坏死梭杆菌亚单位疫苗候选抗原蛋白的筛选、表达及免疫原性分析

论文摘要

试验旨在筛选坏死梭杆菌（Fusobacterium necrophorum,Fn）外膜蛋白（outer membrane protein,Omp）中的候选抗原蛋白,为Fn的亚单位疫苗研究奠定基础。采用Uniprot对Fn Omp序列进行预测,基于预测结果筛选拟表达蛋白,并根据GenBank中登录的Fn Omp相应基因序列设计特异性引物,以QL03株为模板进行PCR扩增、原核表达,以及SDS-PAGE和Western blotting分析,并通过血清杀菌试验和小鼠免疫攻毒保护试验,鉴定重组蛋白的免疫原性,筛选最佳候选蛋白。结果显示,预测得到121个蛋白,顺次命名为1-Fn～121-Fn,根据预测结果筛选出8-Fn、11-Fn、41-Fn、95-Fn和102-Fn 5个候选蛋白,其PCR扩增产物大小分别为672、1 164、570、1 059、729bp。SDS-PAGE和Western blotting分析显示,除8-Fn未表达外,其余4个蛋白均成功表达,大小分别为60、39、59、44ku,命名为P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn,均能与Fn阳性血清反应。血清杀菌试验结果显示,4个重组蛋白均有一定杀菌效果,其中抗P102-Fn血清的杀菌效果最佳,杀菌率可达40.49%。小鼠免疫保护试验结果显示,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn对小鼠均具有一定的保护效果,其中P102-Fn保护效率最高,达60%。结果表明,P11-Fn、P41-Fn、P95-Fn和P102-Fn均具有良好的免疫原性,其中P102-Fn的免疫原性及诱导机体产生保护免疫反应能力最佳,最有望成为Fn亚单位疫苗的候选蛋白。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 肖璐,谢晶,康润敏,叶勇刚,于吉锋,曹冶,李兴玉,魏勇,林毅,廖党金,潘梦,叶健强,戴卓建

关键词: 坏死梭杆菌,原核表达,外膜蛋白,免疫原性,杀菌试验

来源: 中国畜牧兽医 2019年01期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 四川省畜牧科学研究院,动物遗传育种四川省重点实验室

基金: 四川省财政运行专项(SASA2014CZYX009),四川省科技成果转化(2017CC0053),四川省重点研发计划(2018NZ0003)

分类号: S852.4

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.01.025

页码: 215-222

总页数: 8

文件大小: 751K

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