导读:本文包含了人前列腺癌诱导基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:前列腺癌,细胞,基因,树突,转染,凋亡,冬凌草。
人前列腺癌诱导基因论文文献综述
张波,赵秀芹,陈慧玲[1]（2016）在《前列腺癌抗原BA46基因转染树突状细胞(DC)诱导特异细胞免疫的可行性》一文中研究指出目的探讨分析前列腺癌抗原BA46基因转染DC诱导治疗前列腺癌的可行性。方法利用梯度离心方式分离健康者外周血液样本,将其分为对照组与基因转移组,对照组加以细胞冻融液培养,基因转移组加以IL-4、IL-2与GM-CSF、GM-CSF9等外援因子诱导表达DC细胞,利用流式细胞仪与51Cr释放法检测DC细胞表达情况与杀伤效果。结果基因转移组CD40、CD56与CD80表达情况(78%、82%、77%)及CD80/CD56与CD80/CD40比值(5.53与3.25)显着高于对照组表达情况(52%、65%、16%)与比值(0.77、1.13),此外,基因转移组对BA46阳性前列腺癌Hs578T细胞菌株杀伤率为(49.62±6.48)%,远高于对照组杀伤率(7.92±4.63)%,差异明显,P<0.05。结论利用基因转移方式制备表达前列腺癌BA46抗原DC细胞,可诱导产生特异细胞免疫细胞,对BA46阳性前列腺癌Hs578T细胞菌株具有特异性杀伤功能。(本文来源于《世界最新医学信息文摘》期刊2016年22期）
景宝[2]（2013）在《PTEN敲除小鼠前列腺癌模型的蛋白组学分析靶基因Chop的确定及诱导性表达c-myc细胞系的建立》一文中研究指出一、PTEN敲除小鼠前列腺癌模型的蛋白组学分析目的：通过高通量的质谱技术以及SILAC精确的计量技术,使蛋白组学能够应用于前列腺癌蛋白质组的系统分析,明确在肿瘤进程中有意义的蛋白指标。方法：使用精氨酸10、赖氨酸8标记的SILAC培养液对PTEN敲除小鼠前列腺癌细胞株进行培养。RIPA液对细胞进行裂解。正常组织、肿瘤标本的石蜡切片及小鼠前列腺癌细胞系提取蛋白,胰蛋白酶消化,肽链的分离及液相质谱分析,软件数据分析。结果：数据分析最终得到约2000种蛋白。其中肿瘤标本中明显上调蛋白占264种,明显下调蛋白303种。PTEN敲除标本中有关细胞粘附的蛋白表达上调(胶原蛋白、层粘连蛋白、整合素…)；有关蛋白质运输(RAB)上调；调节细胞周期的部分蛋白下调(MAPK7、胞裂蛋白及组蛋白),有关未折迭蛋白反应中的一系列基因下调。结论：利用SILAC技术的定量蛋白组学研究能够精确地对比肿瘤组织与正常组织之间的蛋白水平差异,能够更好地了解前列腺癌进展的分子生物学机制,为前列腺癌早期的生物学标志物的筛选、寻找有效地靶向治疗基因及对于前列腺癌治疗效果进行有效的监测建立了良好的基础。二、抑制PTEN表达后前列腺癌细胞22Rv1的变化目的：结合蛋白组学分析结果,PTEN基因的缺失可能会引起有关未折迭蛋白反应的基因的改变,从而对细胞的增殖与凋亡产生影响。目前PTEN与未折迭蛋白反应中有关凋亡的Chop基因之间的关系尚无有关报道。方法：实验采用前列腺癌细胞株22Rv1,首先利用siRNA干扰技术沉默22Rv1细胞中的PTEN基因。MTT检测22Rv1细胞沉默PTEN基因后的细胞活力。流式细胞仪检测细胞凋亡。使用realtimePCR技术检测未折迭蛋白反应中Chop基因,观察其随着PTEN基因沉默后的表达情况。利用WesternBlot检测蛋白表达情况。结果：抑制或沉默PTEN后前列腺癌细胞22Rv1的凋亡减少,细胞活力升高。westernBlot可见P-AKT473表达水平降低。Realtime PCR可见未折迭蛋白反应中的Chop基因mRNA水平下降,westernblot检测后可见Chop基因随PTEN的抑制而下调。结论：结合前期蛋白组学分析结果,抑制PTEN基因后可见未折迭蛋白反应中有关细胞凋亡的Chop基因下调,提示Chop基因可能在前列腺癌细胞的增殖及其凋亡中发挥作用。叁、Chop基因对前列腺癌细胞生长和凋亡的影响目的：Chop,又称为gadd153(DNA损伤诱导转录因子3)是由于内质网在应激刺激下稳态失衡所诱导高表达的基因。