黑曲霉脂肪酶tglE的基因克隆与生化特征解析

黑曲霉脂肪酶tglE的基因克隆与生化特征解析

论文摘要

从黑曲霉基因组中克隆了一种新的脂肪酶基因tglE,并在毕赤酵母中成功表达。重组酶具有典型的脂肪酶活性,其最适pH为7. 0,最适温度为40℃;在30~60℃或pH 6. 5~9. 0该酶的酶活力保持在60%以上;在pH 6. 0~8. 0或20~30℃均较为稳定。Cu2+、Mn2+、Ca2+、K+、Mg2+和Sn2+对tgl E有明显的激活作用; Fe3+、Zn2+和EDTA对重组酶的酶活抑制作用明显,特别是EDTA可抑制重组酶90%的活。tgl E对橄榄油和C4底物的作用最强,对棕果油和C16底物的作用最弱。以C4为底物,tglE的Km值为14. 40 mmol/L,Vmax为46. 72mmol/(m L·h)。tgl E具有催化辛酸和乙醇生成辛酸乙酯的酯化活性。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌种
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 脂肪酶基因的生物信息分析
  •   1.4 黑曲霉脂肪酶基因克隆与表达
  •     1.4.1 基因克隆与重组菌构建
  •     1.4.2 重组酶的制备与纯化
  •   1.5 重组酶酶活测定与酶学性质分析
  •     1.5.1 脂肪酶酶活测定方法
  •     1.5.2 最适温度
  •     1.5.3 最适pH
  •     1.5.4 温度稳定性
  •     1.5.5 p H稳定性
  •     1.5.6 金属离子及螯合剂对酶活力的影响
  •     1.5.7 有机溶剂对酶活力的影响
  •     1.5.8 底物特异性和动力学参数
  •   1.6 重组酶酯化活性鉴定
  •     1.6.1 重组酶合成辛酸乙酯和乳酸乙酯
  •       1.6.1. 1 辛酸乙酯反应体系
  •       1.6.1. 2 乳酸乙酯反应体系
  •     1.6.2 辛酸乙酯和乳酸乙酯的检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 黑曲霉脂肪酶基因克隆及重组菌的获得
  •   2.2 重组酶的制备与纯化
  •   2.3 黑曲霉脂肪酶酶学性质解析
  •     2.3.1 最适温度和最适pH
  •     2.3.2 热稳定性和p H稳定性
  •     2.3.3 金属离子及螯合剂对重组脂肪酶活力的影响
  •     2.3.4 有机溶剂耐受性分析
  •     2.3.5 底物特异性分析
  •   2.4 酯化活性鉴定
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 丛珊滋,田康明,张新,路福平,王正祥

    关键词: 脂肪酶,黑曲霉,酶学性质,酯化活性

    来源: 食品与发酵工业 2019年21期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 天津科技大学生物工程学院工业发酵微生物教育部重点实验室,天津科技大学化工与材料学院,北京农学院农产品有害微生物及农残安全检测与控制北京市重点实验室

    基金: 政府间国际合作重点项目(2018YFE0100400),天津市杰出津门学者计划

    分类号: Q933

    DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.020595

    页码: 1-7

    总页数: 7

    文件大小: 2736K

    下载量: 155

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