导读:本文包含了油乳剂灭活苗论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:疫苗,灭活,乳剂,肝炎,综合征,鉴定,病毒。
油乳剂灭活苗论文文献综述
刘陈针玉[1]（2019）在《鸭细小病毒病与鸭病毒性肝炎二联油乳剂灭活疫苗的初步研制》一文中研究指出鸭病毒性肝炎能够引起雏鸭大规模死亡,具有极强的传染性。近年来我国多个地区发生了引起鸭生长发育缓慢的鸭细小病毒病,与鸭病毒性肝炎存在混合感染的情况,给养鸭业带来了巨大的经济损失。本研究对鸭病毒性肝炎进行了流行病学调查和病原分离,运用鸭病毒性肝炎分离毒株与鸭细小病毒分离毒株试制了二联油乳剂灭活疫苗并开展了疫苗安全性评价,为该两种病的防控提供了技术支持。为了解鸭病毒性肝炎在我国鸭群中的流行和发病情况,通过临床诊断、病毒分离、PCR等方法对2017年10月~2018年11月从全国收集的20份疑似病料进行检测,结果为20份疑似病料中有鸭肝炎病毒1型(Duck hepatitis virus type 1,DHV-1)阳性病料11份,鸭肝炎病毒3型(Duck hepatitis virus type 3,DHV-3)阳性病料2份,主要发生于7日龄内雏鸭,10~30日龄鸭也有发生。将阳性病料处理后接种9日龄鸭胚传代5代,获得3株DHV-1分离毒株YN株、LY株、SG株,并测定其中YN株的ELD_(50)为10~(-3.75)/0.1 mL。对3株分离毒株进行测序,利用DNAstar软件将3株分离毒株的核苷酸序列与其他20株DHV-1参考毒株进行分析,结果表明YN株的核苷酸序列与参考毒株的核苷酸序列同源性为92.2%~97.7%,SG株与参考毒株之间核苷酸同源性为92.1%~97.6%,LY株与参考毒株之间核苷酸同源性为92.7%~98%,3株均与DHV-1具有较近的遗传进化关系,YN株与LY株核苷酸同源性为99.3%,YN株与SG株核苷酸同源性为99%,SG株与LY株核苷酸同源性为99.5%,遗传进化分析显示YN株与SG株亲缘关系最近,属一类分支。用YN株感染1日龄雏鸭进行动物回归实验,可复制出鸭病毒性肝炎的病例,病死鸭呈角弓反张姿势,剖检可见肝脏充血发黄肿胀,肾脏充血,结果表明从鸭病毒性肝炎自然病例分离到的DHV-1与鸭病毒性肝炎有关。扩繁实验室保存的鸭细小病毒SD株,测定其EID_(50)为10~(-3.5)/0.1 mL,将鸭肝炎病毒YN株与鸭细小病毒SD株过滤除菌后取等量病毒液混匀,经甲醛灭活之后加白油、司班-80等佐剂初步制备鸭细小病毒病与鸭病毒性肝炎二联油乳剂灭活疫苗,并对该疫苗的剂型、稳定性、黏度、安全性等进行检验。检验结果表明该疫苗的剂型为油包水型,具有良好的稳定性,黏度符合标准,且无菌检验和安全性检验均合格,注射动物体内无不良反应。本研究为鸭病毒性肝炎的流行病学调查提供了新的资源,同时,也为如何防控鸭细小病毒病与鸭病毒性肝炎的发生提供了理论依据。(本文来源于《河北农业大学》期刊2019-06-04）
王鸿志,张秉乾,刁有祥,唐熠[2]（2018）在《鹅呼肠孤病毒油乳剂灭活疫苗的制备》一文中研究指出引言鹅呼肠孤病毒感染,近年来在我国多个省份流行发生,严重危害我国养鹅业的健康发展。目前还没有针对GPV的商品化疫苗,相比于弱毒疫苗,灭活疫苗更安全、生产简单且易于保存,因此研究鹅呼肠孤病毒灭活疫苗势在必行。材料与方法 GPV疫苗种毒分离自江苏省某鹅场送检病料。9日龄SPF鸡胚购于山东省农科院家禽研究所,6日(本文来源于《中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集》期刊2018-11-21）
