导读:本文包含了表达文库论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:文库,宏基,阿米巴,基因,孢子,艾美,瘤胃。
表达文库论文文献综述
李頔[1]（2019）在《CRISPR/CAS9技术抑制BCL11A基因的表达及其DNA结合区域sgRNAs文库构建》一文中研究指出目的:本研究采用规律成簇间隔短回文重复序列(Clustered regu larly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(C RISPR-associated protein 9,Cas9)技术,抑制B细胞淋巴瘤/白血病11A(B-c ell lymphoma/leukemia 11A,BCL11A)基因的表达,分析BCL11A对γ珠蛋白基因表达的影响;构建γ珠蛋白基因转录抑制因子BCL11A的DNA结合区域的sgRNAs慢病毒文库,为进一步筛选出γ珠蛋白基因转录抑制因子BCL11A的D NA准确结合位点奠定实验基础。方法:1.运用在线设计软件(http://chopchop.cb u.uib.no),以BCL11A红系增强子+58序列为靶序列设计两条sgRNAs。2.构建慢病毒重组质粒载体,实验分成sgRNA1组、sgRNA2组和空白对照组3组,经酶切鉴定及Sanger测序验证。3.包装慢病毒质粒载体:将慢病毒重组质粒载体以及包装质粒共同转染HEK293T细胞,浓缩获得病毒。4.慢病毒感染叁组K562细胞,筛选阳性感染细胞,提DNA进行PCR扩增。扩增产物用Sanger测序验证、T7E1酶测定突变活性,连接TA载体做单克隆测序。5.阳性感染细胞经红系诱导0、2、4、6天,用实时荧光定量PCR转录水平检测各组BCL11A基因和γ珠蛋白基因的表达情况。6.运用CRISPR gRNA设计软件(CRISPRwiz)设计出人δ珠蛋白基因5'上游3.5kb区域序列范围内所有可能的sgRNAs,合成sgR NAs文库。7.lentiCRISPRv2载体与富集的sgRNAs文库进行重组反应,构建sg RNAs质粒文库,通过二代测序(Next-generation sequencing,NGS)技术对质粒文库进行测序质量评价。8.将检测合格的质粒文库和包装成慢病毒。结果:1.两条慢病毒重组质粒载体经酶切验证及测序鉴定,重组载体构建成功。2.sgRNA2组阳性感染细胞,测序产生套峰成功被基因编辑,T7E1酶切电泳结果显示具有突变活性,连接TA载体单克隆测序结果显示基因编辑产生了一个463bp大小的缺失。3.sgRNA1组T7E1酶切结果无突变活性。4.sgRNA2组阳性感染细胞经过红系诱导6天,实时荧光定量PCR结果显示阳性感染细胞在红系诱导前后都表现出BCL11A基因表达量降低,γ珠蛋白基因表达量升高。5.得到了覆盖人δ珠蛋白基因5'上游3.5kb范围的BCL11A基因DNA结合区域的sgRNAs慢病毒文库。结论:1.成功对K562细胞BCL11A基因增强子+58序列进行基因编辑,产生了突变。2.对BCL11A基因编辑后,经过红系诱导,在K562细胞中抑制了BCL11A的表达,促进了γ珠蛋白基因的表达。3.获得了BCL11A基因在δ珠蛋白基因5'上游DNA结合区域的sgRNAs慢病毒文库。(本文来源于《贵州医科大学》期刊2019-05-01）
