薛杨（江苏省盐城市亭湖区人民医院感染科224000）
【摘要】目的探讨外周血Th17、Th1及Tc1细胞亚群对于慢性乙型肝炎（CHB）与急性加重型乙型病毒性肝炎(ACHBLF)的相关性。方法收集30例CHB患者作为观察组A，20例ACHBLF患者作为观察组B，同期健康体检者20例作为对照组，均采用三色流式细胞术检测外周血Th17、Th1及Tc1细胞亚群比例。结果观察组A与观察组B外周血Th17细胞所占比例均较对照组显著提高（P<0.05）；观察组A的Th1及Tc1较对照组显著降低，而观察组B较对照组显著提高（P<0.05）。观察组A外周血Th17细胞亚群与Th1细胞亚群之间呈显著负相关性，Th1与Tc1呈显著正相关性（P<0.05）；而观察组B外周血Th17细胞亚群与Th1及Tc1细胞亚群之间呈显著正相关性（P<0.05）。结论Th17细胞亚群比例增加在CHB及ACHBLF的发生及发展中具有决定性作用，Tc1具有双重调节作用，调节外周血Th17细胞异常可能作为治疗CHB以及ACHBLF的新途径。
【关键词】慢性乙型肝炎急性重型乙型病毒性肝炎Th17细胞Th1细胞Tc1细胞
【中图分类号】R512.6+2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）52-0119-02
机体免疫答应反应是肝炎发生及发展的重要环节，当机体的细胞免疫以及体液免疫答应能够将HBV病毒清除时，可转变为急性自限性肝炎。但实际上大部分的患者无法彻底清除体内HBV，故可发展成为慢性感染[1]。为了解外周血T细胞亚群对于慢性乙型肝炎（CHB）与急性加重型乙型病毒性肝炎(ACHBLF)的相关性，本研究对比分析了CHB、ACHBLF患者与健康正常人的外周血Th17、Th1及Tc1细胞亚群比例，现报道如下：
1资料与方法
1.1一般资料
收集2011年1月至2013年12月，我院收治的CHB患者30例作为观察组A和ACHBLF20例作为观察组B，选择同期健康体检者20例作为正常对照组。观察组A男19例，女11例，年龄20-60岁，平均为（27.4±8.8）岁；观察组B中男16例，女4例，年龄20-66岁，平均为（46.1±10.2）岁；对照组中男13例，女7例，年龄20-66岁，平均为（30.5±7.2）岁。
1.2方法
受试者均常规取400μl肝素抗凝全血标本，经RPMI1640等体积稀释后，加入PMA以及离子霉素，置于37℃条件下5%的CO2培养箱中进行4-6h细胞培养。完成培养后，取培养标本加入FITC以抗人CD8单克隆抗体以及PE-Cy5抗人CD3单克隆抗体进行孵育和细胞染色。离心分离后后以PBS进行重悬，并以流式细胞仪进行检测。各细胞亚群界定:Tc1为CD3+CD8+INF-γ+；Th17为CD3+CD8-IL-17A+以及CD3+CD8-IFN-γ+；Th1为CD3+CD8-INF-γ+。数据均经winMDI2.9软件分析，并以CD3+T细胞群进行射门，以分析Th17、Th1以及Tc1所占CD3+T细胞比重。
1.3统计学分析
采用统计学软件SPSS18.0分析，比较经t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1三组各细胞亚群的变化
观察组A与观察组B外周血中Th17细胞所占比例均较对照组显著提高（P<0.05），且观察组B显著高于观察组A（P<0.05）；观察组A的Th1及Tc1均较对照组显著降低，而观察组B的Th1及Tc1均较对照组显著提高（P<0.05）。详见表1。
表1三组各细胞亚群的变化（%）
