导读:本文包含了毛囊干细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:毛囊,干细胞,受体,陕北,过氧化氢,软膏,绒山羊。
毛囊干细胞论文文献综述
朱广文,谢莉婷,胡蓉,郭小菲,王安宇[1]（2019）在《丹黄散足浴0～2级糖尿病足对毛囊干细胞影响》一文中研究指出丹黄散为临床长期运用中筛选得到的中药复方散剂,对创面愈合具有明确临床疗效;糖尿病足治疗一直是人们探索与解决的问题之一;人毛囊干细胞有多能性及自我更新能力,特别是无限增值能力,能使创面得到完全修复,因此相关研究正在日益受关注。该文通过对丹黄散足浴0～2级糖尿病足对毛囊干细胞影响进行综述,探讨丹黄散对毛囊干细胞影响,以便对糖足特殊靶点上针对治疗,寻找更有效治疗糖足方法。(本文来源于《双足与保健》期刊2019年22期）
黄斐然,王大光,王重阳,朱丰,刘屹球[2]（2019）在《表皮黑素细胞、真皮干细胞及毛囊干细胞等标志分子在获得性色素痣组织上的表达特点》一文中研究指出目的检测获得性色素痣组织中表皮黑素细胞标志分子E钙黏素(E-cadherin)和盘状结构域受体1(DDR-1)、真皮干细胞标志分子神经生长因子受体-75(NGFRp-75)和巢蛋白(nestin)、毛囊干细胞标志分子CD34和角蛋白19(K19)的表达特点并探讨其临床意义。方法选择96例不同部位和不同发生年龄的皮内痣与交界痣标本,免疫组织化学方法检测标本中E-cadherin、DDR-1、NGFRp-75、nestin、CD34和K19的表达并分析其特点。结果不同年龄、不同部位的色素痣中均高表达表皮黑素细胞标志分子和真皮干细胞标志分子,不同发病年龄与不同身体部位间差异无统计学意义。毛囊干细胞标志分子:CD34在有毛区色素痣中有表达,在无毛区色素痣中呈阴性表达;K19在色素痣中呈阴性表达。NGFRp-75、nestin和CD34的阳性表达率较表皮来源的标志分子明显低。皮内痣组织切片上位置较浅的痣细胞E-cadherin、DDR-1和NGFRp-75表达较强,而位置较深的痣细胞表达较弱甚至缺如。结论获得性色素痣的痣细胞可能是多细胞来源,但可能最多的还是来源于表皮黑素细胞。(本文来源于《中国皮肤性病学杂志》期刊2019年09期）
申倩,胡佩欣,钟淑贤,杨亚兰,张赛霞[3]（2019）在《龟板软膏调控毛囊干细胞中的Wnt/β-catenin信号通路修复大鼠急性皮肤创面》一文中研究指出背景:龟板散由龟板、黄连和冰片组成,是治疗皮肤疮疡的有效方剂。中药单体机制明确,龟板的有效单体十四酸甾醇酯可以激活并调控毛囊干细胞中的Wnt/β-catenin信号通路。目的:探讨龟板软膏对大鼠急性皮肤创面的修复效果,以及其作用是否通过调控毛囊干细胞的Wnt/β-catenin信号通路实现。方法:取龟板散各组分中的有效单体十四酸甾醇酯(S8)、盐酸小檗碱及右旋龙脑制备龟板软膏。构建SD大鼠急性皮肤创面模型并随机分为3个药物组:龟板软膏组、S8组和空白对照组,连续给药10d。造模后连续3 d注射BrdU(50 mg/kg)标记增殖细胞。分别于修复第3,5,7及10天计算创面愈合率,苏木精-伊红染色和Masson染色观察创面病理学变化,Western blot法和免疫荧光检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin、LEF1、C-myc及毛囊干细胞的表面标志物CD34和Integrinβ1的表达情况。实验方案经广州中医药大学动物实验伦理委员会批准,批准号为20190218001。结果与结论:①修复第5,7,10天,龟板软膏组的创面愈合率均高于其他组(P <0.05);②龟板软膏组新生表皮与真皮连接紧密,新生皮肤附属器较S8组和空白对照组多,胶原纤维致密,修复效果优于其他组;③龟板软膏组和S8组Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin、LEF1、C-myc及毛囊干细胞的表面标志物CD34、Integrinβ1的阳性表达量均高于空白对照组,β-catenin、CD34和Integrinβ1的阳性表达均上调,LEF1和C-myc的表达呈先上调后下降变化,差异有统计学意义(P <0.05);④龟板软膏组中BrdU标记的增殖细胞数量较其他组多,且同时表达CD34阳性和LEF1阳性;⑤结果提示:龟板软膏可能通过调控毛囊干细胞中的Wnt/β-catenin信号通路,加快大鼠急性皮肤创面的修复,龟板软膏由S8、盐酸小檗碱及右旋龙脑3种有效单体组成,具有稳定性和安全性,其对急性皮肤创面的促愈合效果优于单一有效单体。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年29期）
