导读:本文包含了小肠上皮细胞培养论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:犊牛,小肠上皮细胞,联合消化法,细胞鉴定
小肠上皮细胞培养论文文献综述
刘倚帆,谭秀文,游伟,张相伦,姜富贵[1]（2019）在《肉用杂交犊牛小肠上皮细胞的分离培养和鉴定》一文中研究指出本试验旨在建立肉用杂交犊牛小肠上皮细胞分离培养和鉴定的方法,为研究犊牛小肠上皮细胞营养吸收、免疫调控及肠道屏障功能提供原代细胞培养模型。选用新生未吮乳的肉用杂交犊牛的空肠组织,应用胶原酶Ⅰ和中性酶联合消化法对小肠上皮细胞进行分离,应用相差消化法和相差贴壁法对犊牛小肠上皮细胞进行纯化。通过细胞形态学观察、生长曲线、免疫荧光及染色体核型分析等方法来鉴定细胞。结果表明:1)应用胶原酶Ⅰ和中性酶联合消化法得到的犊牛小肠上皮细胞生长状况良好,经纯化后得到90%以上纯度的犊牛小肠上皮细胞,并稳定传代至10代以上; 2)犊牛小肠上皮细胞的生长曲线为"S"形,符合细胞增殖规律; 3)免疫荧光鉴定犊牛小肠上皮细胞特异性表达角蛋白13和绒毛蛋白; 4)透射电镜观察发现犊牛小肠上皮细胞边缘有微绒毛结构,细胞与细胞之间的紧密连接结构清晰可见; 5)染色体核型分析显示细胞内含有60条染色体,形态正常,呈二倍体核型。综上所述,应用胶原酶Ⅰ和中性酶联合消化及相差贴壁纯化成功得到犊牛小肠上皮细胞,为研究犊牛小肠上皮细胞营养物质吸收、免疫调控和肠道屏障功能提供了细胞素材。(本文来源于《动物营养学报》期刊2019年05期）
王菲,战立聪,吴庆侠,董海龙,朱洪云[2]（2018）在《牦牛小肠上皮细胞分离培养及鉴定》一文中研究指出为体外研究牦牛肠道粘膜免疫及肠道微生物与肠粘膜之间的互作关系提供细胞,本试验采用组织块培养法培养牦牛小肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IEC),差异消化法进行纯化,免疫细胞化学法进行鉴定,并用细胞计数法测定其生长曲线。组织块培养法结合差异消化法可分离纯化出牦牛小肠上皮细胞,免疫细胞化学法检测显示该细胞波形蛋白染色为阴性,角蛋白染色为阳性,阳性率达到90%;细胞生长曲线显示细胞接种1d后开始贴壁生长,3-6d进入对数生长期,从第7d开始细胞增殖基本处于停滞期。采用组织块培养法成功获得了牦牛小肠上皮细胞,证明该方法可为研究牦牛肠道免疫和肠道微生物与肠粘膜之间的互作提供牦牛小肠上皮细胞。(本文来源于《高原农业》期刊2018年02期）
李小芬,詹康,张响英,陶勇,杨晓志[3]（2017）在《山羊小肠上皮细胞分离培养与鉴定》一文中研究指出为研究山羊小肠上皮细胞营养吸收调控及其与肠道微生物之间的关系,提供原代细胞培养模型,采用组织块接种来获得山羊小肠上皮细胞,利用有限稀释法来克隆山羊小肠上皮细胞,并通过细胞形态学以及细胞角蛋白18、波形蛋白、肌间线蛋白和细胞生长曲线来鉴定山羊小肠上皮细胞。结果表明:1)采用组织块接种能够分离纯化得到山羊小肠上皮细胞并稳定传至大约10代;2)RT-PCR检测发现山羊小肠上皮细胞不能够表达波形蛋白和肌间线蛋白;3)在正置显微镜下观察到山羊小肠上皮细胞能够产生细胞角蛋白18绿色荧光。研究发现,培养至第8代的山羊小肠上皮细胞仍然保持着上皮细胞的特征,至10代山羊小肠上皮细胞质变大,细胞几乎无法增殖,细胞开始凋亡。综上所述,采用组织块接种能够获得山羊小肠上皮细胞并正常传至第10代,可为研究山羊小肠上皮细胞营养物质吸收和调控机理提供细胞素材。(本文来源于《中国农业大学学报》期刊2017年10期）