陆坚,路卫卫,李伟亮,郭晓敏,杜丽琴[2]（2018）在《高糖土壤宏基因组文库β-葡萄糖苷酶基因克隆表达及酶学性质分析》一文中研究指出【目的】通过宏基因组技术获取土壤微生物总DNA,运用基因克隆、功能筛选、基因表达等手段挖掘新型β-葡萄糖苷酶,为新型微生物资源的开发利用提供科学依据。【方法】提取高糖土壤宏基因组DNA,构建宏基因组文库;筛选文库并对阳性克隆子亚克隆,获得β-葡萄糖苷酶基因;PCR扩增目的基因,以pSE380为表达载体构建重组质粒,转化至大肠杆菌进行表达;采用镍亲和层析对重组酶纯化,研究其酶学性质。【结果】成功构建约含9.2万个克隆的高糖土壤宏基因组文库,获得一个新型β-葡萄糖苷酶基因unbgl3A。该基因大小为2241 bp,在氨基酸水平上,与Gen Bank数据库中已知β-葡萄糖苷酶的一致性为73%;该酶最适pH为6.0,最适温度为50℃,对对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-NPG)的K_m值为6.45 m M,V_(max)为50μmol/(mg·min)。在15～50℃热处理1 h后仍保留90%以上的酶活力,热稳定性较好,且被多种糖激活。【结论】宏基因组技术是获取新酶有效手段,获得的Unbgl3A具有良好酶学性质,可为进一步挖掘其应用潜力及研究耐热机理奠定基础。(本文来源于《西南农业学报》期刊2018年12期）
姬凯元[3]（2018）在《小鼠黑色素瘤（B16）转录、lncRNA表达分析及B16纳米文库构建》一文中研究指出黑色素瘤是由黑色素细胞癌化形成的一种最具侵袭性的发生于皮肤部位的恶性癌症,研究黑色素瘤转录特点、lncRNA表达特点等对其治疗具有十分重要的意义。重链抗体,一种存在于羊驼、骆驼、软骨鱼血清中的一种特殊结构的微小抗体。与传统的四联体抗体相比,重链抗体只含有两条重链,结构简单、性质稳定。基于重链抗体的基础上科研人员研发出一种结构更加简单,性质更加稳定,分子量更小的VHH抗体(纳米抗体),纳米抗体因其优良的特性在疾病诊疗方面具有显着的优势。本实验采用二代测序技术对分离自C57BL-6J小鼠的正常黑色素细胞及黑色素瘤(B16)细胞进行二代测序,分别检测两种细胞基因的转录组差异,长链非编码RNA(lncRNA)表达差异,由此筛选特异性表达的基因进行功能研究,探索黑色素瘤疾病的发生机制,同时建立特异性的B16细胞蛋白纳米抗体免疫文库,为后续研发B16检测及治疗抗体提供基础。1.正常黑色素细胞及B16细胞转录组测序分析:使用EBSeq软件对mRNA测序数据采用差异倍数(Fold Change)大于等于2且错误发现率(FDR<0.05)作为筛选标准,共得到4086个差异基因;KEGG数据库对4086个差异基因进行注释,发现4086个差异基因分属于146个调控通路;根据注释结果随机挑选9个跟癌症相关的差异基因采用定量PCR(qRT-PCR)法进行验证,结果与测序结果趋势一致;挑选与黑色素生成及黑色素细胞迁移和增殖相关的基因采用定量PCR及Western blotting法进行验证,结果都与测序趋势一致。2.正常黑色素细胞及B16细胞lncRNA测序分析:通过差异倍数及错误率筛选,从两组样品的测序数据中共得到373个差异表达的lncRNAs,其中136个lncRNAs在B16细胞中表达量显着上调,237个lncRNAs在B16细胞中表达量显着下调;定量PCR检测表达量差异最显着的6个lncRNAs,检测结果与lncRNA的测序结果趋势相同;两种预测方法(lncRNA-cis-target 和 lncRNA-lucTar-target)对差异表达的373个lncRNAs进行靶基因预测,共筛选得到467个潜在的靶向调控基因。KEGG数据库对467个靶向调控基因进行注释,分析发现43个IncRNAs和靶基因与黑色素生成和黑色素瘤通路有关;筛选发现lncRNA-13317.1在理论上可以靶向调控BRCA1,通过双荧光报告载体实验验证了这一结果,而BRCA1基因在细胞损伤后的修复过程中发挥着重要的作用,由此证明lnc-13317.1也参与细胞的损伤修复过程;细胞增殖实验发现lnc-MSTRG.13317.1可以通过调控靶基因BRCA1进而调控黑色素瘤细胞的增殖。