我们研究表明随着PTEN的下调,Chop基因随之下调。chop基因的表达与细胞凋亡有关,但是chop基因在前列腺癌细胞中与细胞凋亡及增殖的关联还未被证实。方法：实验采用前列腺癌细胞株22Rv1,通过siRNA沉默22Rv1细胞中的Chop基因,MTT检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡。利用携带Chop基因的质粒转染进入22Rv1,48小时候利用WestemBlot检测蛋白表达情况。同时MTT检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：1、抑制或沉默Chop基因后前列腺癌细胞22Rv1细胞凋亡减少、细胞活力增多。过表达Chop基因后可见细胞活力降低,细胞凋亡增加。2、过表达Chop基因后可见pAkt473、Ki67表达降低。结论：我们的数据显示抑制PTEN表达后chop基因表达减少,细胞凋亡随之减少,细胞活力升高。过表达Chop后细胞凋亡增多,细胞活力降低。随着Chop表达增多,pAkt473基因与Ki67基因表达显着下降。证明了在Chop基因可能是引起细胞凋亡过程中的一重要因素,通过降低pAkt473的表达水平,Chop基因能够促使细胞进入凋亡。同时,过表达Chop基因可见Ki67基因表达下调,推测Chop基因可能与细胞增殖有关。四、构建出可诱导表达c-myc基因的22Rv1细胞系。目的：Myc已知可直接或间接调节众多基因及途径的转录过程。本实验在此基础上结合可调控基因治疗的观念与手段,采用四环素诱导表达的载体系统,创建可诱导表达c-myc基因的22Rv1前列腺癌细胞系。方法：实验采用前列腺癌细胞株22Rv1,首先构建稳定转染的携带调节载体的22Rv1细胞系,然后转入携带c-myc基因的可调控表达载体,利用Blasticidin和Zeocin两种药物进行筛选,挑出单克隆并培养出稳定细胞系。结果：构建出可诱导表达c-myc基因的22Rv1细胞系。结论：本实验利用可调控基因治疗的观念与手段,采用四环素诱导表达的载体系统,构建出可诱导表达c-myc基因的22Rv1细胞系,为进一步研究致癌基因c-myc对于前列腺癌细胞的影响打下了良好的基础。(本文来源于《天津医科大学》期刊2013-05-01）
肖素平[3]（2013）在《前列腺癌融合基因TMPRSS2-ERG在顺铂诱导的细胞死亡中的作用》一文中研究指出前列腺癌(prostate cancer, PCa)为男性最常见的恶性肿瘤之一,前列腺癌中可见TMPRSS2与ETS家族多个成员之间发生基因融合,而TMPRSS2-ERG为最常出现的基因融合类型。已有研究表明,TMPRSS2-ERG基因融合在PCa中与肿瘤细胞的侵袭与增殖相关,但对细胞死亡的作用鲜有研究。目的：分析TMPRSS2-ERG融合基因对顺铂(cisplatin)引起的细胞死亡的影响,并对其机制进行更深入的研究,获得TMPRSS2-ERG融合基因参与细胞死亡调控的证据。方法：1.用TMPRSS2-ERG阴性的DU145细胞构建TMPRSS2-ERG融合基因编码序列AERG瞬时转染株,cisplatin染毒,经流式细胞仪检测凋亡。2. siRNA干扰TMPRSS2-ERG阳性的的VcaP细胞,介导TMPRSS2-ERG融合基因表达下调,cisplatin染毒,经流式细胞仪检测凋亡。3. TMPRSS2-ERG融合基因对cisplatin引起的细胞死亡的作用机制研究：Western-blot检测染毒处理细胞γH2AX蛋白的表达差异,明确融合基因对细胞DNA损伤的影响；q-PCR检测293-ERG稳定转染株中凋亡相关基因的表达；染色质免疫共沉淀(ChIP)验证q-PCR结果。结果：1.DU145细胞过表达TMPRSS2-ERG对顺铂诱导的细胞凋亡有抑制作用,转染组与对照组细胞死亡率各为14.67±2.69%和30.59±3.28%。2. siRNA干扰VcaP细胞使TMPRSS2-ERG表达下调后,顺铂处理,干扰组细胞凋亡率显着升高,由原来的13.59±2.82%升至21.35±3.33%。