赵倩明,左晓昕,詹康,隋雁南,封飞飞[4]（2017）在《奶牛小肠上皮细胞的原代培养和鉴定》一文中研究指出为研究小肽转运蛋白对小肽转运和吸收机制提供细胞模型,在体外建立原代奶牛小肠上皮细胞分离的方法,采用Ⅰ型胶原酶和中性蛋白酶混合消化液对奶牛小肠组织进行消化,通过2%山梨醇进行密度梯度离心以去除单核细胞、淋巴细胞和肌细胞;用刮除法、相差消化法和96孔板单克隆方法来纯化奶牛小肠上皮细胞,从细胞形态学、细胞角蛋白18免疫荧光染色和小肠上皮细胞特异性标志蛋白来鉴定奶牛肠上皮细胞。结果表明:1)采用Ⅰ型胶原酶和中性蛋白酶联合消化奶牛小肠组织,通过2%山梨醇密度梯度离心可以获得大量的细胞团且48h发生贴壁,但是细胞贴壁不牢。2)48h之后细胞团进一步向外辐射生长出细胞,细胞形态呈现典型的上皮细胞和铺路石形态。5~7d细胞处于对数生长期,细胞大量增值,一部分成纤维细胞与小肠上皮细胞夹杂生长。3)通过96孔板能够单克隆奶牛小肠上皮细胞,细胞呈现均一的铺路石形态。4)奶牛小肠上皮细胞角蛋白18鉴定为阳性,荧光显微镜下能够发出绿色荧光。5)通过RT-PCR能够检测到奶牛小肠上皮细胞特异性标志蛋白E-钙黏蛋白、碱性磷酸酶和肠肽酶的表达,成功建立了奶牛小肠上皮细胞的分离和培养方法。(本文来源于《中国农业大学学报》期刊2017年06期）
林松峰[5]（2017）在《GLP-1串联体体外表达与大鼠小肠原代上皮细胞的分离培养研究》一文中研究指出糖尿病(Diabetes)是一种终身性代谢性疾病,其发病原因众多,常表现为慢性高血糖。2013年,国际糖尿病联合会(Internatinal Diabetes Federation(IDF))公布,全球罹患糖尿病的患者达到了惊人的3.83亿。尽快糖尿病本身没有很大的危害,但是长期的血糖增高会损伤大血管、微血管,进而威胁到脑、心、周围神经、肾、眼睛等的正常功能,而且随之而来的并发症也会极大影响人类的健康。糖尿病的发病机制复杂,当前现有的治疗手段尚达不到治愈的效果,随着糖尿病患者数量的日益增多,对于它们的研究已经成为当前医学领域的热点。由哺乳动物肠道L细胞分泌的胰高血糖素样肽(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是一种多肽类激素,该多肽由31个氨基酸组成。由于它可以促进胰岛素在高血糖状态下的分泌,所以GLP-1在2型糖尿病的治疗中备受关注。但是机体内存在的二肽基肽酶(DPPⅣ)能够使GLP-1迅速降解,这极大地限制了GLP-1的生理功能。为了提升GLP-1在体内的生理功能,需要对GLP-1的结构进行优化或者提高GLP-1在体内的表达产量,从而抵抗DPP-IV的降解。本研究通过构建GLP-1串联重复多聚体来提高GLP-1在体外的表达产量,从而使其能够更长时间地抵抗DPPⅣ的降解作用,最终提升GLP-1在体内的生理功能。在本研究中,我们分别构建了p ET-22b-GLP4,GLP8,GLP12和GLP16的表达载体,在大肠杆菌BL21(D3)中转化后利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果显示,GLP4的表达量最高,GLP8次之,而GLP12和GLP16几乎不表达。除了基因本身的结构和表达系统的效率外,诱导温度、诱导时间以及诱导剂浓度对GLP-1多聚体的表达量都有影响,通过实验我们发现,GLP-1串联体的表达量在26℃,诱导剂IPTG浓度为0.6m M时最高,并且GLP-1多聚体体外表达的最佳诱导时间为8小时。在上述获得的优化条件之下,我们最终确定了该串连体在体外原核表达系统中的最适合拷贝数为4。