基于G-四联体比色生物传感器检测肉制品中羊源性成分

基于G-四联体比色生物传感器检测肉制品中羊源性成分

论文摘要

近年来,肉制品掺假现象已成为社会关注的热点,鉴定畜产品中动物源性成分是打击掺假的一种重要技术手段。基于此,利用不对称PCR技术(asymmetric PCR,As-PCR),并结合G-四联体的功能特点,建立了一种G-四联体比色生物传感器以鉴定肉制品中羊源性成分。以羊的基因组DNA为模板,并在限制性正向引物的5′端加上一段G-四联体的反向互补序列,通过As-PCR扩增出大量含有G-四联体序列的单链DNA(single strand,ssDNA),生成的ssDNA在K+的作用下可与氯高铁血红素(hemin)结合形成具有DNA核酶(DNAzyme)活性的G-四联体-hemin复合物。该复合物可催化H2O2与2,2′-联氮-双(3-乙基-苯并噻唑琳-6-磺酸)二胺盐[2,2′-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt,ABTS2-]的反应,从而生成绿色的反应产物,结果可用肉眼观察,无需电泳、测序等常规检测步骤。通过对As-PCR反应条件和体系的优化,该生物传感器可实现对肉制品中羊源性成分准确、快速的鉴定,可稳定检测出的混合肉样中羊源性成分的最低质量分数为5%。研究所建立的G-四联体比色生物传感器具有简便、灵敏、可视化、低成本等优点,可用于肉制品中动物源性成分的检测,为肉制品的安全检测提供了强有力的技术支撑。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 实验材料
  •   1.2 实验方法
  •     1.2.1 基因组DNA的提取
  •     1.2.2 引物的设计
  •     1.2.3 As-PCR反应体系和条件优化
  •     1.2.4 As-PCR产物回收
  •     1.2.5 G-四联体比色生物传感器的有效性验证
  •     1.2.6 G-四联体比色生物传感器的物种特异性检测
  •     1.2.7 G-四联体比色生物传感器的灵敏度检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 As-PCR反应体系优化
  •   2.2 G-四联体比色生物传感器的有效性验证
  •   2.3 G-四联体比色生物传感器的物种特异性检测
  •   2.4 G-四联体比色生物传感器的灵敏度检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王心一,刘榜,谌阳,许文涛,周翔

    关键词: 动物源性成分检测,不对称,四联体,生物传感器

    来源: 生物技术进展 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室,中国农业大学食品科学与营养工程学院

    基金: 国家转基因生物新品种培育重大专项(2018ZX08012-001)

    分类号: TS251.7

    DOI: 10.19586/j.2095-2341.2019.0104

    页码: 641-646

    总页数: 6

    文件大小: 1551K

    下载量: 107

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