电化学传感研究[D]. 黄品. 湖北大学, 2020(02)
- [7]“固元颗粒”免疫增强剂研制及其在鸡疫苗免疫中的应用[D]. 王申锋. 吉林大学, 2020(08)
- [8]参附芎泽方对HFpEF大鼠心脏微血管的保护及机制研究[D]. 张肖倩. 陕西中医药大学, 2020(01)
- [9]吴茱萸次碱衍生物Ru-4对肾毒性急性肾损伤的防治作用及相关机制研究[D]. 刘雪琪. 安徽医科大学, 2020(02)
- [10]锰氧化物功能纳米材料用于抑制内皮炎症防治动脉粥样硬化研究[D]. 杨华珍. 山东师范大学, 2020(08)