3.通过转录组测序分析发现TAK1基因在B16细胞中异常性低表达,miRBase数据库分析发现:B16细胞中异常性高表达的lnc-MSTRG.5423 8.1可能是miR-143-5p的前体,文献报道正常小鼠及B16细胞miRNA测序发现miR-143-5p在B16细胞中异常性高表达,miR-143-5p在黑色素瘤细胞增殖方面具有十分重要的作用,但关于miR-143-5p在正常黑色素细胞中的作用机制尚未见报道。本实验以羊驼黑色素细胞为载体,双荧光报告载体实验确定了miR-143-5p和TAK1的靶向调节关系;过表达miR-143-5p后发现羊驼黑色素细胞的黑色素产量显着下调;细胞增殖实验发现miR-143-5p可以上调羊驼黑色素细胞的增殖;细胞划痕实验发现miR-143-5p可以促进羊驼黑色素细胞的迁移。4.反复冻融法与超声破碎法相辅助裂解B16细胞获得B16细胞的全蛋白,免疫选取体况良好的成年雄性羊驼,采用pCANTAB5e噬菌体展示技术构建B16全蛋白纳米抗体cDNA文库,梯度稀释检测库容达到5.76 × 1010个,梯度稀释检测文库丰度达到3.65 ×1010个/ml,随机挑选50个单克隆对文库插入率进行检测,结果发现50个样品中只有两个样品插入的不是VHH片段,文库插入率达到96%,以上结果说明构建的B16全蛋白纳米抗体文库质量良好,可用于后续研发B16细胞的纳米抗体。结论:本研究通过对C57BL-6J小鼠正常黑色素细胞及B16细胞深度测序分析,共筛选到4086个差异表达的mRNA,并对其进行了调控通路注释;通过对两种不同细胞的lncRNA测序分析,共得到373个差异表达的lncRNAs,同时通过对其靶基因进行功能注释,筛选得到43个与黑色素产生及癌症相关的lncRNA,为后续研究lncRNA对黑色素细胞癌化机制奠定了基础;通过对差异mRNA及差异lncRNA进行功能关联,筛选得到了在黑色素瘤细胞中具有重要功能的miR-143-5p,本研究以羊驼皮肤正常黑色素细胞为载体探索了miR-143-5p在正常黑色素细胞中的生物学功能;通过噬菌体展示技术构建了B16细胞全蛋白纳米抗体文库,为后续研发B16纳米抗体奠定了基础。(本文来源于《山西农业大学》期刊2018-06-01）
马艺飞[4]（2018）在《毒害艾美耳球虫子孢子cDNA文库筛选及SNF2基因克隆表达与功能研究》一文中研究指出毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)是7种鸡球虫中致病性最大的虫种之一,主要危害8～18周龄的鸡,引起急性小肠球虫病,给养鸡业造成极大的经济损失,因此迫切需要寻找可行的防控措施。鸡球虫的生活史包括孢子生殖、裂殖生殖和配子生殖叁个阶段,其生长发育过程中的一些关键性调控因子可能是防控鸡球虫病的有效作用靶点。在本课题组的前期研究工作中,已应用SMART技术构建了毒害艾美耳球虫子孢子cDNA文库。在此基础上,本研究对该文库进一步筛选,以获取毒害艾美耳球虫的功能基因,并对毒害艾美耳球虫SNF2基因进行克隆表达和免疫原性分析,为研究毒害艾美耳球虫亚单位疫苗奠定基础。首先,用免疫学和质粒文库两种方法对毒害艾美耳球虫子孢子cDNA文库进行筛选,获取EST序列。(1)免疫学方法:用制备的鼠抗子孢子可溶性蛋白多抗作为一抗,对文库进行筛选,初筛得到40个疑似阳性克隆,经两次复筛后获得190个阳性克隆;将复筛得到的阳性噬菌体载体λTriplEx2转化为质粒载体pTriplEx2后,送公司测序,得到26条球虫基因组的EST序列,共5个重迭群。(2)质粒文库方法:直接将λTriplEx2噬菌体文库转化为pTripIEx2文库,选出150个克隆,送公司测序,得到53条EST序列,共21个重迭群。比较两种方法获得的EST序列,有5条序列相同。