近期研究表明,小肠也同样具有分泌胰岛素的功能,而且在发育过程中,小肠上皮细胞和胰岛内分泌细胞具有共同的起源,这就暗示我们,处在发育阶段的小肠上皮细胞具有诱导分化成胰岛素分泌细胞的潜能。为了深入研究小肠上皮细胞与胰岛素分泌之间的相关性,本研究第二部分分离了原代培养的大鼠胚胎期小肠上皮细胞。通过对细胞的形态学进行观察,我们发现培养过程中的细胞符合上皮细胞的形态学特征。而且,对培养的细胞进行免疫荧光染色后发现,培养的细胞表达角蛋白8(小肠上皮细胞表达标志物),进一步确定了细胞的来源。基于这些研究,为了方便未来对小肠上皮细胞的改造,我们进一步构建了hr GFP慢病毒载体,并成功感染大鼠小肠上皮细胞。结论:本研究成功地对GLP-1多聚体进行了体外的诱导表达,确定了GLP-1串联体的最佳表达条件以及最适合的拷贝数,为GLP-1多聚体的体内研究打下了坚实的基础。同时,大鼠胚胎期小肠上皮细胞培养体系的建立,为下一阶段的功能学以及作用机制的研究提供了可能。(本文来源于《天津医科大学》期刊2017-05-01）
尹博文,陈玲霞,李振宇,李晓飞,宋庆凯[6]（2017）在《树鼩小肠上皮细胞的体外分离培养与鉴定》一文中研究指出目的从树鼩小肠分离小肠上皮细胞,探索分离培养方法和条件,为药物开发和病原感染机制研究提供体外细胞模型,并且为建立树鼩小肠上皮细胞系奠定基础。方法采用胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ及DTT联合消化树鼩小肠组织块,得到的细胞经完全培养液培养,用相差显微镜观察细胞形态,通过MTT法测定细胞生长曲线,并采用细胞角蛋白荧光染色等方法鉴定细胞。结果经优化分离法得到的肠上皮隐窝细胞团在24 h后贴壁,6 d汇合成片,在显微镜下观察发现细胞团延辐射状向外长出铺路石样和多角状的细胞;第二代后,每隔2~3 d可传代1次;细胞接种3~6 d为对数生长期;细胞角蛋白18进行免疫荧光鉴定后确定为小肠上皮细胞。结论本实验成功地从树鼩小肠分离到了小肠上皮细胞,并且建立了树鼩小肠上皮细胞体外培养的方法。(本文来源于《实验动物科学》期刊2017年02期）
尹博文,陈玲霞,宋庆凯,苗雨润,李晓飞[7]（2016）在《树鼩小肠上皮细胞的体外分离培养与鉴定》一文中研究指出目的从树鼩小肠分离小肠上皮细胞,探索分离培养方法和条件。为药物开发和病原感染机制研究提供体外细胞模型,并且为建立树鼩小肠上皮细胞系奠定基础。方法采用胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶I及DTT联合消化树鼩小肠组织块,得到的细胞经完全培养液培养,用相差显微镜观察细胞形态,通过MTT法测定细胞生长曲线,并采用细胞角蛋白荧光染色等方法鉴定细胞。结果经优化分离法得到的肠上皮隐窝细胞团在24h后贴壁,6d汇合成片,在显微镜下观察发现细胞团延辐射状向外长出铺路石样和多角状的细胞;第二代后,每隔2~3d可传代1次;细胞接种3~6d为对数生长期;细胞角蛋白18进行免疫荧光鉴定后确定为小肠上皮细胞。结论本实验成功地从树鼩小肠分离到了小肠上皮细胞,并且建立了树鼩小肠上皮细胞体外培养的方法。(本文来源于《第十二届中国实验动物科学年会（2016·南宁）论文集》期刊2016-10-08）