曾凡桂,刘佳佳,王占新,严专强,鲁俊鹏[3]（2018）在《禽脑脊髓炎油乳剂灭活疫苗与弱毒活疫苗免疫效果的比较研究》一文中研究指出采用28日龄SPF鸡,对禽脑脊髓炎油乳剂灭活疫苗及弱毒活疫苗进行了免疫效果评估。抗体检测结果表明,疫苗免疫后21日,油乳剂灭活疫苗免疫组抗体水平及抗体转阳率优于弱毒活疫苗免疫组。攻毒保护试验结果表明,禽脑脊髓炎油乳剂灭活苗及弱毒活疫苗均具有良好的免疫保护性,对禽脑脊髓炎病毒强毒VR株的保护率分别为100%、90%。综上所述,灭活疫苗和活疫苗均可有效预防禽脑脊髓炎。(本文来源于《广东畜牧兽医科技》期刊2018年05期）
刘吉山[4]（2018）在《Ⅰ群禽腺病毒分离鉴定与通用PCR检测及FAdV-4油乳剂灭活疫苗的研制》一文中研究指出采集山东省、江苏省发病肉鸡、蛋鸡、麻鸭的病料,用SPF鸡胚分离了14株FAdV毒株,病毒均不能凝集鸡红细胞,56℃、65℃处理30 min后病毒失活,pH3与pH9条件下处理60 min不完全失活,能够抵抗4.4%体积的氯仿4℃处理10 min;对Hexon蛋白部分基因进行测序分析与PCR-RELP定位病毒血清型,其中11株为FAdV-4血清型,其它3株分别为FAdV-8a、8b、11血清型;选择FAd V A-E 5个种12个血清型病毒DNA聚合酶基因高度同源序列设计引物,建立了一种理论上可通用检测FAdV的PCR方法,具有敏感、特异、快速等特点,可检测2.8×10~2拷贝及以上的病毒DNA,对鸡易感的DNA病毒EDSV、MDV、FPV检测均为阴性,检测阳性的新鲜病料均能分离到病毒,SPF鸡感染病毒后心、肝、脾、肺、肾、腺胃与肌肉样品检测均为阳性;克隆了FAdV-4分离株Hexon蛋白基因,其ORF均为2814 bp,编码937个氨基酸,与已发布的4型病毒核苷酸、氨基酸序列高度同源,核苷酸序列同源性在97.1%~99.7%之间,氨基酸序列与PK-01株同源性高达99.8%,遗传进化树分析表明,我国流行的FAdV-4毒株分属独立的基因群体。选择分离的4个血清型病毒回归感染SPF鸡,发病症状、剖检病变与临床病例一致,即表现为羽毛蓬乱、呆滞、鸡冠苍白,有的在2~4天后耐过恢复,剖检病死鸡可见典型心包积水、包涵体肝炎、肾脏肿胀,部分呈现腺胃出血、肌胃溃疡糜烂。将分离的FAdV-4病毒肌肉注射攻击SPF鸡,并测定病毒ELD50,结果表明,毒株致死率差异大,自40%到100%不等,ELD50同样差异较大,高的达10-7.84ELD50/0.2 mL,低的仅为10-5.0ELD50/0.2 mL,根据SPF鸡攻毒与ELD50测定结果,选择FAdV-4-sdbc-1作为制备灭活疫苗的候选毒株。为进一步保持种子的纯净性与稳定性,制备FAdV-4-sdbc-1毒株疫苗基础与生产种子批,基础种子病毒ELD50≥107.84/0.2 mL,攻毒30日龄SPF测得其LD50为10-4.84/1.0 mL;生产种子病毒ELD50≥10-8.0/0.2 mL,传代均不超过3代;按照生物品检验规程进行外源病毒、细菌、支原体等进行检测,外源ALV、REV、H5/H9 AIV、NDV、EDSV、IBV、ILT、IBDV、FPV、ARV、MDV检测均为阴性,无细菌、支原体污染;病毒在鸡胚传5至13代之间不影响病毒增殖特性和免疫原性。应用检验合格的生产种子生产抗原制备油包水型(W/O)油乳剂灭活疫苗,开展其制备工艺研究。首先将病毒含量≥10~(8.0)ELD_(50)/0.2 mL生产种子稀释10~(-2)接种6日龄鸡胚卵黄囊,收获96~144h后死亡胚卵黄液,病毒含量测定应≥10~(8.0)ELD_(50)/0.2 mL,加入等体积生理盐水制备抗原液,1‰甲醛溶液37℃灭活32 h制备半成品,根据《中国兽药典》进行灭活检验与无菌检验,合格后采用油相:水相3:2(V:V)的比例制备疫苗,经过外观、剂型、稳定性、粘度与无菌检验,甲醛含量测定等各项检验,制备的疫苗各项指标均达到设计要求。