3. Western-blot结果显示,293-ERG稳定转染株细胞染毒后DNA损伤指标yH2AX蛋白表达量比对照组相差约1.8倍,提示融合基因可抑制DNA损伤。4. Q-PCR结果表明,过表达ΔERG使凋亡相关基因ATF-5表达上升了约2.5倍,TMPRSS2-ERG融合基因可结合在ATF-5基因上游启动子区,增强ATF-5的表达。结论1. TMPRSS2-ERG融合基因对顺铂诱导的细胞死亡有抑制作用。2. TMPRSS2-ERG融合基因可能通过抑制DNA损伤减少细胞的死亡,此外,TMPRSS2-ERG可通过结合ATF-5启动子区,增强ATF-5的表达,间接地抑制细胞凋亡。(本文来源于《浙江大学》期刊2013-05-01）
陈弘[4]（2013）在《小RNA诱导INTS6基因激活对去势抵抗性前列腺癌的作用及机制研究》一文中研究指出背景：前列腺癌是全世界男性面临的重要的公共卫生问题。前列腺癌由激素依赖性进展为去势抵抗性,是导致肿瘤治疗失败、患者死亡的重要原因。小RNA诱导的基因激活是分子生物学领域新兴的话题,一系列研究显示特殊设计的小RNA能够在转录水平上调靶基因的表达。该方法为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的基因靶向治疗提供了全新的策略。目的：利用小激活RNA (saRNA)上调CRPC中缺陷基因INTS6的表达,在体内和体外两个水平研究INTS6对CRPC的生物学作用及机制。方法：1.利用免疫组化方法检测组织芯片中28对前列腺癌和瘤旁组织INTS6蛋白的表达情况。2.针对INTS6基因启动子区,按照一定的原则设计saRNA.利用定量PCR、蛋白印迹以及细胞活力测定等方法,在CRPC细胞和正常上皮来源的细胞中挑选既能够上调INTS6表达,又对肿瘤细胞的活力具有一定专一性抑制作用的小RNA,并对RNA激活的时间、剂量、表遗传学和双链选择等特征进行鉴定。3.利用流式细胞技术和Transewell实验,检测saRNA处理后CRPC细胞周期、凋亡、迁移和侵袭能力的变化。通过定量PCR、蛋白印迹和细胞免疫荧光等技术手段,评价saRNA诱导INTS6基因激活对Wnt信号通路的影响。4.构建裸鼠的皮下荷PC3肿瘤模型,瘤内注射saRNA,观察在体水平saRNA对CRPC的抑制作用。结果：1.与瘤旁组织相比,前列腺癌组织中INTS6蛋白表达水平下降。2.设计并筛选得到INTS6saRNA-915,该小RNA能够在转录水平上调CRPC细胞中INTS6基因的表达,并且表现出一定的肿瘤特异性抑制作用。saRNA对靶基因的激活作用出现于处理后第2天,在第4--5天达到高峰,20nM的处理浓度激活效果较强。saRNA作用后,靶基因启动子区出现相应的表遗传学修饰改变。saRNA任何一条单链结构或功能的丧失都会影响其对INTS6基因的激活作用。3. saRNA作用于CRPC细胞后,抑制细胞的增殖能力,诱导细胞发生G0/G1期周期阻滞,同时抑制细胞的迁移和侵袭能力。saRNA在发挥上述作用的同时,细胞中P-catenin、cyclin D1、Fra-1和MET等Wrnt关键信号蛋白受到抑制,这种抑制作用依赖INTS6的正常表达。4.成功构建裸鼠的皮下荷PC3肿瘤模型。瘤内给予脂质体包裹的INTS6saRNA,观察到移植瘤的生长受到明显抑制,同时检测到瘤组织中INTS6蛋白表达升高,增殖相关蛋白Ki67和PCNA表达下调。结论：针对前列腺癌中缺陷的抑癌基因基INTS6设计并导入激活RNA能够有效上调基因的表达,同时抑制肿瘤的增殖和运动能力。该方法为去势抵抗性前列腺癌的基因靶向治疗提供了新的实验依据。(本文来源于《浙江大学》期刊2013-01-01）