对21个重迭群的生物信息学分析显示,其分别编码参与DNA复制过程的SNF2家族解旋酶、延伸因子G,参与RNA前体剪接过程的剪切因子,调节蛋白如丝氨酸蛋白酶抑制剂,参与细胞周期调控的PUA结构域蛋白,线粒体内膜tim17亚单位,结构域蛋白如丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶、腺苷酸环化酶相关蛋白,子孢子入侵相关的微线体蛋白mic-1、核糖体蛋白、顶体膜抗原、MA2(ma-2)mRNA,Etm033F10 假设蛋白,Etm087F12 假设蛋白,Etm032G09 假设蛋白和Etm128F02假设蛋白。其次,从获得的EST序列中选取毒害艾美耳球虫SNF2基因开展研究。根据GenBank中毒害艾美耳球虫SNF2基因序列设计3对引物,用RT-PCR的方法,通过分段扩增再拼接的方法获得了毒害艾美耳球虫全长SNF2基因序列,并对该基因进行了氨基酸序列、功能结构域等分析研究。该基因全长3 426 bp。接着对SNF2基因N端结构域序列进行截短原核表达,表达的融合蛋白大小为36 kDa左右,主要以包涵体形式存在。用表达产物制备鼠多抗,再以该多抗经Western blot检测子孢子可溶性蛋白,发现天然的SNF2蛋白大小为120 kDa左右,与预测的理论值相符。最后,将纯化复性的重组蛋白rEnSNF2按不同剂量(200、100、50 μg/羽)免疫无球虫感染的雏鸡,免疫2次后,除未免疫未攻虫组外,其余各试验组均感染毒害艾美耳球虫孢子化卵囊,以成活率、卵囊减少率、病变记分、平均增重等为指标,评测重组蛋白的免疫保护效果。结果显示,rEnSNF2以每羽鸡200μg的免疫剂量保护效果最好,与未免疫未攻虫组相比,重组蛋白rEnSNF2能降低病变记分与卵囊产量,提高存活率,并能诱导机体产生特异性抗体。(本文来源于《扬州大学》期刊2018-04-01）
尹国,路正营,李世云,韩永亮,张朝军[5]（2018）在《利用RNAi研究棉花SSH文库上调表达EST的功能》一文中研究指出为了进一步研究棉花体细胞胚胎发生的分子机制,采用RNAi技术,利用棉花生物学国家重点实验室在表达载体p BI121的基础上成功改造的双元表达载体pCRI1210,构建了针对棉花胚性愈伤组织抑制性消减文库中上调表达的4个ESTs干涉载体pCRI210-EST(EST-418、EST-447、EST-496和EST-653)。以从中棉所24中筛选出的体细胞胚胎分化率较高的株系W10的无菌苗下胚轴切段为受体,利用农杆菌介导法转化pCRI1210-EST干涉载体,浸染后的下胚轴切段在愈伤组织诱导培养基上进行分化。利用半定量RT-PCR技术检测愈伤组织的cDNA。结果表明,转化4个ESTs干涉载体后的胚性愈伤组织中均检测到了载体骨架,证明干涉载体均成功整合进了基因组DNA中,而4个ESTs对应的cDNA的表达量均出现不同程度的下调,不同干涉载体转化的下胚轴出愈率呈现上升和下降2种结果。其中转化EST-418干涉载体的下胚轴出愈率与对照相比有所提高,转化EST-447、EST-496和EST-653干涉载体的下胚轴出愈率与对照相比出现不同程度的下降。因此推断,4个ESTs在愈伤组织分化过程中发挥着不同的作用。其中,EST-418在棉花体细胞胚胎发生过程中起抑制作用,而EST-447、EST-496和EST-653国外品种中在棉花体细胞胚胎发生过程中起促进作用,其结果为分离棉花体细胞胚胎发生相关基因提供了技术和理论支撑。(本文来源于《华北农学报》期刊2018年01期）