对制备的3批疫苗开展了油乳剂灭活疫苗(W/O)的安全性与效力评价及保存期研究。选择18日龄SPF鸡进行安全性检验,肌肉注射疫苗2 mL/只或间隔3天注射0.5 mL/只共3次,观察14天,安全性达100%。0.5 mL/羽为临床免疫使用剂量,经检测每羽份含有10.24 PD_(50)。效力检测采用攻毒和AGP检测抗体2种方法,3批疫苗分别免疫18日龄SPF鸡,21d后,攻毒1.0 mL FAdV-4-sdbc-1(含100 LD_(50)),观察14d,保护率100%,对照组全部死亡,同时检测免疫后14d、21d、42d的鸡血清,效价分别为1:2、1:8、1:16;疫苗4℃保存12个月、20℃保存6个月,其效力不变。该疫苗研制成功为防控该病提供了可靠的产品。(本文来源于《吉林大学》期刊2018-06-01）
胡亚歌[5]（2018）在《血清4型和8b型禽Ⅰ群腺病毒二价油乳剂灭活疫苗的研制》一文中研究指出鸡的心包积液综合征(hydropericardium hepatitis syndrome,HHS)和包涵体肝炎(inclusion body hepatitis,IBH)均是由禽Ⅰ群腺病毒引起的急性传染病。近年来,这两种疾病在我国的发病率呈上升趋势,给养鸡业造成很大的经济损失。禽Ⅰ群腺病毒分为A、B、C、D、E等5个基因型,按照血清型分为1、2、3、4、5、6、7、8a、8b、9、10、11型;基因型和血清型的对应关系为A(1)、B(5)、C(4、10)、D(2、3、9、11)、E(6、7、8a、8b)。当前我国HHS和IBH的主要病原分别是禽Ⅰ群腺病毒血清4型(FAdV-4)和血清8b型(FAdV-8b)。因此,研制FAdV-4和FAdV-8b二价油乳剂灭活疫苗具有重要的应用价值。1 FAdV-8b QD2016株的分离与鉴定本研究从山东某鸡场疑似发生IBH的病例中分离到1株禽腺病毒(命名为QD2016株)。设计了 33对引物,对QD2016株全基因组序列进行扩增、测定和生物信息学分析。(QD2016株基因组全长为43632bp,与禽Ⅰ群腺病毒E基因型CR119株、YR36株、TR59株、764株、HG株、UPM04217株、HLJ/151129株同属一个大的进化分支,核苷酸序列同源性介于93.4%～98.4%之间;QD2016株与UPM04217株亲缘关系最近,同属于FAdV-8b。2 FAdV-4和FAdV-8b二价油乳剂灭活疫苗的研制本研究以FAdV-8b QD2016株和实验室先前分离鉴定的FAdV-4 GX2013株研制二价油乳剂灭活疫苗。根据《中华人民共和国兽药典》的要求建立了两个毒株的种子库,经检验无禽白血病病毒(ALV)和网状内皮组织增生症病毒(REV)等外源病毒的污染。利用细胞工厂培养LMH细胞,用于扩增FAdV-4 GX2013株和FAdV-8b QD2016株。应用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR的方法,对扩增的病毒进行定量分析;确定扩增GX2013株和QD2016株的最佳感染复数分别为1.2和3.2,适宜的收毒时间均为接毒后72 h。病毒液经终浓度为1‰的甲醛灭活,以白油为佐剂制成油乳剂灭活疫苗。研制的疫苗为油包水剂型,物理性状稳定,无菌检验合格。取7日龄SPF鸡20只,分为2组,每组10只。第1组为免疫组,于颈部皮下接种制备的灭活疫苗,0.5mL/只;第2组为对照组,于颈部皮下接种等剂量的灭菌白油。