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鸭源鸡杆菌gtxA突变株构建及其生物特性分析

2020-12-10阅读(193)

鸭源鸡杆菌gtxA突变株构建及其生物特性分析

论文摘要

为了了解毒素GtxA对鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis,G.anatis)生物学特性及致病性的影响,利用自然转化和正向筛选法构建了1株G.anatis gtxA缺失突变株,初步探究突变株的生物学特性。与亲本菌株比较,突变株溶血活性消失,菌落形态及生长速率并未出现显著改变,其对小鼠的致病力下降。外毒素GtxA参与G.anatis致病过程并扮演一定角色;G.anatis gtxA基因突变株的构建及其生物学特性探究为更好的了解其致病机理和研发出更为高效安全疫苗建立了理论基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌种和载体
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 gtxA基因突变菌株构建
  •     1.3.1 引物设计
  •     1.3.2 同源重组质粒pUC18-S-C-X的构建
  •     1.3.3 转化片段的扩增
  •     1.3.4 感受态G.anatis的制备与自然转化
  •     1.3.5 G.anatis突变株的鉴定
  •   1.4 突变株ΔgtxA生物学特性分析
  •     1.4.1 突变株ΔgtxA的遗传稳定性
  •     1.4.2 菌落形态和溶血活性
  •     1.4.3 生长性能
  •     1.4.4 鸡输卵管原代上皮细胞的分离与培养
  •     1.4.5 细胞毒性试验
  •     1.4.6 致病性试验
  • 2 结果
  •   2.1 成功构建突变株ΔgtxA
  •     2.1.1 扩增出gtxA基因上下游同源臂及CMP抗性基因
  •     2.1.2 成功构建出重组质粒pUC18-S-C-X
  •     2.1.3 PCR鉴定证实成功构建突变株ΔgtxA
  •     2.1.4 Western blot证实突变株ΔgtxA构建成功基因
  •   2.2 突变株ΔgtxA的生物学特性
  •     2.2.1 突变株ΔgtxA遗传稳定
  •     2.2.2 突变株ΔgtxA失去溶血活性
  •     2.2.3 细胞毒性减弱
  •     2.2.4 小鼠致病性试验
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王继洋,彭志锋,刘盼盼,王坤芃,王川庆,陈陆,赵军,杨霞

    关键词: 基因,突变株,致病性

    来源: 中国兽医学报 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 河南农业大学牧医工程学院,河南牧业经济学院动物医学学院

    基金: 河南省自然科学基金资助项目(162300410153),河南省高校科技创新团队与支持计划资助项目(14IRTSHN015),河南省科技攻关项目(172102110046)

    分类号: S852.61

    DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.03.07

    页码: 414-420

    总页数: 7

    文件大小: 1116K

    下载量: 62

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