姚健,陈庆隆,钟国祥,马吉平,桂伦[6]（2018）在《牛瘤胃宏基因组文库来源的新型木聚糖酶基因的克隆、表达及酶学性质》一文中研究指出为了从牛瘤胃的微生物中获取新型的木聚糖酶,采用直接法提取牛瘤胃内容物微生物总DNA,构建宏基因组文库,通过功能驱动法筛选得到1个木聚糖酶基因(yh-1),该基因大小为987 bp,编码329个氨基酸;SDS-PAGE电泳分析YH-1的相对分子量为36.2 kDa,该酶的最适反应温度和最适反应pH是50℃和8.0~8.5;该酶有较强的温度稳定性,50℃条件下保温60 min,仍保留90%以上的剩余酶活性,65~75℃保留80%以上的剩余酶活性;2 mmol/L Zn~(2+)、Na~+、Co~(2+)和Ni~(2+)对该酶具有一定的激活作用;经过24 h的处理后,该酶可以从玉米芯、稻草和甘蔗叶中分别获得0.014、0.381和0.19 mg的还原糖。上述特征使得该酶在烘焙体系以及其他领域具有广泛的应用前景。(本文来源于《微生物学杂志》期刊2018年01期）
张宏梅,郑文彧,刘迪,时文艳,孙宏宇[7]（2018）在《棘阿米巴表达文库的免疫学筛选》一文中研究指出通过棘阿米巴感染兔血清对棘阿米巴原虫全长cDNA文库进行免疫学筛选,采用角膜注射的方法构建棘阿米巴感染兔模型,收集感染后第1、7、14、21、28、35、42天兔血清,ELISA法测定抗体滴度;选用感染后第7、14、21天和28天混合血清对c DNA文库进行免疫学初筛和复筛;阳性克隆送样测序,并进行PCR鉴定和序列分析。结果:角膜刮片镜检,感染动物试验组均检出棘阿米巴的包囊和滋养体,感染血清抗体滴度在感染后第7天升高显着,在感染后第28天达到高峰;经免疫学筛选共获得3个阳性克隆,经测序和PCR鉴定,3个克隆的插入序列和ORF长度分别为:actin1,774 bp、polyubiquitin,234 bp和HSP20,564 bp。本研究为进一步棘阿米巴原虫感染的快速诊断试剂和免疫预防分子的筛选奠定基础。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2018年01期）
赵爱云,齐萌,江春雨,井波[8]（2017）在《基于Gateway技术的E.stiedai孢子化卵囊cDNA表达文库构建》一文中研究指出为深入研究斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)的分子生物学特征,揭示其与宿主细胞的互作及免疫机理,以E.stiedai阿拉尔分离株的新鲜孢子化卵囊为材料,采用Gateway技术分别构建了E.stiedai孢子化卵囊cDNA原核和慢病毒表达文库,并测定了文库质量。分析表明,表达文库平均插入片段大小为1.5kb,重组率为100%,慢病毒表达文库和原核表达文库容量分别为3.5×106,3.9×106 CFU/mL,符合高质量文库的标准,可用于进一步开展相关基因的克隆及功能研究,为研究E.stiedai的入侵及免疫机制奠定基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2017年12期）
郑林格[9]（2017）在《宏基因组文库中卤化酶基因簇的筛选与表达》一文中研究指出土壤是一个庞大且极其复杂的生态系统,1克的土壤环境中,大约有105种微生物。不同的微生物基因组含有不同的天然产物合成基因簇,蕴含着丰富的微生物基因资源。微生物是许多生物活性天然产物(抗癌抗肿瘤药物、抗生素、生物酶)的主要来源之一。但是,根据现有的实验室条件以及传统的微生物分离培养方法,大约只有不到1%的微生物能够被培养出来,很大程度上限制了环境微生物资源的发掘与利用。为了最大程度上从环境微生物中获取新的基因信息和天然活性产物,可以先把环境中的全部微生物基因作为研究对象,然后再转入到可培养的微生物中进行异源表达,这种技术方法被称作宏基因组技术。这种方法可以极大程度上增加环境微生物基因资源的利用和获得新型活性天然产物的可能。