超分辨显微技术结合smFISH方法在E.coli sRNA SgrS定位中的应用

论文摘要

细菌调节小RNA通常与靶mRNA结合,影响翻译和mRNA降解过程.了解细菌小RNA的定量和定位信息,将有助于揭示细菌转录后水平的调控机制.小RNA SgrS通过抑制ptsG mRNA翻译起始,参与细菌磷酸葡萄糖代谢的应激过程.本研究应用单分子荧光原位杂交（smFISH）方法和超分辨显微技术可视化定位大肠杆菌细胞内小RNA SgrS,并初步验证伴侣分子Hfq蛋白和RNaseE降解酶对小RNA SgrS定位的影响.选取大肠杆菌模式菌MG1655 （野生株）、sgrS敲除株（△sgrS）和过表达株（△sgrS-pBAD-SgrS）,使用RNA印迹和smFISH方法验证SgrS的过表达.应用smFISH方法分别在野生菌株、hfq敲除株（△hfq）和rne敲除株（△rne-710）中定位小RNA SgrS和ptsG mRNA,超分辨成像观察.与野生株相比,△hfq和△rne-710中SgrS主要定位于近膜区域,ptsG mRNA定位于细菌胞浆中,并且这两种RNA拷贝数均极显著增加.以上结果表明,分别敲除大肠杆菌hfq和rne-710基因导致SgrS和ptsG mRNA的表达量增加. smFISH方法和超分辨技术的结合应用为细菌RNA的直观定量和定位提供了高敏感性的检测方法,可用于基因调控的功能研究.

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王净,阮崇美,白园园,韩延平,杨瑞馥

关键词: 大肠杆菌,超分辨显微技术

来源: 生物化学与生物物理进展 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 河北北方学院动物科技学院,军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所,信阳农林学院牧医工程学院

基金: 国家重点基础研究发展计划(973计划)(2014CB744405),河北省重点研发计划(18236609D)资助项目~~

分类号: Q75

DOI: 10.16476/j.pibb.2018.0256

页码: 415-422

总页数: 8

文件大小: 1265K

下载量: 141

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