史明艳,高雪,易力,周新雨,亢君芳[4]（2019）在《过表达IL-6对山羊毛囊干细胞增殖和迁移的影响》一文中研究指出旨在通过在山羊毛囊干细胞(HFSCs)中过表达炎症因子白细胞介素6(IL-6),探讨其对山羊HFSCs增殖和迁移的影响,阐明MAPK/ERK信号通路在山羊HFSCs增殖和迁移过程中发挥的作用。本试验通过构建pXJ40-myc-IL-6过表达载体,瞬时转染到山羊HFSCs中,以空载体细胞为空白对照组。利用Western blot定量检测IL-6蛋白的表达,MTT法检测山羊HFSCs的增殖活力,划痕试验判定山羊HFSCs的迁移能力,最后采用Western blot检测山羊HFSCs中MAPK/ERK和P38信号通路中关键激酶的表达水平。结果表明,将获得的IL-6过表达载体转染至山羊HFSCs 3 d后,与对照组比较,山羊HFSCs的增殖活力出现抑制,且抑制效果持续至第7天(P<0.05)。IL-6过表达载体转染至山羊HFSCs 24 h后,处理组划痕部位的愈合率达到84.2%,显着低于对照组的98.5%(P<0.01)。与对照组相比,MAPK/ERK信号通路中的关键激酶ERK1/2的磷酸化水平(p-ERK1/2)显着下调(P<0.01),P38信号通路中的关键激酶p38的磷酸化水平(p-p38)表达量上调,但差异无统计学意义(P>0.05)。综上所述,过表达IL-6基因对山羊HFSCs的增殖和迁移能力具有抑制作用,且过表达IL-6可能是通过MAPK/REK信号通路对山羊HFSCs增殖和迁移发挥负性调控作用,以上结果为揭示山羊HFSCs的迁移及组织修复机制的研究提供依据。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2019年06期）
时佳宏[5]（2019）在《NANOG在过氧化氢诱导人毛囊间充质干细胞损伤的保护作用及机制研究》一文中研究指出目的过氧化氢(Hydrogen Peroxide,H2O2)是目前常用染发剂的主要成分之一,可损伤毛发。人毛囊毛乳头部位含有丰富的毛囊间充质干细胞(Hair Follicle Mesenchymal Stem Cells,HF-MSCs),HF-MSCs参与毛囊发生、毛囊周期循环和毛囊再生等重要过程。NANOG(The Transcription Factor of Embryonic Stem Cells,胚胎干细胞转录因子)是一种维持干细胞自我更新和多潜能分化的核心转录因子,在促进间充质干细胞增殖、维持未分化状态中发挥重要作用,但作用机制尚不十分清楚。本研究旨在通过探讨NANOG对HF-MSCs细胞生物学行为的影响并明确作用机制,利用H2O2建立HF-MSCs损伤模型,从而探讨NANOG对H2O2诱导HF-MSCs损伤的保护作用及机制,为毛囊再生及毛囊损伤修复的研究提供理论依据。方法1.第一部分实验中,首先通过拔取毛发结合组织块培养法从人毛囊组织中分离获取HF-MSCs。通过免疫荧光染色和流式细胞术鉴定间充质干细胞表面标志,茜素红S和油红O染色鉴定成骨、成脂分化潜能。利用慢病毒包装方法将携带NANOG编码序列的载体转导HF-MSCs。通过绘制生长曲线、流式细胞术检测细胞周期、衰老β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老、Western Blot检测PARP1、AKT、p-AKT、ERK和p-ERK蛋白表达,探讨NANOG对HF-MSCs细胞生物学行为的影响。通过Western Blot检测蛋白表达并结合双萤光素酶报告基因检测,探讨NANOG和PBX1的调控关系。此外,通过RNA干扰技术敲减PBX1和AKT以及加入PI3K/AKT抑制剂LY294002,探讨NANOG、PBX1和AKT叁者之间的关系。2.第二部分给予HF-MSCs一定剂量H2O2后,CCK-8法检测细胞存活率、镜下观察细胞形态学改变、荧光探针检测细胞内ROS水平及Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率。