利用CRISPR/Cas9技术产生肌肉特异表达Cas9的小鼠胚胎

论文摘要

目的通过CRISPR/Cas9技术获得肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为建立肌肉特异表达Cas9小鼠动物模型奠定基础。方法设计小鼠Rosa26位点sgRNA并通过体外酶切验证活性,同时使用同源重组构建肌肉特异性同源打靶载体;通过显微注射将Rosa26 sgRNA与Cas9蛋白注射到小鼠胚胎,通过PCR及测序检测胚胎的编辑情况,同时移植到假孕母鼠体内,待其生产;将同源打靶载体与Rosa26 sgRNA和Cas9一起注射到小鼠胚胎,通过PCR检测整合情况。结果体外酶切实验表明,体外转录的sgRNA与Cas9蛋白联合可对靶位点产生编辑作用;成功构建了肌肉特异性同源打靶载体Donor-SP-px459;通过原核注射获得Rosa26基因编辑胚胎,经移植获得Rosa26基因编辑小鼠;注射同源打靶载体后,成功获得肌肉特异表达Cas9蛋白的基因打靶小鼠胚胎。结论利用CRISPR/Cas9技术,成功获得Rosa26基因编辑胚胎和小鼠,并获得了肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为利用基因打靶构建肌肉特异表达Cas9的小鼠动物模型奠定基础。

论文目录

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李昊,陈胜男,李松美,朴善花,安铁洙,王春生

关键词: 基因编辑,肌肉特异,基因打靶

来源: 中国实验动物学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 东北林业大学生命科学学院动物发育研究室

基金: 中央高校基本科研业务费专项C类项目资金资助(2572016CA10),黑龙江省自然科学基金项目(C2016012)~~

分类号: Q78

页码: 271-277

总页数: 7

文件大小: 401K

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标签：基因编辑论文;  肌肉特异论文;  基因打靶论文;