组别例数Th17Th1Tc1
观察组A301.53±0.528.54±1.526.36±1.84
观察组B202.24±1.3218.56±7.5419.14±5.84
对照组200.92±0.1910.55±1.929.11±2.81
2.2CHB及ACHBLF中各细胞亚群的相关性分析
经相关性分析显示，观察组A患者外周血Th17与Th1之间呈显著负相关性（r=-0.561，P<0.05），Th1与Tc1之间呈显著正相关性（r=0.583，P<0.05）,但并未发现Th17与Tc1间具有相关性（P>0.05）。而观察组B患者外周血Th17与Th1及Tc1间呈显著正相关性（r=0.613，0.625，P<0.05）；Th1与Tc1之间未见明显相关性。
3讨论
T淋巴细胞是机体免疫的重要调节细胞，在各个亚型T淋巴细胞的相互作用及调节下，可维持机体免疫内环境的稳定性，各细胞亚型之间的细微平衡关系均决定着机体免疫反应的变化。Th1/Th2细胞亚群是传统意义上的CD4+Th细胞亚群，在机体免疫应答反应过程中此三者之间相互制约和调节，影响着肝病的发生及发展过程。CD8+T细胞主要可分为Tc1与Tc2两大细胞亚群，其中，由Tc1细胞亚群可产生多种炎症因子，参与肝炎的发生及发展过程[2]。
本研究发现，CHB患者的外周血Th17所占比例相比于健康对照组显著降低，提示CHB的发生及发展与Th17细胞亚群比例增加具有密切关系，其Th17可能分泌出多种细胞因子而诱导其他细胞因子的生成，导致患者的机体免疫调节功能发生紊乱，从而诱导CHB的发生及发展。而在ACHBLF患者中，Th17细胞亚群比例增加更为显著，认为Th17亚群比例增加是引起ACHBLF的决定性因素。此外，在CHB患者中，外周血中Th1及Tc1所占比例均显著低于健康对照组，认为患者的细胞免疫功能低下导致机体无法有效清除HBV导致HBV持续感染而发展成为慢性化疾病。而在ACHBLF患者中，Th1及Tc1均较对照组显著提高，可能是由于Th1及Tc1在机体的免疫答应反应过程中占优势地位，在CTL细胞所介导的细胞毒性作用下，诱发ACHBLF。经相关性研究发现，CHB患者外周血Th17细胞亚群与Th1细胞亚群之间呈显著负相关性，提示Th17及Th1在CHB的发生及发展过程中可能存在拮抗作用。而Th1与Tc1之间呈显著正相关性,提示CD8+T细胞在CHB的发生及发展过程中，不仅具有细胞毒作用，还可能具有细胞调节作用，发生Tc1细胞极化可能是由于合并Th1反应情况下产生[3]。而在ACHBLF患者中，外周血Th17细胞亚群与Th1及Tc1细胞亚群之间呈显著正相关性，证实Th17细胞亚群、Th1细胞亚群及Tc1细胞亚群在ACHBLF的发生及发展中可能具有协同作用。
综上所述，Th17细胞亚群比例增加在CHB及ACHBLF的发生及发展中具有决定性作用，其中，CHB患者的Th17与Th1以及Tc1亚群之间具有拮抗作用，而ACHBLF的Th17与Th1以及Tc1亚群之间具有协同作用，调节患者的外周血Th17细胞异常可能作为治疗CHB以及ACHBLF的新途径。
参考文献：
[1]刘俊英,杨京,贾红云等.不同临床类型HBV感染者外周血T细胞亚群的差异[J].世界华人消化杂志,2009,17(29):3038-3042.
[2]刘英,胡萍,章敏等.乙型病毒性肝炎患者T淋巴细胞亚群的测定与其临床意义分析[J].临床消化病杂志,2010,22(1):50-51.
[3]张艳,许春梅,左维泽等.乙型肝炎患者外周血T细胞亚群、IL-32、IL-6水平的变化及其临床意义[J].胃肠病学,2010,15(8):471-474.