Western Blot法检测AKT、p-AKT、ERK、p-ERK、PARP1和Caspase-3蛋白表达。3.第叁部分通过检测H2O2处理后细胞存活率、细胞内ROS水平、细胞凋亡率,探讨NANOG是否具有保护作用,Western Blot检测AKT、p-AKT、PARP1蛋白,利用PI3K/AKT抑制剂LY294002和RNA干涉敲减PARP1(116 k Da)后,检测细胞存活率、细胞内ROS水平明确NANOG减轻H2O2对HF-MSCs损伤的机制。结果1.异位表达NANOG对HF-MSCs细胞生物学影响(1)分离获取HF-MSCs,其表达间充质干细胞表面标志CD105、CD90、CD73、CD44,并具有成骨、成脂分化潜能。(2)细胞生长曲线第6天和第8天结果发现,异位表达NANOG和过表达PBX1细胞数明显多于对照组(Vector组);细胞周期结果发现,异位表达NANOG和过表达PBX1减少G0/G1期阻滞,增加S期;NANOG组和PBX1组增殖指数高于对照组。(3)NANOG组和PBX1组钙盐结节形成比例均多于对照组;NANOG组和PBX1组脂滴形成均少于对照组。(4)第6代和第14代NANOG组和PBX1组衰老细胞阳性率明显低于对照组。(5)Western Blot结果发现,和对照组比较,NANOG组和PBX1组PARP1(116 k Da)表达上调、p-AKT表达增加且p16、p53、p21表达下降。(6)NANOG异位表达的PBX1蛋白表达明显高于对照组;通过双萤光素酶报告基因检测发现,NANOG组萤光素酶活性明显高于对照组。(7)NANOG异位表达后敲减PBX1显着下调p-AKT表达并增加衰老细胞阳性率。(8)NANOG异位表达后加入PI3K/AKT抑制剂LY294002显着下调p-AKT表达和PBX1表达并增加衰老细胞阳性率。(9)NANOG异位表达后敲减AKT显着下调PBX1、p-AKT和AKT表达并增加衰老细胞阳性率。2.H2O2对HF-MSCs的损伤作用及机制(1)通过CCK-8法检测不同浓度(0μM、100μM、200μM、400μM、800μM)H2O2处理2 h和400μM H2O2处理不同时间(0 h、1 h、2 h、4 h、6 h)细胞存活率,随着H2O2处理浓度升高和H2O2作用时间延长,细胞存活率下降明显。(2)不同浓度H2O2处理2 h,随着浓度升高,镜下观察细胞逐渐失去正常形态,存活细胞数目减少;荧光探针检测发现细胞内ROS水平逐渐升高;Annexin V-FITC/PI法检测发现细胞凋亡率明显升高。(3)Western Blot结果显示,随着浓度增加,p-AKT表达先升高后下降,p-ERK表达逐渐下降,cleaved caspase-3表达明显增多,PARP1(116 k Da)表达下降,PARP1(89 k Da)表达上调;随着时间增加,p-AKT表达下降,p-ERK表达下降,cleaved caspase-3表达明显增多,PARP1(116 k Da)表达下降,PARP 1(89 k Da)表达上调。3.NANOG对H2O2致HF-MSCs损伤的保护作用及机制(1)NANOG-H2O2组和PBX1-H2O2组细胞存活率明显高于Vector-H2O2组,ROS水平明显低于Vector-H2O2组。(2)Vector-H2O2组细胞凋亡率明显高于对照组;NANOG-H2O2组和PBX1-H2O2组细胞凋亡率均低于Vector-H2O2组。(3)NANOG-H2O2组和PBX1-H2O2组p-AKT表达明显高于Vector-H2O2组;加入PI3K/AKT抑制剂LY294002,NANOG-H2O2组和PBX1-H2O2组细胞存活率高于抑制剂LY294002组且ROS水平低于抑制剂LY294002组。(4)NANOG-H2O2组和PBX1-H2O2组PARP1(116 k Da)表达明显高于Vector-H2O2组;Vector-H2O2组PARP1(89 k Da)表达明显高于对照组。通过RNA干涉敲减PARP1(116 k Da),NANOG-H2O2组和PBX1-H2O2组细胞存活率高于敲减组且ROS水平低于敲减PARP1组。结论1.NANOG通过PBX1上调p-AKT促进人毛囊间充质干细胞增殖并延缓衰老,且PBX1和AKT之间存在双向调控。2.H2O2作用降低p-AKT和p-ERK表达,增加cleaved caspase-3和PARP1(89 kDa)表达,引起人毛囊间充质干细胞损伤。3.NANOG通过PBX1上调p-AKT和PARP1(116 k Da)减轻H2O2引起的人毛囊间充质干细胞损伤。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
