利用CRISPR/Cas9系统敲除大肠杆菌tnaA基因

利用CRISPR/Cas9系统敲除大肠杆菌tnaA基因

论文摘要

大肠杆菌的tnaA基因编码色氨酸酶,该基因的失活有利于大肠杆菌积累更多的L-色氨酸。利用CRISPR/Cas9系统介导的基因编辑技术对大肠杆菌tnaA基因进行敲除。首先针对tnaA基因设计CRISPR/Cas9作用靶点,构建gRNA表达质粒;随后人工设计同源修复供体基因序列,构建成完整的CRISPR/Cas9基因敲除系统;将该系统应用到大肠杆菌w3110-Δ中,经PCR和测序鉴定,证实目的基因tnaA敲除成功,敲除效率75%。成功构建了大肠杆菌tnaA基因敲除菌,为大肠杆菌L-色氨酸高产菌株的构建奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株与质粒
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 gRNA质粒的构建
  •   1.4 tnaA基因同源修复供体 DNA的构建
  •   1.5 感受态细胞的制备及细菌的转化
  •   1.6 pTargetF-tnaA和pCas的消除
  •   1.7 敲除效率的优化及检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 gRNA的构建
  •   2.2 tnaA基因同源修复供体 DNA的构建
  •   2.3 tnaA基因的敲除及敲除效率的检测
  • 3 讨论与结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 何京桦,乐科易

    关键词: 系统,敲除,大肠杆菌,基因

    来源: 生物学杂志 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 复旦大学生命科学学院

    分类号: Q78

    页码: 17-19

    总页数: 3

    文件大小: 291K

    下载量: 842

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