接种后21 d内免疫组和对照组的鸡精神状况及采食量均正常,剖检未发现接种部位出现损伤、炎症及疫苗残留等现象,表明该疫苗的安全性良好。将7日龄SPF鸡分成6组,每组10只,分别免疫25 μL、50μL、100μL、250 μL和500μL疫苗,以及500μL灭菌白油(对照组)。免疫后21 d,每组各取5只鸡,分别用FAdV-4GX2013 株(105.5 TCID50/mL)和 FAdV-8bQD2016 株(105.5TCID50/mL)经肌肉注射进行攻毒,0.2 mL/只;分别于攻毒后3 d、5 d、7 d和10 d采集试验鸡的咽喉拭子和泄殖腔拭子,应用SYBR Green I实时荧光定量PCR的方法测定病毒含量。结果显示,攻毒后7 d内咽喉和泄殖腔排毒量相继达到高峰,其中25μL、50 μL和100μL免疫组的排毒量与对照组相比差异不显着(P>0.5),250 μL和500 μL免疫组的排毒量与对照组相比差异极显着(P<0.01),而这两个免疫组之间的排毒量差异不显着(P>0.5)。据此推测:疫苗的免疫剂量为250 μL和500 μL/只均能有效阻止排毒,建议的疫苗免疫剂量为250 μpL/只。取7日龄SPF鸡30只,分为3组,每组10只。第1组和第2组为免疫组,每只鸡颈部皮下接种250 μL疫苗;第3组为对照组,每只鸡颈部皮下接种250 μL灭菌白油。第1组的鸡只于免疫后7 d、14 d、21 d、28 d和35 d采血分离血清,分别应用血清中和试验(SNT)和琼脂扩散试验(AGPT)监测抗体消长规律。第2组和第3组的鸡只于免疫后21 d 各取 5 只,分别用 FAdV-4 GX2013 株(106.5 TCID50/mL)和 FAdV-8b QD2016 株(106.5 TCID50/mL)经肌肉注射进行攻毒,0.2mL/只;分别于攻毒后3d、5d、7d和10d采集试验鸡的咽喉拭子和泄殖腔拭子,应用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR的方法测定病毒含量。SNT结果显示,在免疫后7d可检测到FAdV-4和FAdV-8b血清中和抗体,免疫后21 d均达到峰值(210.7和210.6),以后逐渐下降,到免疫后35 d仍能保持较高水平(210.2和29.9);AGPT结果显示,在免疫后14d可检测到FAdV-4和FAdV-8b抗体,21d抗体阳性率最高(100%和90%),随后开始缓慢下降,AGPT抗体增长规律与血清中和抗体保持一致。攻毒保护试验结果显示,对照组的鸡只在攻FAdV-4GX2013株后3d内全部死亡,免疫组的鸡只表现正常,临床保护率达100%;对照组的鸡只在攻FAdV-8bQD2016株后出现采食量下降、精神沉郁、拉稀等现象,免疫组的鸡只表现正常,免疫组和对照组鸡只的咽喉拭子和泄殖腔拭子中病毒含量差异极显着(P<0.01)。综上所述,研制的二价油乳剂灭活疫苗具有良好的免疫保护效果。(本文来源于《扬州大学》期刊2018-06-01）
牛晓宇[6]（2018）在《Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定与叁价油乳剂灭活疫苗的制备》一文中研究指出我国是一个养禽大国,家禽的存栏量、禽肉禽蛋的产量均居世界首位,但I群禽腺病毒感染的发生,给我国养禽业造成了严重的经济损失。I群禽腺病毒有5个种(A~E)、12个血清型,其中,血清4型和血清10型病毒可引起心包积水-肝炎综合征,其他血清型的病毒均可引起包涵体肝炎。包涵体肝炎多发生于3~7周龄肉鸡,死亡率达10%~20%,剖检变化表现为肝脏肿大,充血、出血。