迄今为止,有4700余种含卤天然产物被发现,并开发了多种抗生素包括免疫调节剂、抗肿瘤药物和酶抑制剂等活性物质。天然产物的卤化过程通常由卤化酶催化,卤素取代基深刻影响天然活性产物的多样性,卤元素的添加对化合物的生物活性产生较大的影响,所以筛选含有卤化酶基因的单克隆对发掘新的卤化物极为重要。本课题组以云南土壤为样品来源,构建了云南土壤宏基因组文库。实验中先对云南土壤宏基因组文库中的菌液利用卤化酶兼并引物和PCR扩增的方法筛选含有卤化酶基因的阳性克隆,得到单克隆后进行测序,测序得到的序列在NCBI上与已知的卤化酶序列进行比对,最后对单克隆进行异源表达。在此次实验中共得到31个含有卤化酶基因的阳性单克隆。在所有的单克隆中1076编号用兼并引物筛得的片段大小为800bp左右,后设计特异引物再次筛1076混合菌液,测序结果与用兼并引物筛得的序列相似性为95%,可以认为是同一序列。单克隆测序得到的结果在NCBI上进行比对,比对结果显示筛得的单克隆中含有FADH2型卤化酶基因、色氨酸卤化酶基因。其中 2032-6、2165-1、2264-7、2270、2280-9、2295-5、2401、2435-1、2439-7、2472-4这10个单克隆编号的测序比对结果与已知的卤化酶基因的相似度较高,在85%以上。根据单克隆序列在MEGA上建立Neighbour Joining进化树,对进化树的分支进行分析得出:筛得的大部分单克隆序列与已知的化合物分支距离较远。但是,其中的编号2024-7与clorobiocin同属于一个分支,而且根据编号2024-7的末端测序结果得知,编号2024-7与5-oxoprolinase相似且与5-oxoprolinase底物具有相同的结构,编号 2032-6 所在分支包含了 已知的 balhimycin、ansamitocin、vancomycin、teicoplaincin、glycopeptide antibiotic这四种已知化合物,而且在NCBI序列比对结果中编号2032-6与已知化合物的卤化酶基因序列相似度高达95%。对筛得的单克隆进行转化,转化后进行异源表达。发酵液初提物经高效色谱检测,没有发现特异峰。对没有发酵得到特异峰的单克隆编号分析,分析结果可能是单克隆中不含有完整的卤化酶基因簇,还有一方面可能是转入的表达宿主不合适。(本文来源于《南京农业大学》期刊2017-05-01）
贾传礼[10]（2017）在《毒害艾美耳球虫配子体cDNA文库的构建与筛选及其动力蛋白基因的表达》一文中研究指出鸡球虫病是由一种或数种艾美耳球虫寄生于鸡消化道上皮细胞内而引起的一种原虫寄生虫病,严重危害养鸡业。毒害艾美耳球虫(Eimerianecatrix)是鸡球虫病的重要病原之一,主要危害8～18周龄的鸡,引起鸡的急性小肠球虫病。目前,球虫病的防治主要依赖化学药物或鸡球虫病活疫苗。随着抗球虫药物的广泛与大量使用,球虫耐药性以及人们对药物残留肉蛋、污染环境等诸多问题也随之出现。同时活球虫疫苗又存在生产成本高、容易扩散病原、致弱虫株毒力易返强、虫株的抗原变异、疫苗导致饲料报酬降低、疫苗接种的剂量难以控制等弊端。因此,鸡球虫保护性抗原基因的筛选与克隆表达及其免疫保护力的研究一直是鸡球虫病研究的热点。为此,本文以毒害艾美耳球虫配子体为材料,构建毒害艾美耳球虫配子体cDNA文库,并用免疫学方法从文库中筛选抗原基因,对ENH_00080190基因进行了克隆表达和免疫原性分析,为研究毒害艾美耳球虫亚单位疫苗奠定基础。1毒害艾美耳球虫配子体的分离与纯化24日龄无球虫雏鸡,每鸡经嗉囊感染10 000个毒害艾美耳球虫孢子化卵囊。感染148 h后收取第二代裂殖子。经外科手术方法,将第二代裂殖子直接注入鸡盲肠内,使第二代裂殖子同步发育至配子体;手术后30 h剖检鸡,刮取盲肠黏膜,研磨后用0.5 mmol/L透明质酸酶消化,释放配子体;随后经过60目铜筛、260目锦纶筛兜和17 μm PET膜过滤,滤液经离心洗涤后用裂解液裂解红细胞;最后用30%和50%的Percoll,5 000 rpm离心15 min,分离纯化配子体。