彭杰[8]（2016）在《树鼩原代小肠上皮细胞分离、培养及轮状病毒（RV）对其感染性研究》一文中研究指出轮状病毒是导致全球婴幼儿腹泻的单一主因,全球因轮状病毒每年导致的死亡病例高达80万。目前轮状病毒感染没有有效的治疗药物,现有的疫苗在不同地区保护效果差距较大,价格昂贵且存在发生潜在感染的安全隐患,因此更加安全可靠、高效廉价疫苗的研发就成为当务之急。有效的动物模型是疫苗研发过程十分重要的环节和保障,也是研究病毒感染进程和致病机理的主要手段。轮状病毒的感染动物模型主要包括无菌猪、猴,小鼠等,由于这些模型在亲缘关系、实验周期、解剖学特性等方面的局限性,导致RV感染与致病的机制研究受到较大限制。树嗣因其体型较小,繁殖快,饲养成本低和新陈代谢及解剖学特性与人类接近而受到的重视。近年来,有许多研究表明树鼢可以被RV感染,成为研究RV感染的潜在动物模型。本研究建立了轮状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法,以轮状病毒VP6基因为靶基因,分别设计两对引物及其相应的TaqMan探针,扩增目的片段,将目的片段克隆于PCDNA3.1+载体上,体外转录获得RNA,系列稀释后为标准品,建立TaqMan探针荧光定量实时PCR检测方法并对该方法进行验证。设计实验找到最优条件下的引物浓度(250nM)、探针浓度(300nM)；通过对引起腹泻的人柯萨奇病毒、呼肠孤病毒等进行检测,结果均为阴性,表明该方法具有很好的特异性。该方法的最低检测量为5000copies/mL。对该方法进行重复性实验,发现变异系数CV均小于1%,重复性好。本实验初步建立了人G1型轮状病毒TaqMan探针荧光实时PCR检测方法,为G1型轮状病毒的诊断、检测和分子流行病学研究提供了一种新的方法。本实验采用本实验采用了胰酶、胶原酶法、胶原酶(xⅠ型)和中性蛋白酶(Ⅰ型)混合使用叁种方法,最终确定了胶原酶(xⅠ型)和中性蛋白酶(Ⅰ型)混合使用获取的小肠上皮细胞较稳定,采用相位差消化法和相位差贴壁法来获取纯净的树铜原代小肠上皮细胞,同时采用人角蛋白18抗体对获取的小肠上皮细胞进行鉴定,鉴定结果阳性,说明获取的细胞为树鼩原代小肠上皮细胞。用RV感染的树鼩原代小肠上皮细胞,通过定性,荧光定量PCR,蛋白、细胞水平检测后,均证实树鼩原代小肠上皮细胞对RV具有一定的感染性。采用梯度稀释、荧光定量PCR等方法检测病毒的最适感染复数及在细胞内的增殖特性。将轮状病毒分别以MOI=1,2,3,4接种于树鼩小肠上皮细胞,经测定发现MOI=3时,病毒的载量最大。采用梯度稀释法和荧光定量PCR法分别测定病毒在增殖过程中滴度和载量的变化,并绘制病毒增殖曲线。发现病毒在第一天感染时有较低的滴度和载量,2-3天呈现一个指数增长的趋势,并在第3天达到一个平台期并随着时间的延长呈现一个降低的趋势。尽管总体感染率较低,但结果显示树鼩作为潜在的RV感染动物模型,用于后续研究。综上所述,本研究成功构建了轮状病毒体外感染树鼩动物模型,该模型的建立对于轮状病毒疫苗的研发、抗体治疗有效性评估以及病毒感染机理的研究具有重要的意义。(本文来源于《昆明理工大学》期刊2016-05-01）
陶志云,朱春红,徐文娟,姬改革,李慧芳[9]（2016）在《鸡小肠上皮细胞分离培养及NLRP3在该细胞中的表达》一文中研究指出为了探明NLRP3在鸡小肠上皮细胞中表达情况,为鸡的NLRP3基因在小肠细胞中的功能研究奠定基础。采用18胚龄的鸡胚,分离培养鸡的小肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC);采用免疫细胞化学(immunocytochemistry,ICC)和反转录PCR(RT-PCR)方法,检测NLRP3基因在鸡小肠上皮细胞中的表达。结果表明:分离培养出活性较强的IEC;ICC检测显示获得的小肠上皮细胞表面NLRP3抗原阳性,RT-PCR法可扩增出520 bp的目的片段。表明成功分离培养出鸡小肠上皮细胞,并证明鸡NLRP3在鸡小肠上皮细胞中表达。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2016年04期）