郭景旭[6]（2019）在《小鼠触须毛囊外根鞘体外再生模型的建立及干细胞迁移特征分析》一文中研究指出目的观察小鼠触须毛囊外根鞘体外再生过程中形态变化,探究小鼠触须毛囊外根鞘体外再生过程中干细胞动态分布、增殖分化以及迁移特征,初步探讨这些特征与小鼠触须毛囊外根鞘体外再生的关系。方法体外无菌条件下,使用解剖显微外科剪对3 d龄昆明乳鼠触须解剖并分离出毛囊外根鞘,进行体外毛囊外根鞘气液界面叁维培养,OCT包埋,HE染色观察毛囊外根鞘再生形态;免疫荧光染色法观察干细胞及中性粒细胞在毛囊外根鞘体外再生过程中的动态变化。结果1、通过HE染色观察体外培养不同时期的小鼠触须毛囊外根鞘组织结构,创伤第5 d毛囊外根鞘再生趋于完整。2、细胞增殖EdU染色发现,细胞增殖由玻璃膜外围启动,并逐渐向玻璃膜内部表达,最终形成毛囊样结构。3、细胞凋亡TUNLE染色发现,小鼠触须毛囊外根鞘培养1 d时,玻璃膜处细胞凋亡增多;在培养至5 d时,随着玻璃膜内部细胞增殖逐渐增加,凋亡细胞散落分布于玻璃膜内部。4、α-SMA染色结果发现,小鼠触须毛囊外根鞘再生后新生细胞由骨架蛋白相连,再生结构趋于完整。5、干细胞标记物CD34、CD200免疫荧光显示,外根鞘再生过程中CD34、CD200阳性细胞向再生部位迁移。6、巨噬细胞F4/80及中性粒细胞LY6G免疫荧光结果发现:创伤后发生炎症反应,巨噬细胞受到创伤刺激后向炎症部位迁移,并在外根鞘玻璃膜外围形成一层细胞层。结论分离的小鼠触须毛囊外根鞘在培养第5d时初步重塑毛囊基本形态,毛囊干细胞由隆突部开始表达并参与母体外根鞘形态重塑,中性粒细胞和巨噬细胞在再生过程中发挥着重要作用。(本文来源于《塔里木大学》期刊2019-06-01）
赵贵芳,彭林茂,何江双,王鑫源,贾旭[7]（2019）在《毛囊间充质干细胞研究进展》一文中研究指出毛囊间充质干细胞是来源于毛囊中胚层中的一类具有较强的增殖能力及多向分化能力的多能干细胞。毛囊间充质干细胞易于获得、对机体无损伤、无论理性争议,因此成为再生医学领域的重要种子细胞。毛囊间充质干细胞体外培养并定向分化的研究成为近年来一个热点研究方向。本文将对其近几年研究进展做一个阶段性的总结,并讨论其临床应用前景。(本文来源于《吉林医药学院学报》期刊2019年03期）
闫海龙[8]（2019）在《陕北白绒山羊毛囊干细胞增殖分化相关miRNA的鉴定及功能研究》一文中研究指出陕北白绒山羊是我国重要的绒山羊品种,其羊绒具有极大的经济价值。绒毛的周期性生长与毛囊干细胞及其毛乳头细胞相互调控有着密切的联系。本研究初步探究毛乳头细胞来源外泌体对毛囊干细胞增殖分化的影响。首先在体外培养分离陕北白绒山羊毛囊干细胞和毛乳头细胞来源外泌体;通过对毛囊干细胞与毛乳头细胞共培养组和对照组进行精准定量转录组和mi RNA测序分析,以及对毛乳头细胞和毛乳头细胞来源外泌体进行mi RNA测序分析,筛选出与毛囊干细胞增殖分化相关的关键基因及mi RNA;利用双荧光素酶报告系统检测毛乳头细胞来源外泌体的mi R-22-5p和let-7b-5p与预测靶基因的靶向关系,并探究mi R-22-5p和let-7b-5p对毛囊干细胞增殖分化的调控作用。本研究取得主要研究结果如下:1.利用毛囊贴壁法成功分离出陕北白绒山羊毛囊干细胞,结合Ⅳ型胶原快速差异贴壁法和流式细胞分选法得到高纯度的毛囊干细胞。通过显微镜和透射电镜进行形态学观察,发现所收集的细胞具有毛囊干细胞的特征;而且表达CD34,K15和ITGβ1等毛囊干细胞的分子标记;成功建立毛囊干细胞与毛乳头细胞共培养诱导分化为毛囊细胞的体系。2.成功构建陕北白绒山羊毛囊干细胞与毛乳头细胞共培养组和对照组样品的6个m RNA文库和6个Small RNA文库。转录组测序分析发现两组样品中共表达的基因有12802个,差异表达的基因有656个,其中上调基因有342个,下调基因有314个;靶基因GO和KEGG富集分析结果表明,这些差异表达的基因与TNF、p53、Apoptosis等信号通路相关。