粉红螺旋聚孢霉67-1菌株Crmapk互作蛋白的筛选

论文摘要

粉红螺旋聚孢霉（Clonostachys rosea,异名:粉红粘帚霉Gliocladium roseum）是一类重要的菌寄生菌,能够侵染丝核菌、核盘菌、镰刀菌和灰葡萄孢等多种植物病原真菌,具有极大的生防潜力。笔者课题组通过前期对高效菌株67-1寄生核盘菌转录组测序分析,获得了一个显著上调表达的编码丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的基因crmapk,敲除该基因后对核盘菌寄生能力下降,推测crmapk可能参与调控粉红螺旋聚孢霉菌寄生过程。生物信息学分析表明,crmapk编码一个含有355个氨基酸的蛋白质,大小41 ku,等电点6.64,为亲水性蛋白,无信号肽和跨膜区。功能结构域分析表明,该蛋白含有一个保守的蛋白激酶结构域,属于Ser/Thr类蛋白激酶,并与酵母中的Fus3/Kss1同源,主要参与Fus3/Kss1-MAPK途径。为进一步解析Crmapk调控粉红螺旋聚孢霉菌寄生的分子机制,笔者提取了核盘菌诱导条件下67-1总RNA,纯化得到mRNA,利用Gateway技术构建了粉红螺旋聚孢霉cDNA文库。经检测,初级文库库容量为1.6×107 CFU/mL,重组率96%,扩增文库平均插入片段长度>1kb,表明该cDNA文库质量较高。采用双酶切法构建了crmapk-BD诱饵载体,对其自激活和毒性检测显示,crmapk-BD可以在SD/-Leu/-Trp/X-α-Gal培养基中正常生长且不变蓝,说明诱饵蛋白无自激活能力、无毒性。将crmapk-BD载体与cDNA文库共转化Y2HGold,在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal/AbA培养基平板上筛选培养,共得到149个阳性克隆。从中随机挑取50个菌落摇瓶培养,提取酵母质粒,转化大肠杆菌DH5α并测序。对AD质粒与BD质粒回转Y2H Gold酵母菌一对一互作验证,得到29个阳性基因。经序列比对,在67-1中获得17个Crmapk候选互作蛋白,包括转录因子、转运蛋白、信号转导体等,主要参与了基因的表达调控、营养物质代谢和信号转导等重要途径,下一步将采用Co-IP和Pull-down等技术对这些候选互作蛋白进一步验证。本研究初步表明Crmapk与互作蛋白通过多个生物学途径共同介导了粉红螺旋聚孢霉菌寄生的调控,为揭示粉红螺旋聚孢霉生防作用机制奠定了理论基础。

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文章来源

类型: 国内会议

作者: 吕斌娜,Rakibul Hasan,江娜,李世东,孙漫红

关键词: 粉红螺旋聚孢霉,菌寄生,酵母双杂交,互作蛋白

来源: 中国植物病理学会2019年学术年会 2019-07-20

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,农业基础科学,植物保护

单位: 中国农业科学院植物保护研究所

分类号: S432.44

DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.020206

页码: 184

总页数: 1

文件大小: 63k

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