论文摘要
目的构建人跨膜蛋白39A基因（TMEM39A）的原核表达载体,优化表达条件并获得可溶性表达的TMEM39A。方法以HEK293细胞的总RNA为模板,反转录PCR扩增TMEM39A,构建其原核表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A,并在不同温度、IPTG浓度、A600nm值及时间条件进行诱导表达,然后利用上述获得的最佳诱导条件进行大量表达,分析其可溶性和抗原性。结果重组表达载体pGEX-6P-1-TMEM39A与GenBank中的TMEM39A（登录号:BC021277.2）的核苷酸序列同源性为99.9%,氨基酸序列同源性为100%。重组蛋白GST-TMEM39A在69和60 ku处出现两条特异性条带,采用单因素方法对不同温度、IPTG浓度、A600nm值及时间进行分析得出GST-TMEM39A的最佳诱导条件为25℃、A600nm值为0.6～0.8、IPTG浓度为0.1 mmol/L诱导9 h;在此基础上进行大量表达,并以可溶性形式获得了TMEM39A与GST蛋白的融合表达。结论成功构建了TMEM39A的原核表达载体,确定了GST-TMEM39A的最佳表达条件并实现其的可溶性表达,为后续纯化TMEM39A、制备抗体开展功能研究奠定物质基础,并为深入探讨TMEM39A与许多疾病或病毒的关系提供科学依据。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 李向茸,马瑞仙,李倩,王兴陇,李生军,张海霞,冯若飞
关键词: 跨膜蛋白,条件优化,融合蛋白,可溶性表达
来源: 基础医学与临床 2019年07期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技,基础科学
专业: 生物学
单位: 西北民族大学生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室,西北民族大学生物医学研究中心甘肃省动物细胞技术创新中心,西北民族大学生命科学与工程学院
基金: 国家自然科学基金(31460665),教育部“创新团队发展计划”(IRT_17R88),西北民族大学“双一流”引导专项生物工程特色学科(10018703,1001070204)
分类号: Q78
DOI: 10.16352/j.issn.1001-6325.2019.07.002
页码: 932-936
总页数: 5
文件大小: 706K
下载量: 244
相关论文文献
- [1].S-腺苷甲硫氨酸合成酶的可溶性表达[J]. 华东理工大学学报(自然科学版) 2012(04)
- [2].重组人血管内皮生长因子165在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化与体外活性评价[J]. 科学技术与工程 2016(01)
- [3].产气荚膜梭菌α蛋白的高效可溶性表达与基因工程亚单位疫苗的制备[J]. 中国草食动物科学 2017(03)
- [4].产气荚膜梭菌β2蛋白的高效可溶性表达与基因工程亚单位疫苗的制备[J]. 中国兽医科学 2016(12)
- [5].S-腺苷甲硫氨酸合成酶的可溶性表达[J]. 华东理工大学学报(自然科学版) 2012(05)
- [6].外源性蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的策略综述[J]. 世界科技研究与发展 2015(05)
- [7].人β2-微球蛋白的可溶性表达和纯化鉴定[J]. 湖北医药学院学报 2015(03)
- [8].小鼠核糖核酸酶抑制剂的高效可溶性表达与氧化抗性鉴定[J]. 中国生物工程杂志 2010(11)
- [9].抗人乙酰胆碱受体单链抗体1956#在大肠杆菌中的可溶性表达[J]. 细胞与分子免疫学杂志 2008(03)
- [10].重组人肝再生因子可溶性表达及活性鉴定[J]. 军事医学 2018(05)
- [11].抗克百威单链抗体的可溶性表达、纯化与鉴定[J]. 食品工业科技 2017(20)
- [12].重组变异链球菌表面蛋白的可溶性表达及抗体制备[J]. 华西口腔医学杂志 2012(03)
- [13].提高大肠杆菌高密度发酵可溶性表达量研究[J]. 山东工业技术 2018(17)
- [14].肌钙蛋白Ⅰ的可溶性表达及纯化研究[J]. 东南大学学报(医学版) 2009(01)
- [15].小鼠核糖核酸酶抑制剂异源高效可溶性表达、纯化及活性研究[J]. 食品工业科技 2019(10)
- [16].重组甘精胰岛素的可溶性表达研究[J]. 东南大学学报(医学版) 2013(06)
- [17].结核分枝杆菌Rv3425蛋白原核可溶性表达[J]. 实用预防医学 2014(12)
- [18].棉铃虫乙醇脱氢酶原核可溶性表达条件的优化[J]. 生物技术 2017(01)
- [19].LEDGF/p75蛋白的可溶性表达、纯化及功能研究[J]. 药学学报 2014(08)
- [20].截短猪流行性腹泻病毒N蛋白的可溶性表达及其抗原活性[J]. 畜牧兽医学报 2014(09)
- [21].重组AiiA蛋白可溶性表达及发酵条件优化[J]. 江西农业大学学报 2011(06)
- [22].S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的原核可溶性表达及其转化应用[J]. 中国医药工业杂志 2020(07)
- [23].C4ST-1在大肠杆菌中的可溶性表达[J]. 食品与生物技术学报 2020(06)
- [24].人促肾上腺皮质激素释放因子Ⅰ型受体EC1片段在原核系统中的可溶性表达[J]. 生物技术通讯 2011(05)
- [25].人Hepassocin的原核可溶性表达与纯化[J]. 生物技术通讯 2009(04)
- [26].基于分子伴侣策略提高NADPH依赖型醇脱氢酶的异源可溶性表达[J]. 中国生物工程杂志 2020(08)
- [27].黄瓜Cu/Zn-SOD基因克隆及可溶性表达和纯化[J]. 生物技术 2019(02)
- [28].人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化[J]. 药物生物技术 2017(03)
- [29].牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的可溶性表达[J]. 中国生物制品学杂志 2017(11)
- [30].鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子-猪干扰素α1融合基因在大肠埃希菌中的可溶性表达及其生物学活性研究[J]. 中国预防兽医学报 2019(06)