宋浩杰,涂小玉,严晓,尤长宣,罗荣城[5]（2012）在《基因修饰树突状细胞诱导前列腺癌患者外周血T细胞亚群重排的研究》一文中研究指出目的:探讨以腺相关病毒(AAV)为载体,前列腺特异性抗原(PSA)基因转染树突状细胞(DC)诱导前列腺癌患者外周血T细胞亚群变化特点及临床意义。方法:抽取30例前列腺癌患者外周血,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC,即DC前体细胞及淋巴细胞),以rAAV/PSA感染DC前体细胞,采用系列细胞因子诱导DC前体细胞成熟。第6天收集成熟DC并与T细胞按比例混合培养,诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。分别于DC与T细胞混合培养前后应用流式细胞术分析外周血T细胞亚群及调节性T细胞(CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg)的表达水平。结果:PSA基因转染DC刺激T淋巴细胞爆发增殖,与培养前比较,混合培养6d后CD8~+、CD8~+CD69~+、CD8~+CD28~+T细胞的比例和CD8~+/CD4~+比值均明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);而CD8~+CD28~-T细胞和Treg细胞的比例均显着降低,差异有统计学意义(P<0.01)。CD4~+T细胞比例较前略有升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PSA基因转染DC能够有效地激活CD8~+抗原特异性CTL,下调免疫抑制性T细胞,提高患者的细胞免疫功能,为前列腺癌的免疫治疗提供新的有效策略。(本文来源于《2012年全国肿瘤分子标志学术大会与国际肿瘤转化医学论坛暨第七届中国中青年肿瘤专家论坛论文集》期刊2012-07-21）
张春[6]（2012）在《MTDH/AEG-1为靶点的基因疫苗诱导免疫抑制前列腺癌的生长转移及增强化疗药物紫杉醇敏感性的作用研究》一文中研究指出研究目的：(1)、通过该实验来评估以MTDH/AEG-1为靶点的基因疫苗对小鼠免疫功能的影响。(2)、通过体内外实验探讨以MTDH/AEG-1为靶点的基因疫苗对小鼠前列腺癌的生长转移及增强化疗药物紫杉醇敏感性的作用。研究方法：通过流式细胞仪检测免疫后小鼠脾脏CD4~+和CD8~+T细胞亚群及采用CytoTox96Non-Radioactive Cytotoxicity Assay试剂盒检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应。免疫预防模型：将C57BL/6雄性小黑鼠（6-8weeks old）随机分为叁个实验组（n=8），分别给予PBS、包含Pub-MTDH、Pub的减毒沙门氏菌（10~8cfu）灌胃饲服免疫；每周免疫一次，共免疫叁次。最后一次免疫后一周，均在叁组小鼠前列腺原位（左、右背侧叶）接种10~5RM-1细胞来构建前列腺原位移植瘤模型，诱导自发盆腔、腹膜后淋巴结转移；记录各组小鼠肿瘤大小及盆腔、腹膜后淋巴结转移数（以HE染色为准），通过免疫组织化学方法检测原位肿瘤中CD8~+分子的表达情况、用Tunel试剂盒检测肿瘤细胞凋亡情况。治疗模型：将C57BL/6雄性小黑鼠（6-8weeks old）随机分为四个实验组:Taxol、Pub、Pub-MTDH、Pub-MTDH+Taxol（n=12），分别在各组小鼠腹部皮下接种10~5RM-1细胞，建立皮下移植瘤模型，之后各组小鼠分别在3、7、11天分别给予PBS、Pub、Pub-MTDH、Pub-MTDH的DNA疫苗灌胃饲服免疫叁次，Taxol、Pub-MTDH+Taxol组小鼠分别在4、8、12天给予紫杉醇（20mg/kg）用生理盐水稀释后行腹腔注射；观察皮下肿瘤生长情况，绘制肿瘤生长曲线图、小鼠荷瘤生存曲线图，27天时取下肿瘤比较大小及重量；通过Tunel法检测肿瘤细胞凋亡情况、RT-PCR检测皮下肿瘤组织中Bcl-2、Bax基因表达情况。结果：MTDH/AEG-1基因在RM-1细胞中高表达，而在小鼠正常组织中表达非常低。