mi RNA测序分析发现两组样品间差异表达的mi RNA有13个,其中上调mi RNA有6个,下调mi RNA有7个;筛选出4个关键候选mi RNA,分别为mi R-1、mi R-151-3p、mi R-182、mi R-143-3p;靶基因GO和KEGG富集分析结果发现,靶基因与RNA transport、Legionellosis通路相关。m RNA与mi RNA联合分析发现差异基因主要富集在TNF、Fox O和Amphetamine addiction叁个通路,与细胞增殖,凋亡和代谢有关。3.利用梯度离心和超速离心,从陕北白绒山羊毛乳头细胞体外培养基中成功分离出细胞外囊泡,通过外泌体标志性蛋白、粒径大小和透射电镜观察等证明,分离得到的细胞外囊泡为外泌体。在体外通过Transwell小室将毛囊干细胞与Di I标记的毛乳头细胞共培养,以及用Di I标记的外泌体孵育毛囊干细胞,证明毛乳头细胞来源外泌体可以运输到毛囊干细胞,且毛囊干细胞能够摄取毛乳头细胞来源外泌体。4.成功构建毛乳头细胞及其外泌体的6个Small RNA文库。测序分析发现271个已知的mi RNA,其中187个mi RNA共表达,79个mi RNA在毛乳头细胞特异表达,5个mi RNA在毛乳头细胞来源外泌体特异表达;在毛乳头细胞和毛乳头细胞来源外泌体差异表达的mi RNA有111个,在毛乳头细胞来源外泌体49个mi RNA上调,62个mi RNA下调;在外泌体上调的49个mi RNA中,mi R-21-5p、mi R-143-3p、let-7i-5p、mi R-148a-3p、let-7b-5p表达量位于前五。同时还发现336个新mi RNA,其中141个mi RNA在毛乳头细胞和毛乳头细胞来源外泌体中差异表达。5.毛乳头细胞和毛乳头细胞来源外泌体差异表达的mi RNA预测得到33055个靶基因;GO富集分析结果表明,靶基因主要富集在细胞组分的胞外区域等功能子集,分子功能的结合和催化活性等功能子集以及生物过程的大分子修饰等功能子集;KEGG生物学通路注释发现,靶基因注释到271个通路中,主要参与了细胞信号转导、胞吞作用、蛋白质表达调节、脂质和脂肪酸代谢。6.成功构建了mi R-22-5p候选靶基因IGF1R,SOX9,MSI2,FOXC1,FOXP1和LEF1的双荧光素酶报告载体;双荧光素酶报告系统检测结果表明,LEF1是mi R-22-5p的靶基因,mi R-22-5p能够靶向调节预测的LEF1的靶位点;在毛囊干细胞中过表达mi R-22-5p发现,mi R-22-5p经由AKT信号通路抑制毛囊干细胞的增殖,但对毛囊干细胞向毛囊细胞分化无显着影响。7.成功构建了let-7b-5p候选靶基因KDM6A,FOXC1和MSI2的双荧光素酶报告载体;双荧光素酶报告系统检测结果表明,FOXC1和MSI2是let-7b-5p的靶基因,let-7b-5p能够靶向调节预测的FOXC1和MSI2的靶位点;在毛囊干细胞中过表达let-7b-5p,发现let-7b-5p经由AKT信号通路抑制毛囊干细胞的增殖,并通过激活Notch信号通路从而促进毛囊干细胞向毛囊细胞分化。综上所述,本研究成功分离得到陕北白绒山毛囊干细胞及毛乳头细胞来源外泌体。通过对毛囊干细胞与毛乳头细胞共培养组和对照组进行转录组和mi RNA测序,以及毛乳头细胞和毛乳头细胞来源外泌体的mi RNA测序,利用生物学信息分析筛选出影响毛囊干细胞增殖分化的关键基因和mi RNA,并验证毛乳头细胞来源外泌体的mi R-22-5p和let-7b-5p对毛囊干细胞增殖分化的调控作用,为进一步阐明调控毛囊干细胞增殖分化及毛囊周期循环的分子机理奠定基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-05-01）
卢岩[9]（2019）在《OCT4通过调节DNMTs/p21信号维持人毛囊间充质干细胞自我更新和抑制衰老的作用》一文中研究指出人毛囊间充质干细胞(human Hair Follicle Mesenchymal Stem Cells,hHFMSCs)具有易获取、安全和免疫原性低等特点,有望成为再生医学领域的种子细胞来源之一。然而,hHFMSCs经一定时间体外培养后失去维持自我更新能力,衰老细胞增多,极大程度上限制hHFMSCs的应用。因此,深入了解hHFMSCs自我更新和衰老的细胞生物学机制,为hHFMSCs在再生医学,特别是个体化细胞疗法的应用提供理论和实验依据。