2015年,我国多省份鸡群爆发了一种以心包积液和大量死亡为特征的急性传染病,该病发病急、传播快,严重危害我国养禽业的健康发展。病毒分离表明,该病为I群禽腺病毒血清4型毒株引起。本研究从临床疑似患病的样品中分离FAdV,对分离株进行鉴定,构建感染模型;选取优势血清型制备叁价油乳剂灭活疫苗,旨在为I群禽腺病毒的防控提供技术支撑。1、I群禽腺病毒的分离与鉴定对本实验室2015~2016年采集的部分疑似感染样品进行了I群禽腺病毒的分离鉴定,对分离毒株进行动物回归试验。结果,共分离得到I群禽腺病毒15株,经鉴定分别为3株血清1型(FAdV-1)、9株血清4型(FAdV-4)、3株血清8a型(FAdV-8a)。将以上分离株静脉接种5日龄SPF雏鸡进行动物回归试验,攻毒组雏鸡均出现精神沉郁,饮食欲减退等明显临床症状,并大量死亡;死亡鸡肝脏出血,表面有白色坏死点或坏死灶,肾脏肿大出血,脾脏肿大;FAdV-4攻毒组死亡雏鸡心包内可见淡黄色清亮液体;病理组织学观察显示,肝细胞核内有明显的嗜碱性包涵体,脾细胞及肝细胞坏死,肝脏出血、炎性细胞浸润,肾脏出血,肾小管上皮细胞崩解坏死。2、I群禽腺病毒叁价灭活疫苗的制备选取优势血清型制备叁价油乳剂灭活疫苗,并对其免疫效力进行评估。将分离的血清1型、4型、8a型毒株分别接种SPF鸡胚卵黄囊,收取鸡胚尿囊液进行透析浓缩,抗原液(FAdV-1:FAdV-4:FAdV-8a=1:3:1)经甲醛灭活后与吐温-80以96:4的比例混合作为疫苗制备的水相,按照油水比1.6:1进行乳化,制备I群禽腺病毒叁价油乳剂灭活疫苗,并对该疫苗的物理性状、最小免疫剂量、疫苗保护效力及免疫后抗体消长规律进行检测。结果表明,制备疫苗的抗原最佳灭活条件为1‰的甲醛37℃处理24h,理化性状及安全性检验结果显示,该疫苗剂型为油包水型,物理性状稳定,未见细菌及支原体等微生物污染。疫苗安全性良好,5日龄肉鸡颈部皮下注射2.0mL,并未出现局部炎性反应及全身性不良反应。疫苗的最小免疫剂量为0.7mL/羽。ELISA结果表明当雏鸡血清中抗体水平达到ELISA OD_(450)50 0.7452、0.6215及0.692时,即可有效抵御FAdV-1、FAdV-4及FAdV-8a毒株的攻击,保护力可达80%以上。抗体监测结果显示,血清1型特异性抗体于7dpi开始上升,25dpi达到最高水平,随后逐渐下降;血清4型及血清8a型特异性抗体均于4dpi开始上升,在25dpi达到最高峰,至67dpi,免疫组血清中抗体仍处于较高水平,能为免疫组肉鸡提供良好的保护力。攻毒保护试验中免疫攻毒组90只雏鸡中仅4只(FAdV-1组3只,FAdV-4组1只)出现泄殖腔排毒及明显临床症状,每组保护率均达到90%以上;攻毒对照组雏鸡全部表现出明显临床症状和排毒现象(90/90)。另外,不同血清型FAdV的交叉攻毒试验结果证明,本次制备的疫苗对FAdV-2及FAdV-6具有一定保护力(>70%)。综上所述,本研究制备的叁价油乳剂灭活疫苗具有良好的免疫效力,能为肉鸡提供较好的保护力,能抵抗相应血清型毒株的攻击。(本文来源于《山东农业大学》期刊2018-04-15）
田野,宫强[7]（2018）在《禽四种细菌病多联菊粉及油乳剂灭活疫苗的研究》一文中研究指出为探讨菊粉对四种常见禽细菌病灭活疫苗的佐剂效应,试验将禽多杀性巴氏杆菌、鸡白痢沙门氏菌、鸡志贺氏菌和鸡绿脓杆菌分别培养至浓度为2×10~(10)cfu/mL,按等比例混合后以终浓度为0.35%甲醛37℃灭活24 h,分别制备油乳剂和菊粉多联灭活疫苗,以动物试验检测其安全性和效力。结果表明:两种灭活疫苗均具有良好的安全性,免疫后抗体水平均呈现上升趋势,且菊粉疫苗组稍高于油乳剂疫苗组。攻毒试验结果显示两种疫苗均可为试验动物提供80%以上的保护率,且菊粉疫苗组略优于油乳剂疫苗组,说明菊粉具有较好的免疫佐剂效应。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2018年02期）