pUb-MTDH/AEG-1DNA疫苗同对照组Pub、PBS组比较能显着激发CD4~+和CD8~+T细胞及细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应；有效抑制RM-1原位前列腺癌生长（p＜0.001）及盆腔、腹膜后淋巴结转移（p＜0.05）；能明显增强原位肿瘤中CD8~+分子的表达（p＜0.01），促进肿瘤细胞凋亡（p＜0.001）。pUb-MTDH/AEG-1DNA疫苗与化疗药物紫杉醇联合运用同单独运用MTDH/AEG-1、紫杉醇、pUb治疗组相比，能显着抑制RM-1皮下移植瘤生长（＊P<0.05）及有效延长荷瘤小鼠生存时间（＃P＜0.05），促使肿瘤组织中Bcl-2表达下调、Bax表达上调而促进肿瘤细胞凋亡。结论：以MTDH/AEG-1为靶点的基因疫苗能有效抑制小鼠前列腺癌的生长转移及增强化疗药物紫杉醇的敏感性。MTDH/AEG-1DNA疫苗与化疗药物紫杉醇联合运用在前列腺癌的治疗中显示出了良好的优越性，我们期待该基因疫苗还能更好地与外科手术、放射治疗等联合运用，在高表达MTDH/AEG-1基因的（前列腺癌、乳腺癌、肝癌、神经母细胞瘤、黑色素瘤、食管癌、胃癌等）恶性肿瘤的治疗中能发挥更大优势。(本文来源于《福建医科大学》期刊2012-06-01）
宋浩杰,涂小玉,严晓,尤长宣,罗荣城[7]（2011）在《基因修饰树突状细胞诱导前列腺癌患者外周血T细胞亚群重排的研究》一文中研究指出目的探讨以腺相关病毒(AAV)为载体,前列腺特异性抗原(PSA)基因转染树突状细胞(DC)诱导前列腺癌患者外周血T细胞亚群变化特点及临床意义。方法抽取30例前列腺癌患者外周血,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,以rAAV/PSA感染DC前体细胞,采用系列细胞因子诱导DC前体细胞成熟。第6天收集成熟DC并与T细胞按比例混合培养,诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。分别于DC与T细胞混合培养前后应用流式细胞术分析外周血T细胞亚群及调节性T细胞(CD4+CD25+FoxP3+Treg)的表达水平。结果 PSA基因转染DC刺激T淋巴细胞爆发增殖,与培养前比较,混合培养6d后CD8+、CD8+CD69+、CD8+CD28+T细胞的比例和CD8+/CD4+比值均明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);而CD8+CD28-T细胞和Treg细胞的比例均显着降低,差异有统计学意义(P<0.01)。CD4+T细胞比例较前略有升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PSA基因转染DC能够有效地激活CD8+抗原特异性CTL,下调免疫抑制性T细胞,提高患者的细胞免疫功能,为前列腺癌的免疫治疗提供新的有效策略。(本文来源于《热带医学杂志》期刊2011年11期）
卢子文,王晨,张显军,朱敏,俞洪元[8]（2010）在《冬凌草甲素上调人前列腺癌PC-3细胞PTEN基因的表达及其诱导凋亡作用》一文中研究指出目的:研究冬凌草甲素诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡及与PTEN基因表达的关系。方法:MTT比色法测定冬凌草甲素诱导PC-3细胞的增长抑制;流式细胞术分析DNA倍体测定细胞凋亡;RT-PCR半定量分析冬凌草甲素诱导人前列腺癌PC-3细胞后PTENmRNA的表达情况。结果:MTT比色法测得冬凌草甲素对PC-3细胞具有明显的增殖抑制作用,并随冬凌草甲素浓度的升高及作用时间的延长而增强;流式细胞术分析PC-3细胞经冬凌草甲素诱导后,细胞凋亡比率随作用时间延长而增加。RT-PCR测得PTEN基因mRNA的表达随细胞凋亡的增加而逐渐增高。结论:冬凌草甲素能够明显抑制PC-3细胞的增殖,并诱导前列腺癌细胞凋亡,其作用途径可能与上调PTENmRNA表达有关。(本文来源于《中国临床药理学与治疗学》期刊2010年10期）
