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牛催乳素信号肽对多中和表位重组猪圆环病毒3衣壳蛋白表达量的提升作用

2020-12-09阅读(350)

牛催乳素信号肽对多中和表位重组猪圆环病毒3衣壳蛋白表达量的提升作用

论文摘要

本文以猪圆环病毒三型(PCV3)的衣壳蛋白为研究对象,通过生物信息学的手段对其中和表位和逃逸表位进行预测,将其逃逸表位替换为其中的一个中和表位来获得多中和表位的重组PCV3衣壳蛋白,在大肠杆菌表达系统中诱导表达该蛋白。在对这个低表达的重组蛋白改构的期间,我们发现牛催乳素信号肽具有提高多中和表位重组PCV3衣壳蛋白表达量的功能。本研究结果为解决大肠杆菌中重组蛋白的低表达提供了新的思路,同时为制备能在大肠杆菌中大量表达的更高活性的PCV3多表位VLP疫苗抗原奠定了基础。

论文目录

  • 提要
  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 中英文缩写词表
  • 第一章 绪论
  •   1.1 猪圆环病毒概述
  •   1.2 猪圆环病毒3型
  •     1.2.1 猪圆环病毒3型的流行病学
  •     1.2.2 猪圆环病毒3型衣壳蛋白的结构
  •     1.2.3 猪圆环病毒3型的分类
  •   1.3 猪圆环病毒疫苗的研究
  •     1.3.1 灭活PCV2病毒疫苗
  •     1.3.2 PCV2亚单位疫苗
  •     1.3.3 病毒样颗粒疫苗
  •   1.4 大肠杆菌表达系统
  •     1.4.1 目的基因的选择
  •     1.4.2 质粒载体的选择
  •     1.4.3 宿主菌的选择
  •     1.4.4 常用的大肠杆菌表达系统的种类
  •   1.5 融合表达
  •     1.5.1 常用的融合表达标签
  •     1.5.2 科室前期应用的融合标签
  •   1.6 核定位信号（NLS）
  •   1.7 牛催乳素信号肽（THE SIGNAL PEPTIDE OF BOVINE PROLACTIN）
  • 第二章 材料与方法
  •   2.1 实验材料
  •     2.1.1 试剂及材料
  •     2.1.2 质粒与菌种
  •     2.1.3 培养基
  •     2.1.4 实验动物
  •     2.1.5 主要实验设备
  •   2.2 PCV3衣壳蛋白氨基酸序列的选择
  •   2.3 引物的设计与合成
  •     2.3.1 X编码基因的拆分及B片段的引物设计与合成
  •     2.3.2 XM编码基因的设计及引物设计与合成
  •     2.3.3 BSP-X编码基因的设计及引物设计与合成
  •   2.4 实验方法
  •     2.4.1 目的基因的合成与电泳鉴定
  •     2.4.2 质粒的制备
  •     2.4.3 目的基因与载体的连接
  •     2.4.4 重组质粒的转化
  •     2.4.5 重组蛋白的在大肠杆菌中的诱导表达及鉴定
  •     2.4.6 重组蛋白的纯化
  •     2.4.7 蛋白质的Western-blot鉴定
  •     2.4.8 重组蛋白BSP-X的活性检测
  • 第三章 实验结果
  •   3.1 重组PCV3衣壳蛋白（X）的构建及表达
  •     3.1.1 PCV3衣壳蛋白的表位分析
  •     3.1.2 重组PCV3衣壳蛋白（X）的改构设计及结构分析
  •     3.1.3 X编码基因中B片段的设计及合成
  •     3.1.4 pMD18-T-B重组质粒的构建
  •     3.1.5 pET28a-X重组质粒的构建
  •     3.1.6 X在大肠杆菌中的诱导表达及Western-blot鉴定
  •   3.2 蛋白XM/BSP-X的构建、表达及活性检测
  •     3.2.1 XM蛋白和BSP-X蛋白的序列设计
  •     3.2.2 XM、BSP-X编码基因的合成
  •     3.2.3 pMD18-T载体与XM/BSP-X基因的连接
  •     3.2.4 XM、BSP-X编码基因连入pET28a载体
  •     3.2.5 XM、BSP-X在大肠杆菌中的表达
  •     3.2.6 BSP-X的纯化
  •     3.2.7 Western-blot鉴定纯化后的BSP-X
  •     3.2.8 BSP-X的活性检测
  • 第四章 讨论
  • 第五章 结论
  • 参考文献
  • 作者简介及在学期间所取得的科研成果
  • 致谢

    • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 邢时雨

    导师: 于永利

    关键词: 牛催乳素信号肽,猪圆环病毒,衣壳蛋白,中和表位,蛋白表达

    来源: 吉林大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 吉林大学

    分类号: S852.4

    总页数: 85

    文件大小: 4396K

    下载量: 47

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