干细胞维持自我更新表现为维持细胞的增殖状态和多向分化潜能,细胞不发生分化。目前认为,干细胞自我更新的调节以OCT4、SOX2和NANOG为中心的转录调控网络和DNA甲基化等表观遗传修饰共同抑制分化基因并激活干性基因。其中,OCT4作为最上游的转录因子之一,在维持自我更新中起关键作用。OCT4可以消除G1阻滞并刺激细胞进入S期,促进G1/S转换。这是一种独特的细胞周期进程,是干细胞自我更新所必须的。作为调控细胞周期进程的关键点,G1/S转换主要受G1调节分子的调节,这些调节分子中,p21是通用细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(cyclin-dependent kinase inhibitors,CDKI)的成员,并且在调节G1/S转换中起关键作用。同时,作为衰老的标志基因,p21在调控细胞衰老的过程中起关键作用。由于p21启动子区含有高密度的潜在甲基化CpG岛,p21基因转录水平受DNA甲基化调节。有趣的是,研究发现,DNA甲基化转移酶(DNMT1、DNMT3a和DNMT3b)的启动子区存在OCT4结合位点,OCT4可转录调控DNMTs的表达。由此推测,OCT4转录激活DNMTs,促进p21启动子区DNA甲基化,抑制p21表达,从而维持细胞的自我更新并抑制衰老。目的探讨OCT4通过DNMTs/p21信号维持hHFMSCs自我更新和抑制细胞衰老的作用及机制。方法一、OCT4对hHFMSCs自我更新能力和衰老的影响1.过表达OCT4的hHFMSCs(hHFMSCs~(OCT4))的建立及验证:利用慢病毒载体过表达OCT4;RT-qPCR、western bolt及流式细胞术检测hHFMSCs~(OCT4)中OCT4的表达;免疫荧光法检测OCT4的表达和定位。2.OCT4对hHFMSCs自我更新能力的影响细胞动态监测仪、细胞计数法、二维克隆形成和成球实验检测hHFMSCs增殖能力;流式细胞术检测细胞周期;western blot检测增殖相关蛋白PCNA和cyclin D1的表达;免疫荧光法检测Ki67的表达;成骨分化诱导实验检测成骨分化潜能;RT-qPCR检测分化相关基因的表达。3.OCT4对hHFMSCs衰老的影响透射电镜检测OCT4对细胞超微结构的影响;SA-β-gal实验检测β-半乳糖苷酶表达;RT-qPCR检测衰老相关基因p21、p16和hTERT的表达。二、OCT4维持hHFMSCs自我更新能力并抑制衰老的机制1.OCT4对基因表达谱的影响利用NGS,筛选hHFMSCs~(EGFP)和hHFMSCs~(OCT4)差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs);GO分析富集基因功能;KEGG分析富集信号通路。2.OCT4下调p21维持hHFMSCs自我更新并抑制衰老在hHFMSCs~(OCT4)中,利用慢病毒载体过表达p21,通过RT-qPCR和western blot进行鉴定;CCK8和二维克隆形成实验检测hHFMSCs~(OCT4)增殖;western blot检测PCNA和cyclin D1的表达;免疫细胞化学检测Ki67的表达;成骨分化诱导实验检测成骨分化潜能;SA-β-gal实验检测β-半乳糖苷酶表达;RT-qPCR检测p16和hTERT的表达。3.OCT4调节p21表达的方式利用RT-qPCR和western blot检测hHFMSCs~(OCT4)中DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的表达;ChIP实验检测OCT4调节与DNMT1、DNMT3a和DNMT3b启动子区结合情况;甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)检测p21启动子区DNA甲基化状态。4.OCT4通过DNMTs/p21信号维持hHFMSCs自我更新并抑制衰老抑制剂5-aza-dC/zebularine处理后,western blot检测DNMTs以及p21的表达;MSP检测p21启动子区DNA甲基化状态;CCK8和二维克隆形成实验检测hHFMSCs~(OCT4)的增殖;流式细胞术检测细胞周期;western blot检测PCNA和cyclin D1的表达;免疫荧光技术检测Ki67的表达和定位;成骨分化诱导实验检测成骨分化潜能;RT-qPCR检测分化相关基因的表达;透射电镜检测细胞超微结构;SA-β-gal实验检测β-半乳糖苷酶表达;RT-qPCR检测p16和hTERT的表达。