詹康,左晓昕,贡笑笑,陈银银,占今舜[10]（2015）在《鸡胚小肠上皮细胞的体外分离培养和鉴定》一文中研究指出本试验旨在提供鸡小肠上皮细胞的体外分离方法,为进一步研究鸡肠道疾病的致病机理、鸡肠道营养物质转运吸收与免疫机理提供模型。本试验采用组织块培养法来分离培养鸡小肠上皮细胞。运用刮除法、酶消化法、有限稀释法纯化鸡小肠上皮细胞。利用噻唑蓝(MTT)法来鉴定鸡小肠上皮细胞生长情况。通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测鸡小肠上皮细胞特异性基因的表达来鉴定鸡小肠上皮细胞。结果表明:1)采用组织块细胞培养法能够成功获得鸡小肠上皮细胞系。2)接种组织块8h内鸡小肠上皮细胞开始大量增殖。3)鸡小肠上皮细胞的生长曲线为"S"形,符合细胞增殖规律。4)传至第5代的鸡小肠上皮细胞体积开始变大,细胞形态模糊并开始衰老凋亡;细胞传代时进行接种,大量的细胞未贴壁。综上所述,采用在6孔板内接种鸡小肠组织快,能够获得具有稳定性的鸡小肠上皮细胞,为鸡肠道疾病致病机理、鸡肠道营养物质转运吸收和永生化鸡小肠上皮细胞提供细胞素材。(本文来源于《动物营养学报》期刊2015年07期）
小肠上皮细胞培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为体外研究牦牛肠道粘膜免疫及肠道微生物与肠粘膜之间的互作关系提供细胞,本试验采用组织块培养法培养牦牛小肠上皮细胞(intestinal epithelial cell,IEC),差异消化法进行纯化,免疫细胞化学法进行鉴定,并用细胞计数法测定其生长曲线。组织块培养法结合差异消化法可分离纯化出牦牛小肠上皮细胞,免疫细胞化学法检测显示该细胞波形蛋白染色为阴性,角蛋白染色为阳性,阳性率达到90%;细胞生长曲线显示细胞接种1d后开始贴壁生长,3-6d进入对数生长期,从第7d开始细胞增殖基本处于停滞期。采用组织块培养法成功获得了牦牛小肠上皮细胞,证明该方法可为研究牦牛肠道免疫和肠道微生物与肠粘膜之间的互作提供牦牛小肠上皮细胞。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
小肠上皮细胞培养论文参考文献
[1].刘倚帆,谭秀文,游伟,张相伦,姜富贵.肉用杂交犊牛小肠上皮细胞的分离培养和鉴定[J].动物营养学报.2019
[2].王菲,战立聪,吴庆侠,董海龙,朱洪云.牦牛小肠上皮细胞分离培养及鉴定[J].高原农业.2018
[3].李小芬,詹康,张响英,陶勇,杨晓志.山羊小肠上皮细胞分离培养与鉴定[J].中国农业大学学报.2017
[4].赵倩明,左晓昕,詹康,隋雁南,封飞飞.奶牛小肠上皮细胞的原代培养和鉴定[J].中国农业大学学报.2017
[5].林松峰.GLP-1串联体体外表达与大鼠小肠原代上皮细胞的分离培养研究[D].天津医科大学.2017
[6].尹博文,陈玲霞,李振宇,李晓飞,宋庆凯.树鼩小肠上皮细胞的体外分离培养与鉴定[J].实验动物科学.2017
[7].尹博文,陈玲霞,宋庆凯,苗雨润,李晓飞.树鼩小肠上皮细胞的体外分离培养与鉴定[C].第十二届中国实验动物科学年会（2016·南宁）论文集.2016
[8].彭杰.树鼩原代小肠上皮细胞分离、培养及轮状病毒（RV）对其感染性研究[D].昆明理工大学.2016
[9].陶志云,朱春红,徐文娟,姬改革,李慧芳.鸡小肠上皮细胞分离培养及NLRP3在该细胞中的表达[J].中国兽医杂志.2016
[10].詹康,左晓昕,贡笑笑,陈银银,占今舜.鸡胚小肠上皮细胞的体外分离培养和鉴定[J].动物营养学报.2015