多价抗虫水稻外源Bt基因的多引物多重PCR检测方法

多价抗虫水稻外源Bt基因的多引物多重PCR检测方法

论文摘要

旨在研究多价Bt抗虫转基因水稻的简便有效的检测方法。根据3个Bt转基因事件的插入位置,设计引物,通过多重引物PCR技术,利用9条引物得到6条大小存在明显差异的条带,同时检测3个Bt基因的转基因情况。水稻3个Bt抗虫基因(cry1Ab/Ac、cry2A、cry1C)分别来源TT51-1、T2A-1和T1C-19,其中代表TT51-1事件插入的阳性、阴性条带大小分别为937 bp、718 bp;代表T2A-1事件插入的阳性、阴性条带大小分别为600 bp、434 bp;代表T1C-19事件插入的阳性、阴性条带大小分别为495 bp、792 bp;通过琼脂糖凝胶电泳能快速对转Bt基因插入事件水稻的纯合、杂合、阴性进行检测。该技术克服了多重引物之间可能存在的引物间的相互干扰的技术难度,对不同的PCR试剂有很好的兼容性,可配合水稻DNA的快速提取,迅速对大量选育后代进行分析。该方法的建立为利用多价Bt基因进行抗螟虫水稻分子育种提供了一个简便高效的基因检测技术,有助于提高Bt基因检测效率,加快抗螟虫水稻的育种进程。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 DNA提取方法
  •       1.2.1. 1 碱裂解法
  •       1.2.1. 2 CTAB法
  •     1.2.2 引物设计方法
  •     1.2.3 二引物PCR扩增产物测序方法
  •     1.2.4 不同PCR扩增体系方法
  •       1.2.4. 1 三引物PCR扩增体系
  •       1.2.4. 2 六引物PCR扩增体系
  •       1.2.4. 3 九引物PCR扩增体系
  • 2 结果
  •   2.1 三引物PCR体系对转基因水稻材料扩增的特异性检测
  •   2.2 不同转基因水稻材料扩增及条件优化
  •     2.2.1 双价转基因水稻材料扩增及条件优化
  •     2.2.2 三价转基因水稻材料扩增及条件优化
  •   2.3 单价或多价转基因抗虫水稻材料的分子检测
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 方欣怡,阳菁,王井章,李阳生

    关键词: 抗性基因,转基因,多引物多重,分子检测

    来源: 生物技术通报 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 植物保护

    单位: 武汉大学生命科学学院水稻国家重点实验室

    基金: 抗虫转基因水稻新品种培育(2016ZX08001001)

    分类号: S435.112

    DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0383

    页码: 175-183

    总页数: 9

    文件大小: 3636K

    下载量: 133

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