导读:本文包含了抗改型单链抗体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译,主要关键词:抗体,引物,亲和力,论文,PCR。
抗改型单链抗体论文文献综述
刘晶,尹长城,黄华梁,姜述德[1](2001)在《巨型引物PCR法对抗CD3改型单链抗体的定点诱变》一文中研究指出亲和力是影响改型单链抗体应用于临床的重要因素之一 .利用巨型引物PCR定点诱变方法 ,设计并化学合成出两组含多个突变位点的简并引物 ,在第一轮PCR中使用简并引物分别扩增出含突变碱基的两条特异性的DNA片段 ,即巨型引物 ,将其经琼脂糖凝胶电泳分离纯化后 ,作为 3′和 5′的两端引物应用于第二轮PCR反应中 .通过改变标准PCR反应条件 ,调整引物与模板的浓度 ,扩增出特异性较强的目的DNA条带 .PCR产物经回收后 ,进行DNA测序 .测序结果表明利用该方法扩增得到特异的抗CD3改型单链抗体的突变体库(本文来源于《生物化学与生物物理进展》期刊2001年05期)
刘晶[2](2001)在《抗CD3改型单链抗体的分子定向进化》一文中研究指出抗CD3单克隆抗体是一种重要的移植排斥反应抑制剂,可用来治疗急性排斥反应,同时还可用来治疗免疫力低下和恶性肿瘤,在临床应用上极具潜力。由于鼠源抗CD3单抗在临床应用中会引发HAMA反应和严重的“首剂”副作用,需要进行改造以降低其异源性。 抗CD3改型单链抗体(ReCD3)是国内首次报道的OKT3人源化抗体,通过将鼠源单抗OKT3的L链和H链的CDR区分别移植入人源抗体LS1和Nd的FR区构建而成。但由于构建改型抗体的同时往往带来亲和力的下降,需进一步进行改造。 本研究首先通过巨型引物PCR定点诱变方法对ReCD3基因片段进行定点突变。通过计算机分子模拟及同源序列的比较,设计两组简并引物,以ReCD3 DNA片段为模板扩增出两条引入定点诱变的DNA片段;再以这些双链DNA片段为巨型引物,运用慢退火PCR程序成功地扩增出全长ReCD3定点突变DNA片段,构建了库容为10~6的抗CD3改型单链抗体定点诱变次级抗体库(MPCD3)及pfu为10~(13)的MPCD3次级噬菌体抗体库。经过叁轮亲和淘洗,最终获得亲和力较原来有所提高的抗体。 同时以上述工作为理论基础,运用DNA改组技术对ReCD3基因片段进行随机突变。大胆尝试了将80-100bp DNA酶Ⅰ酶切片段与引入定点诱变片段混合在一起,通过以自身为引物,自身为模板的PCR,最终获得理论库容应为10~6-10~7、实际库容为10~7的抗CD3改型单链抗体DNA改组次级抗体库(ShuCD3)及pfu为10~(12)的ShuCD3次级噬菌体抗体库。经过五轮淘选,筛选得到叁株亲和力提高1-2倍的抗体。计算机分子模拟结果表明所得到的高亲和力抗体的叁维结构发生了改变。(本文来源于《中国协和医科大学》期刊2001-05-01)
抗改型单链抗体论文开题报告
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
抗CD3单克隆抗体是一种重要的移植排斥反应抑制剂,可用来治疗急性排斥反应,同时还可用来治疗免疫力低下和恶性肿瘤,在临床应用上极具潜力。由于鼠源抗CD3单抗在临床应用中会引发HAMA反应和严重的“首剂”副作用,需要进行改造以降低其异源性。 抗CD3改型单链抗体(ReCD3)是国内首次报道的OKT3人源化抗体,通过将鼠源单抗OKT3的L链和H链的CDR区分别移植入人源抗体LS1和Nd的FR区构建而成。但由于构建改型抗体的同时往往带来亲和力的下降,需进一步进行改造。 本研究首先通过巨型引物PCR定点诱变方法对ReCD3基因片段进行定点突变。通过计算机分子模拟及同源序列的比较,设计两组简并引物,以ReCD3 DNA片段为模板扩增出两条引入定点诱变的DNA片段;再以这些双链DNA片段为巨型引物,运用慢退火PCR程序成功地扩增出全长ReCD3定点突变DNA片段,构建了库容为10~6的抗CD3改型单链抗体定点诱变次级抗体库(MPCD3)及pfu为10~(13)的MPCD3次级噬菌体抗体库。经过叁轮亲和淘洗,最终获得亲和力较原来有所提高的抗体。 同时以上述工作为理论基础,运用DNA改组技术对ReCD3基因片段进行随机突变。大胆尝试了将80-100bp DNA酶Ⅰ酶切片段与引入定点诱变片段混合在一起,通过以自身为引物,自身为模板的PCR,最终获得理论库容应为10~6-10~7、实际库容为10~7的抗CD3改型单链抗体DNA改组次级抗体库(ShuCD3)及pfu为10~(12)的ShuCD3次级噬菌体抗体库。经过五轮淘选,筛选得到叁株亲和力提高1-2倍的抗体。计算机分子模拟结果表明所得到的高亲和力抗体的叁维结构发生了改变。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗改型单链抗体论文参考文献
[1].刘晶,尹长城,黄华梁,姜述德.巨型引物PCR法对抗CD3改型单链抗体的定点诱变[J].生物化学与生物物理进展.2001
[2].刘晶.抗CD3改型单链抗体的分子定向进化[D].中国协和医科大学.2001