张鹏举[9]（2009）在《NKX3.1诱导前列腺癌PC-3细胞基因表达谱的改变分析》一文中研究指出NKX3.1是前列腺细胞特异表达的、受雄激素调节的同源盒基因,在前列腺胚胎发育、上皮分化及肿瘤发生发展中起重要作用。在胚胎形成过程中,NKX3.1的表达可作为前列腺上皮分化的重要标志。NKX3.1基因敲除的老鼠显示前列腺上皮发育不良、腺管形态异常和蛋白分泌障碍,表明NKX3.1对于前列腺的正常发育及维持前列腺上皮的正常分化是必需的。更重要的是NKX3.1基因敲除鼠随着年龄的增长,出现了类似于人前列腺上皮内瘤(intraepithelialneoplasia,PIN)的病理变化,表明NKX3.1缺失可能与前列腺癌的起始有关。人同源盒基因NKX3.1位于染色体8p21,基因全长约4.2 kb,编码234个氨基酸,其产物在结构与功能上属于核转录因子。研究发现,约90%的前列腺肿瘤中存在染色体8p21区域的杂合缺失,NKX3.1即定位于此区域,认为NKX3.1在前列腺癌中可能作为抑癌基因发挥作用,它的表达缺失不仅与前列腺癌的起始及其进展有密切关系,而且决定了肿瘤发生的组织特异性。胚胎的发生与肿瘤的发生被认为是两个密切相关的过程。人同源盒基因NKX3.1是目前唯一已知参与前列腺的胚胎发育和前列腺癌发生两个过程的基因,因而NKX3.1基因的研究为进一步探讨前列腺的胚胎发育和肿瘤发生两个过程之间的关系以及同源盒基因在这两个过程的作用提供了一个理想的模式。但是,目前,关于人同源盒基因NKX3.1在前列腺癌发生发展中的作用及其作用机理尚不完全清楚。NKX3.1作为体内重要的转录因子,受其调控的靶基因目前知道的很少,本研究从筛选鉴定NKX3.1调控的下游靶基因入手,探讨NKX3.1在前列腺癌细胞中的作用及机理。首先通过稳定转染NKX3.1表达载体,使NKX3.1在前列腺癌细胞PC-3中恢复表达,然后应用基因芯片检测NKX3.1诱导的PC-3细胞基因表达谱的改变,分析筛选差异表达基因,并分别在NKX3.1表达载体稳定转染的PC-3细胞系和NKX3.1干扰RNA表达载体稳定转染的LNCaP细胞系验证相关基因的表达;最后,根据基因芯片结果,我们进一步探讨了NKX3.1对其下游靶基因胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)和caspase3基因的调控机制及其功能影响。本研究为进一步阐明NKX3.1在前列腺发育及肿瘤发生发展中的作用及其基因表达调控机制奠定了基础,有助于我们深入了解前列腺癌发生发展的分子机理并为前列腺癌的临床诊断和治疗提供新的思路和靶点。第一部分构建NKX3.1稳定表达的PC-3细胞系及基因芯片检测NKX3.1诱导的基因表达谱的改变【研究目的】应用基因芯片检测NKX3.1诱导的PC-3细胞基因表达谱的改变,筛选鉴定NKX3.1调控的下游靶基因,为进一步明确NKX3.1在前列腺癌发生发展中的作用奠定基础。【研究方法和结果】1.本实验室前期工作已经构建NKX3.1-cDNA真核表达载体peDNA3.1-NKX3.1,应用脂质体将其转染至前列腺癌细胞PC-3,通过G418筛选、有限稀释法克隆培养获得NKX3.1稳定转染的PC-3(+)细胞,转染空载体pcDNA3.1组作为对照;RT-PCR,Western blotting验证NKX3.1在PC-3(+)细胞中的表达;结果显示:在筛选的9个细胞克隆中,NKX3.1在1,2,3,4,5,8,9细胞克隆中均稳定表达,尤以克隆8中的表达更为明显。2.MTT法、细胞克隆形成实验及Trans-well细胞侵袭实验检测NKX3.1对细胞克隆1,8和9细胞增殖、侵袭能力的影响;结果显示:PC-3(+)细胞克隆1,8和9细胞生长受到显着抑制,生长抑制率大约为50%;细胞克隆形成能力较空白对照组减弱大约21.5%;clonel,8和9侵袭至Matrilgel滤膜下的细胞数分别为(63±11),(55±17)和(51±12),明显少于空白对照组(144±13)。3.分别提取稳定转染pcDNA3.1-NKX3.1和pcDNA3.1空载体的PC-3细胞总RNA,利用含有22,000个人类基因的基因芯片检测NKX3.1恢复表达后引起的PC-3细胞基因表达谱的改变。