铬天青S法结合高效液相色谱法测定甲烷氧化菌素含量

论文摘要

目的:建立由M.trichosporium OB3b发酵获得的甲烷氧化菌素（Mb）在发酵过程与发酵成熟阶段的含量测定方法。方法:分别考察了CuSO4、HDTMA、磷酸缓冲液添加量以及络合时间等因素对铬天青法检测Mb含量的影响;在铬天青S法对发酵后冻干粉Mb含量确定的基础上,为调控Mb的发酵过程,通过高效液相色谱法对发酵前4 d每24 h的Mb含量进行测定。结果:在CuSO4、HDTMA、磷酸缓冲液添加量分别为1.2、4.0、2.0 mL及络合时间为15 min的条件下,铬天青S法测得纯化的1 L发酵液中Mb的含量为26.91μmoL,最低检测限为0.042μmoL/L。通过与高效液相色谱法的结合,确定在发酵24、48、72、96 h时发酵液中Mb含量分别为1.008、1.336、3.125、7.500μmoL/250 mL。结论:本文所建立的方法稳定、重现性好,可用于Mb在发酵不同阶段含量的测定。

论文目录

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.2 实验方法

1.2.1 Mb的培养以及分离纯化

1.2.2 光谱分析Mb及CAS法测定的依据

1.2.2.1 紫外光谱分析Mb发酵程度

1.2.2.2 排除其他小肽对检测方法的影响

1.2.2.3 Mb与Mb-Cu紫外光谱检测

1.2.2.4 Mb夺取CAS体系中Cu2+的证明

1.2.3 CAS法检测条件的确定

1.2.4 CAS法检测Mb含量

1.2.4.1 Mb含量的测定

1.2.4.2 Mb含量的计算

1.2.5 HPLC法检测Mb含量

1.2.5.1 HPLC法的检测条件

1.2.5.2 HPLC法检测Mb含量

2 结果与分析

2.1 光谱分析Mb及CAS法测定的依据

2.1.1 紫外光谱分析Mb发酵程度

2.1.2 排除其他小肽对检测方法的影响

2.1.3 Mb紫外光谱的检测

2.1.4 Mb夺取CAS体系中Cu2+的证明

2.2 CAS法检测条件的优化

2.2.1 CuSO4溶液添加量对CAS体系的影响

2.2.2 HDTMA溶液添加量对CAS体系的影响

2.2.3 磷酸缓冲溶液添加量对CAS体系的影响

2.2.4 络合时间对CAS体系的影响

2.3 CAS法对Mb含量的检测结果

2.3.1 CAS法对Mb含量线性关系的测定

2.3.2 CAS法对发酵液中Mb含量的测定

2.3.3 Mb含量最低检测限的测定

2.4 HPLC法对Mb含量的检测结果

2.4.1 HPLC法检测Mb的定性分析

2.4.2 HPLC检测Mb的定量分析

3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈林林,韩可,李伟,吴嘉树,辛嘉英

关键词: 甲烷氧化菌素,铬天青,乙二胺四乙酸二钠,高效液相色谱

来源: 食品工业科技 2019年13期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 化学,一般化学工业

单位: 哈尔滨商业大学省高校食品科学与工程重点实验室,中国科学院兰州化学物理研究所羰基合成与选择氧化国家重点实验室

基金: 国家自然科学基金项目(21573055),哈尔滨商业大学校级科研项目(18XN079),哈尔滨商业大学博士科研启动项目(12DL010),哈尔滨市应用技术研究与开发项目(2014RFQXJ115)

分类号: O657.72;TQ920.6

DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.13.024

页码: 148-153

总页数: 6

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