钩丝孢属真菌的形态特征及其高产蛋白酶菌株培养优化

论文摘要

目的:整理研究15株钩丝孢属真菌的形态特征,并进一步筛选出高产蛋白酶活性和杀线虫活性菌株,对其进行产酶条件和生长条件优化,为进一步研究钩丝孢属真菌杀线虫的分子机制奠定基石,为植物寄生线虫的生物防治提供参考。方法:对15株钩丝孢属真菌进行培养,包括中华钩丝孢1株、尖钩钩丝孢1株、多孢钩丝孢1株、奇妙钩丝孢1株、极小钩丝孢2株、线虫钩丝孢2株、螺旋钩丝孢3株及未知钩丝孢4株,并对部分菌株进行详细形态描述。通过福林酚法测定菌株产蛋白酶活性,筛选高产蛋白酶活性菌株。通过测定菌株杀线虫率,确定高产蛋白酶活性菌株杀线虫活性。通过比较菌株产蛋白酶活性大小,对高产蛋白酶活性和杀线虫活性菌株H12的产酶培养基进行优化,包括对葡萄糖、明胶、蛋白胨及酵母提取物的质量浓度进行单因素试验和正交试验;通过单因素试验优化产酶条件,包括对pH、温度、转速及接种量。比较菌丝干重高低,对菌株H12的马铃薯葡萄糖液体培养基中碳源和添加的氮源进行筛选。对培养基成分及其培养条件进行单因素试验和正交试验,包括葡萄糖、酵母提取物、pH、温度、转速、接种量的单因素试验和葡萄糖、酵母提取物、pH、接种量的正交试验。结果:钩丝孢属真菌菌落培养发现,菌落生长缓慢,30天菌落直径增加约2 cm,可产生色素,出现不同颜色。钩丝孢属真菌菌丝无色,分枝,分隔;分生孢子梗无色,分生孢子梗上侧生瓶梗,瓶梗球形,亚球形或长椭圆形,其上着生单个或多个小梗;分生孢子形态变化多样,有弓形、螺旋形和新月形等多种形状。从15株钩丝孢属真菌中筛选出高产蛋白酶活性和杀线虫活性菌株H12,其蛋白酶活性在发酵第5天最高;最佳产酶培养基成分为:葡萄糖8 g/L、明胶8 g/L、蛋白胨8 g/L、酵母提取物4 g/L;最佳产酶培养条件为pH 7.0、20℃、260 r/min、接种量为2块直径5 mm的菌块。菌株H12生长最佳培养基成分是在马铃薯葡萄糖液体培养基基础上,将葡萄糖浓度增加至40 g/L,加入酵母提取物浓度为25 g/L;最佳培养条件为pH 9.0、30℃、180 r/min,接种量为4块直径5 mm的菌块。产酶条件优化后,菌株H12蛋白酶活性提高至216.42 U/mL,比优化前(67.84 U/mL)增加2.19倍;生长条件优化后,菌株H12菌丝干重为1624.7 mg,比优化前(351.2 mg)提高3.63倍。结论:钩丝孢属真菌形态多样。菌株H12具有高产蛋白酶和杀线虫活性,优化后的产酶培养基和产酶发酵条件,使菌株H12的产酶活性增加;优化后的生长培养基和培养条件,使菌株H12的生长速度加快。

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文章来源

类型: 硕士论文

作者: 刘子卿

导师: 陈丽丽,郝玉娥

关键词: 钩丝孢属,形态特征,蛋白酶,条件优化

来源: 南华大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,植物保护

单位: 南华大学

分类号: S476;Q93-335

DOI: 10.27234/d.cnki.gnhuu.2019.000262

总页数: 74

文件大小: 5847K

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