赵勐尧[8]（2017）在《我国现流行Ⅰ亚群禽腺病毒四价油乳剂灭活苗的研制》一文中研究指出Ⅰ亚群禽腺病毒(FAVI)主要引起的病症是鸡类的包涵体肝炎(IBH),是一种急性传染病[1]。最近在我国部分地区出现大批量死亡病例,剖检以心包积液、肝炎为特征性病变,称为鸡心包积液-肝炎综合征(鸡安卡拉病)。安卡拉病的病毒与I亚群禽腺病毒4型具有相近的遗传进化关系[2]。近年来,包涵体肝炎和安卡拉病在我国发病一直呈上升趋势,给我国鸡类养殖业造成了严重的经济损失。因此,本研究根据我国现包涵体肝炎和安卡拉病的流行现状,筛选了叁株Ⅰ亚群禽腺病毒的流行血清型标准毒株和一株安卡拉病病毒制备四价油乳剂灭活苗,其对以上两种疾病的防治和禽类养殖业的发展有着重要的应用价值。本研究从鸡场采集疑似感染了安卡拉病的病鸡心脏和肝脏,将样品处理后经卵黄囊途径接种7日龄的鸡胚,收获鸡胚尿囊液传代培养。通过PCR技术鉴定,共分离得到4株病毒,针对其Hexon基因序列进行扩增,与Genbank中已发布的Ⅰ亚群禽腺病毒各血清型Hexon基因序列进行比对。结果表明,4株病毒均与Ⅰ亚群禽腺病毒4型属于同一分支,有非常高的同源性。将4株病毒接种SPF肉鸡,攻毒鸡群的发病情况和解剖情况与自然感染安卡拉病的发病鸡一致。选取本实验室保存的3株Ⅰ亚群禽腺病毒标准毒株,与安卡拉病毒按1:1:1:2比例制成四价油乳剂灭活苗,并检测疫苗注射后机体抗体水平的变化情况,为预防该两种疾病的发生和流行提供科学依据。选取Ⅰ亚群禽腺病毒(FAV-2,FAV-5,FAV-8)和安卡拉病毒,经SPF鸡胚卵黄囊途径和鸡胚原代肝细胞接种病毒,扩增得到种毒,测试各株种毒的鸡胚半数感染量,组织半数感染量,病毒粒子浓度,最佳灭活浓度和最佳灭活时间。经甲醛完全灭活后,制备四价油乳剂灭活苗。对疫苗的物理性状,无菌检验,免疫安全性,最小免疫剂量,免疫效果及抗体水平的变化进行检验。结果显示,FAV-2、FAV-5、FAV-8、JS201501 鸡胚半数感染量分别10-5.25/0.2 mL、10-667/0.2mL、10-6.48/0.2mL、10-5.67/0.2mL,组织半数感染量分别为 10-5 75/0.1 mL、10-767/0.1 mL、10-7.25/0.1 mL、10-6.37/0.1 mL,实时荧光定量PCR测得病毒粒子浓度分别为105.086 copies/μL,106.304copies/μL,105.371 copies/μL,104.560copies/μL。建议甲醛灭活终浓度为 0.15%,灭活时间为24小时,经试验确定疫苗为油包水剂型,粘度和稳定性等性状均符合要求,无菌检验合格。接种7日龄的自孵化SPF鸡,注射疫苗后均无不良反应,安全性良好,最小接种剂量为0.4mL/只。接种疫苗两周后开始检测其抗体水平,结果显示疫苗接种后第4周抗体水平达到峰值,随后抗体水平开始迅速下降。免疫攻毒保护性试验结果显示,本疫苗对各病毒的临床保护率为100%,能够预防相应病毒的感染。(本文来源于《扬州大学》期刊2017-06-01）
