表达载脂蛋白L1稳定细胞系的构建

论文摘要

目的利用Cumate系统实现APOL1基因在293T细胞内的可诱导稳定表达。方法通过查询NCBI数据库,设计APOL1基因编码区全长引物,克隆至Cumate慢病毒质粒。嘌呤霉素筛选包装慢病毒感染的293T细胞,阳性细胞扩大培养后用不同浓度的Cumate诱导表达,利用Real-time PCR和Western blot验证APOL1的表达情况。结果构建的293T细胞系可被Cumate诱导表达APOL1,且不同浓度的Cumate对细胞表达载脂蛋白L1有不同的影响。Real-time PCR和Western blot均证明在诱导48 h后,随着诱导剂浓度的增加,APOL1表达增多,在Cumate为50μg/ml时APOL1达到最高值。结论成功构建了可诱导表达APOL1基因的293T细胞系,为研究APOL1在EV71感染人体细胞过程中的作用机制提供了稳定的实验材料。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 曹观华,曹广进,刘舒宁,程晓敏,仇艺娴,李凌,朱利

关键词: 可诱导表达,载脂蛋白,慢病毒,细胞系构建

来源: 中国病原生物学杂志 2019年04期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 南方医科大学公共卫生学院三级生物安全实验室,南方医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

基金: 广东省医学科研基金项目(No.A2016357),广东省自然科学基金项目(No.2018A030313767)

分类号: Q78

DOI: 10.13350/j.cjpb.190406

页码: 401-405

总页数: 5

文件大小: 1813K

下载量: 82

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标签：可诱导表达论文;  载脂蛋白论文;  慢病毒论文;  细胞系构建论文;