结果一、OCT4对hHFMSCs自我更新能力和衰老的影响1.过表达OCT4的hHFMSCs(hHFMSCs~(OCT4))的建立及鉴定成功获得过表达OCT4的hHFMSCs;hHFMSCs~(OCT4)中高表达OCT4,主要定位于细胞核。2.OCT4对hHFMSCs自我更新能力的影响OCT4促进hHFMSCs增殖和细胞周期进程;上调PCNA、cyclinD1和Ki67的表达,表明OCT4促进hHFMSCs的增殖;促进细胞成骨分化潜能;抑制分化相关基因的表达,表明OCT4维持hHFMSCs自我更新。3.OCT4对hHFMSCs衰老的作用透射电镜显示,hHFMSCs~(OCT4)细胞增殖旺盛,状态良好;OCT4抑制SA-β-gal的表达;下调p21和p16的表达,上调hTERT的表达,抑制hHFMSCs衰老。二、OCT4维持hHFMSCs的自我更新并抑制衰老的机制1.OCT4对基因表达谱的影响GO分析结果显示,上调的DEGs显着富集于细胞周期的G1/S转换;KEGG分析结果显示,上调的DEGs主要富集在细胞周期。提示,OCT4维持hHFMSCs自我更新和抑制衰老与细胞周期有关,并选出下游基因p21作为后续研究对象。2.OCT4下调p21维持hHFMSCs自我更新并抑制衰老过表达p21的hHFMSCs~(OCT4),细胞的增殖、二维克隆形成能力明显被抑制;PCNA和Ki67表达下调,cyclin D1表达水平无明显变化;成骨分化能力明显抑制;SA-β-gal染色阳性细胞显着增多;p16表达上调,hTERT表达下调。说明,OCT4是通过下调p21维持hHFMSCs自我更新并抑制衰老。3.OCT4调节p21表达的方式过表达OCT4后,DNMTs表达显着上调;ChIP实验结果显示OCT4与DNMTs的启动子区结合;MSP结果显示过表达OCT4后p21启动子区DNA甲基化水平明显升高。表明,OCT4通过转录激活DNMTs,抑制p21的表达。4.OCT4通过DNMTs/p21信号维持hHFMSCs自我更新和抑制衰老抑制剂5-aza-dC/zebularine处理细胞后,DNMTs表达下调,p21表达上调;p21启动子区DNA甲基化水平下调。hHFMSCs~(OCT4)增殖明显被抑制;细胞周期发生阻滞;成骨分化潜能明显抑制;分化相关基因表达上调;电镜和SA-β-gal染色结果显示衰老细胞增多;p21和p16表达显着上调,而hTERT表达下调。以上结果表明,OCT4维持hHFMSCs自我更新并抑制衰老是通过转录激活DNMTs,抑制p21的表达实现的。结论1.OCT4促进hHFMSCs的增殖和成骨分化潜能,维持自我更新能力,同时抑制细胞衰老。2.OCT4与DNMT1、DNMT3a和DMMT3b的启动子区结合,上调DNMTs,抑制p21表达,进而维持hHFMSCs的自我更新并抑制衰老。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-05-01）
李艳[10]（2019）在《miR-1对陕北白绒山羊毛囊干细胞增殖分化的影响》一文中研究指出陕北白绒山羊是绒肉兼用型的地方培育品种,其皮肤次级毛囊所生长的毛发纤维(羊绒)因其优良的性状而具有极高的经济价值。miRNA是一类在大多数情况下结合在靶基因3’-UTR区引起靶基因降解或抑制mRNA翻译,进行转录后调控的非编码小分子。研究表明多种miRNAs对毛囊周期性发育过程进行调控,然而对于miRNAs如何调控陕北白绒山羊绒毛生长发育相关机制尚不清楚。本课题组前期对绒山羊毛乳头细胞和毛乳头来源外泌体的miRNAs测序分析发现miR-1在外泌体中特异性表达,且表达量较高。为了解析miR-1对绒山羊皮肤毛囊干细胞(HFSCs,Hair follical stem cells)生长发育的影响,本研究利用相关分子生物学手段来探究miR-1在毛囊周期性发育中的作用机理。试验过程及具体结果如下:1.过表达miR-1后,分别利用CCK8、EdU和流式细胞仪检测细胞周期技术来探究miR-1对陕北白绒山羊HFSCs增殖、凋亡等的调控作用。结果表明,过表达miR-1后HFSCs增殖能力显着减弱(p<0.01),处于S期的细胞比例显着减少(p<0.01),而处于G0-G1期的细胞比例显着增加,表明细胞被阻滞在了G0-G1期。