张秉乾[9]（2017）在《鹅源呼肠孤病毒油乳剂灭活疫苗的制备》一文中研究指出鹅呼肠孤病毒病(goosereovirus,GRV)是由鹅呼肠孤病毒引起的一种传染病,近年来该病在我国多个省份流行发生,给养殖业造成了很大的经济损失,极大的危害了我国养鹅业的健康发展。2015年下半年江苏省某鹅场的鹅群发生了一种以肝脾坏死、运动障碍为主要特征的传染病,疑似感染呼肠孤病毒。为探明该病病原,本研究将病死鹅的组织匀浆液,卵黄囊接种10日龄鹅胚,从尿囊液中分离到一株病毒,病毒分离株对鸡红细胞没有血凝活性,其ELD50为10-3.75/0.2 mL。参考GenBank鹅呼肠孤病毒基因序列的保守区设计合成了特异性引物,用该引物对提取的病毒RNA进行RT-PCR,可扩增到约380bp目的条带,将目的条带回收后和pMD18-T载体连接,将重组载体转化到DH5α大肠杆菌并在AMP+/LB培养基中培养,对阳性菌落测序分析。结果表明,克隆的基因片段为鹅呼肠孤病毒σC基因片段;用生物学软件分析该分离株与水禽源呼肠孤病毒存在于同一分支,同源性在94.8%~96.5%,与鸡呼肠孤病毒同源性仅39.9%~50.5%;在6日龄的雏鹅上进行回归实验可复制该病;上述结果表明该分离株为鹅呼肠孤病毒,分离的病毒由实验室保存。将保存的鹅呼肠孤病毒分离株经鹅胚传代叁次,收获病毒尿囊液,8000rpm离心15min,取上清,加双抗。将10号白油,Span-80和硬脂酸铝按一定比例混合作油相,经双抗处理的病毒液加2%的吐温-80制作水相,按照油水比2:1混合制备油乳剂灭活疫苗,并进行包括外观、乳剂类型、粘度、稳定性、无菌、安全性和保存期的质量检验。为评价制备的灭活疫苗的免疫效力,将90只6日龄的雏鹅随机分为3组,每组30只,1-2组为免疫组,免疫剂量分别为0.2mL和0.5mL,第3组为对照组,免疫后进行抗体水平监测和免疫保护试验,并观察试验鹅的发病和死亡情况。结果表明疫苗外观为乳白色,呈油包水型,无菌,粘度符合标准,稳定性良好,对动物无不良反应,4℃下可保存12个月以上;免疫保护试验中,免疫组攻毒后出现短暂的精神沉郁,1组在在免疫两周时仍不能完全保护雏鹅,2组免疫一周后即可完全保护,对照组攻毒后雏鹅均出现典型的病理变化并死亡;1组攻毒鹅泄殖腔拭子于第3天开始检测到病毒核酸,第12天时仍有部分样品检测核酸为阳性,2组检测病毒核酸为阴性;对免疫后雏鹅血液中的抗体监测,免疫后6d抗体开始明显上升,20d左右达到峰值,此后稍有降低但仍可维持高峰2周以上。上述结果表明制备的鹅呼肠孤病毒灭活疫苗安全、稳定、易于储存运输,雏鹅免疫后能获得坚强保护力,抗体水平能维持高峰数周,可覆盖易感日龄。本研究从疑似感染鹅呼肠孤病毒的病料中成功分离了一株鹅源呼肠孤病毒,为开展该病毒的进一步研究奠定基础,用该毒株制备了鹅呼肠孤病毒灭活疫苗,疫苗安全有效,能在雏鹅的易感日龄提供坚强保护,为鹅呼肠孤病毒的疫苗研制提供了依据。(本文来源于《山东农业大学》期刊2017-04-28）
高旸,乔晋乾[10]（2016）在《灭活油乳剂苗在防制非典型新城疫流行中的应用》一文中研究指出笔者结合当地鸡场使用灭活苗的情况,阐述了在非典型新城疫高发鸡场如何正确应用灭活油乳剂苗。(本文来源于《当代畜禽养殖业》期刊2016年08期）
油乳剂灭活苗论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
引言鹅呼肠孤病毒感染,近年来在我国多个省份流行发生,严重危害我国养鹅业的健康发展。目前还没有针对GPV的商品化疫苗,相比于弱毒疫苗,灭活疫苗更安全、生产简单且易于保存,因此研究鹅呼肠孤病毒灭活疫苗势在必行。材料与方法 GPV疫苗种毒分离自江苏省某鹅场送检病料。9日龄SPF鸡胚购于山东省农科院家禽研究所,6日
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
油乳剂灭活苗论文参考文献
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