结果显示,本法获得的配子体纯度高、数量多,这为研究毒害艾美耳球虫配子体阶段的基因组学、蛋白质组学和免疫学等奠定了基础。2毒害艾美耳球虫配子体cDNA文库的构建用Trizol试剂提取毒害艾美耳球虫配子体总RNA,随后采用SMART技术构建了毒害艾美耳球虫配子体cDNA噬菌体表达文库。经鉴定,结果显示,总RNA的OD260/OD280值为1.95,样品的28S和18S条带清晰,原始文库容量为3.42×106 pfu/mL,重组率为90%,扩增后的文库容量为2.6× 1 010 pfu/mL,插入片段长度250～1000 bp。3毒害艾美耳球虫配子体cDNA文库的筛选首先,制备抗毒害艾美耳球虫的鸡康复血清和鼠抗毒害艾美耳球虫配子体多抗血清;两种血清经ELISA检测,显示两种多抗均有很高的效价;随后,用制备的鼠多抗对文库进行筛选,初次筛选共筛出疑似5个阳性克隆,复筛后确定阳性克隆3个;最后,对复筛后获得的阳性克隆进行PCR鉴定,对获得的EST序列进行生物信息学分析。结果显示,3个EST序列的长度分别为734 bp、270 bp和606 bp,分别编码毒害艾美耳球虫特有蛋白基因、毒害艾美耳球虫动力蛋白基因和毒害艾美耳球虫假定蛋白基因。4毒害艾美耳球虫动力蛋白基因表达及免疫原性分析首先,依据ENH_00080190序列合成毒害艾美耳球虫动力蛋白基因,并将其插入到与载体pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。其次,用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。最后,以毒害艾美耳球虫感染鸡康复血清为一抗进行Western-blot检测。结果显示,基因全长为270 bp,编码89个氨基酸;表达产物大小约为13 kDa,主要以包涵体形式存在;重组蛋白能被鸡康复血清识别,显示重组蛋白具有免疫原性。(本文来源于《扬州大学》期刊2017-05-01）
表达文库论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】通过宏基因组技术获取土壤微生物总DNA,运用基因克隆、功能筛选、基因表达等手段挖掘新型β-葡萄糖苷酶,为新型微生物资源的开发利用提供科学依据。【方法】提取高糖土壤宏基因组DNA,构建宏基因组文库;筛选文库并对阳性克隆子亚克隆,获得β-葡萄糖苷酶基因;PCR扩增目的基因,以pSE380为表达载体构建重组质粒,转化至大肠杆菌进行表达;采用镍亲和层析对重组酶纯化,研究其酶学性质。【结果】成功构建约含9.2万个克隆的高糖土壤宏基因组文库,获得一个新型β-葡萄糖苷酶基因unbgl3A。该基因大小为2241 bp,在氨基酸水平上,与Gen Bank数据库中已知β-葡萄糖苷酶的一致性为73%;该酶最适pH为6.0,最适温度为50℃,对对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-NPG)的K_m值为6.45 m M,V_(max)为50μmol/(mg·min)。在15～50℃热处理1 h后仍保留90%以上的酶活力,热稳定性较好,且被多种糖激活。【结论】宏基因组技术是获取新酶有效手段,获得的Unbgl3A具有良好酶学性质,可为进一步挖掘其应用潜力及研究耐热机理奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
表达文库论文参考文献
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