以上结果表明miR-1的过表达会抑制HFSCs的增殖。2.qPCR及Western blot检测miR-1对HFSCs增殖分化信号通路的影响。结果表明,过表达miR-1后,细胞增殖标记基因KI67和PCNA,以及AKT的mRNA和蛋白表达水平均显着低于对照组(P<0.05),表明miR-1的过表达抑制了HFSCs中细胞增殖标志基因KI67、PCNA的表达,并通过调控AKT通路来抑制HFSCs的增殖;与NC组相比,mimics组K6、S100A3和Notch1的mRNA和蛋白表达水平均显着高于对照组(P<0.05),表明HFSCs中miR-1的过表达促进了细胞分化标志基因K6和S100A3的表达,并通过激活Notch通路来促进HFSCs分化。3.利用RNAhybrid和TargetScan 7.1软件对miR-1的靶基因进行预测,根据预测结果克隆候选靶基因靶位点所在的3’-UTR区,并成功构建了miR-1候选靶基因FOXP1、FOXC1、IGF1R、SOX9、MSI2和LEF1的野生型和突变型的双荧光素酶报告载体。将miR-1 mimics与野生型/突变型载体质粒共转染293T细胞,双荧光素报告基因实验显示miR-1能抑制野生型IGF1R和LEF1的靶位点报告载体的荧光素酶活性,但是靶基因结合位点突变后,IGF1R和LEF1被抑制的荧光素酶活性恢复,而FOXP1、FOXC1、SOX9、MSI2的荧光素酶活性仍然显着抑制,表明miR-1与IGF1R和LEF1基因的3’UTR具有靶向关系。综上所述,miR-1能够有效调节绒山羊HFSCs的增殖与分化过程,为进一步研究陕北白绒山羊毛囊周期性发育提供了一定的理论基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-04-01）
毛囊干细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的检测获得性色素痣组织中表皮黑素细胞标志分子E钙黏素(E-cadherin)和盘状结构域受体1(DDR-1)、真皮干细胞标志分子神经生长因子受体-75(NGFRp-75)和巢蛋白(nestin)、毛囊干细胞标志分子CD34和角蛋白19(K19)的表达特点并探讨其临床意义。方法选择96例不同部位和不同发生年龄的皮内痣与交界痣标本,免疫组织化学方法检测标本中E-cadherin、DDR-1、NGFRp-75、nestin、CD34和K19的表达并分析其特点。结果不同年龄、不同部位的色素痣中均高表达表皮黑素细胞标志分子和真皮干细胞标志分子,不同发病年龄与不同身体部位间差异无统计学意义。毛囊干细胞标志分子:CD34在有毛区色素痣中有表达,在无毛区色素痣中呈阴性表达;K19在色素痣中呈阴性表达。NGFRp-75、nestin和CD34的阳性表达率较表皮来源的标志分子明显低。皮内痣组织切片上位置较浅的痣细胞E-cadherin、DDR-1和NGFRp-75表达较强,而位置较深的痣细胞表达较弱甚至缺如。结论获得性色素痣的痣细胞可能是多细胞来源,但可能最多的还是来源于表皮黑素细胞。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
毛囊干细胞论文参考文献
[1].朱广文,谢莉婷,胡蓉,郭小菲,王安宇.丹黄散足浴0～2级糖尿病足对毛囊干细胞影响[J].双足与保健.2019
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[3].申倩,胡佩欣,钟淑贤,杨亚兰,张赛霞.龟板软膏调控毛囊干细胞中的Wnt/β-catenin信号通路修复大鼠急性皮肤创面[J].中国组织工程研究.2019
[4].史明艳,高雪,易力,周新雨,亢君芳.过表达IL-6对山羊毛囊干细胞增殖和迁移的影响[J].畜牧兽医学报.2019
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[9].卢岩.OCT4通过调节DNMTs/p21信号维持人毛囊间充质干细胞自我更新和抑制衰老的作用[D].吉林大学.2019
[10].李艳.miR-1对陕北白绒山羊毛囊干细胞增殖分化的影响[D].西北农林科技大学.2019
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