基于PDMS微孔的单细胞分泌蛋白分析

论文摘要

近年来,多重单细胞蛋白分泌分析提供了对分泌蛋白介导的细胞间通讯及细胞异质性的深入探究。然而,增加从每个单细胞中分析的蛋白质组学参数一直是一个挑战。因此,我们构建由上下两片抗体玻片与PDMS微孔阵列穿孔膜组成的基于PDMS芯片的微型荧光斑点分析平台。两个不同的抗体组可以通过静态涂层固定,无需使用复杂的流体处理或批量设备,实现了多重蛋白质组学参数检测,解析分泌组学特征中的细胞异质性,可以成为分析高通量多重单细胞细胞因子分泌的有力工具,主要内容如下:（1）通过抗体条形码芯片及夹心免疫荧光法对U937群体细胞分泌蛋白进行检测,考察不同刺激条件与刺激时间下U937群体细胞分泌蛋白的影响,我们发现:（a）在相同刺激时间下,加入LPS与PMA刺激剂的组分泌蛋白量明显高于只加入LPS刺激剂的组;（b）在加入相同刺激剂时,分泌蛋白量随着刺激时间增加而增加,并在一定时间点达到峰值,并稳定存在。检测抗体玻片吸附蛋白均一性良好,并验证抗体蛋白能够特异性识别,测得到蛋白含量与荧光强度的标准曲线。（2）设计并制作了 PDMS微孔阵列穿孔膜,通过本分析平台,进行单细胞捕获,可得到1500多个单细胞,保证了实验的单细胞高通量。并进行上下玻片共同检测IL-8分泌蛋白,分析细胞的分泌数据,证明分泌蛋白在顶部和底部抗体载玻片之间的分泌没有显着差异（P=0.188,配对t检验）并且它们表现出高相关性（R=0.98）,这些结果证明了基于PDMS芯片的微型荧光斑点分析平台的成功进行。最后检测了 U937单细胞多重分泌蛋白,同个单细细胞对应的检测区域的分泌蛋白的信号强度均不同,说明了同种单细胞之间分泌功能存在差异,其中,分泌IL-10,IL-1b 比较多,IL-8居中,分泌TNF-a,MCP-1 和 MIP-1b 较少。

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文章来源

类型: 硕士论文

作者: 刘梅梅

导师: 金美花

关键词: 单细胞分析,微孔,分泌蛋白,荧光免疫斑点技术

来源: 大连海事大学

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅱ辑

专业: 生物学,船舶工业

单位: 大连海事大学

分类号: Q26;U672

DOI: 10.26989/d.cnki.gdlhu.2019.000814

总页数: 62

文件大小: 6214K

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