甘露聚糖酶Man1602中的色氨酸修饰及其突变体性质的研究

甘露聚糖酶Man1602中的色氨酸修饰及其突变体性质的研究

论文摘要

为了揭示色氨酸残基与Man1602酶活力的关系,提高Man1602的表达量,笔者通过研究色氨酸专一化学修饰剂与甘露聚糖酶Man1602的反应,同时根据甘露聚糖酶Man1602的序列比对结果,推测色氨酸残基与酶活的关系,对保守位点的色氨酸进行定点突变,检测各突变体酶的活力变化。结果表明,色氨酸为甘露聚糖酶Man1602的活性必需氨基酸,其中W196和W199位点的突变导致酶活几乎完全丧失,可以推断W196和W199为活性中心的氨基酸,W198也具有较高保守性,但对其突变并未造成酶的完全失活,推断W198是维持活性中心疏水性的重要氨基酸。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 酶的荧光光谱分析
  •     1.2.2 甘露聚糖酶Man1602的色氨酸修饰反应
  •     1.2.3 酶活力的测定
  •     1.2.4 测定化学修饰反应的动力学参数, 对色氨酸与酶功能的关系作初步判断
  •     1.2.5 总DNA和质粒DNA的制备
  •     1.2.6 目的基因的克隆、回收与纯化以及与载体的连接和转化
  •     1.2.7 Man1602基因表达质粒的构建
  •     1.2.8 枯草杆菌感受态细胞制备
  •     1.2.9 甘露聚糖酶的定点突变的测定
  •     1.2.1 0 表达产物的SDS电泳检测
  • 2 结果与讨论
  •   2.1 甘露聚糖酶Man1602的荧光光谱
  •   2.2 色氨酸残基的修饰反应及其动力学
  •   2.3 甘露聚糖酶Man1602的定点突变及突变酶特性
  • 3 结语
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 雍婕,高晗,吴永尧,周海燕

    关键词: 甘露聚糖酶,色氨酸,化学修饰,定点突变

    来源: 食品与生物技术学报 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 湖南农业大学生物科学技术学院

    基金: 国家自然科学基金青年科学基金项目(31401637),湖南省教育厅科学基金项目(15K062)

    分类号: Q55

    页码: 45-49

    总页数: 5

    文件大小: 1908K

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