结果显示:在检测的22,000个基因中有1,953个基因的表达发生了2倍以上的变化,其中1013个基因表达上调,940个基因表达下调。139个基因的表达发生了10倍以上的变化,其中128个基因表达下调,11个基因表达上调。这些发生变化基因的功能涉及多个方面,包括细胞生长增殖、细胞凋亡、信号转导、细胞黏附与侵袭等。4.构建NKX3.1 siRNA真核表达载体pRNAT-RNAi,应用脂质体将其转染至LNCaP细胞。G418筛选、有限稀释法克隆培养获得稳定转染pRNAT-RNAi的LNCaP细胞株LNCaP(-),并应用RT-PCR和Western blotting进行鉴定证实NKX3.1在LNCaP(-)细胞中表达降低。随机选择基因芯片中差异表达的基因bcl-2,sp1,sod2,cyclinE,P27,Tusc3,Cdk6和AMACR,应用RT-PCR,Western在上述PC-3(+)/PC-3和LNCaP/LNCaP(-)细胞中进行验证。结果显示:4组细胞的RT-PCR和Western blotting结果与芯片结果一致。【结论】1.NKX3.1在PC-3(+)细胞中稳定表达,并且能够引起PC-3细胞表型的改变,如:增殖速度减慢,侵袭力下降。2.NKX3.1恢复表达可引起前列腺癌细胞PC-3基因表达谱的广泛变化,提示NKX3.1在前列腺癌细胞中可能通过与这些基因的相互作用而发挥非常多样广泛的作用。为进一步深入研究NKX3.1基因与前列腺癌发生、发展的关系提供了理论依据。第二部分NKX3.1上调caspase3基因表达,促进细胞凋亡的作用研究【目的】研究NKX3.1对caspase3的正向调控作用并初步探讨其机制。【研究方法和结果】1.基因芯片结果显示,NKX3.1稳定表达的PC-3(+)细胞中,caspase3表达升高,进一步应用RT-PCR、Western blotting进行验证;结果显示PC-3(+)细胞中caslaase3 mRNA和蛋白质的表达均高于PC-3细胞。2.应用凋亡诱导剂肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和放线菌酮(Cycloheximide,CHX)同时作用PC-3和PC-3(+)细胞,caspas3活性检测试剂盒检测两组细胞中caspase3的活性,流式细胞术检测细胞凋亡率;结果显示:10 ng/mlTNF-α和10μg/ml CHX作用6 h,PC-3细胞中caspase3活性升高1.4倍,而PC-3(+)细胞中caspase3活性升高2.4倍;流式细胞仪检测细胞凋亡率显示,PC-3细胞凋亡率3.14%,而PC-3(+)细胞凋亡率为8.2%。3.提取人基因组DNA,PCR扩增caspaSe3基因5'上游3764 bp(-2880 bp/+884bp)启动调控区序列,插入pGL3-basic,构建caspase3启动子-荧光素酶报道基因表达载体pGL3-pcas,进行酶切和测序鉴定;结果显示:重组质粒pGL3-pcas酶切鉴定及DNA测序结果均正确。4.pGL3-pcas瞬时转染前列腺癌细胞PC-3,同时与pcDNA3.1或pcDNA3.1-NKX3.1共转染PC-3细胞,荧光素酶报道基因分析检测caspase3启动子活性及NKX3.1对启动子活性的影响;结果显示:caspase3基因上游3764 bp片段具有明显的启动子活性,转染NKX3.1可使该启动子活性升高3倍。5.计算机软件MatInspector2.2分析caspase3基因3.7 kb启动子区存在3个NKX3.1可能的结合序列(NBS1～3)。首先通过电泳迁移率变动实验(EMSA)、染色质免疫共沉淀(ChIP)检测NKX3.1与NBS1～3的结合活性。然后,人工合成NBS1～3,将其插入pGL3-promoter的SV40启动子上游,与pcDNA3.1/pcDNA3.1-NKX3.1共转染PC-3细胞,报道基因分析启动子活性变化,确定NBS1～3的功能。结果显示:EMSA和ChIP检测表明NKX3.1与NBS3序列有特异的结合活性。进一步的报告基因检测显示NBS3可以使SV40启动子活性增加1.86倍,而NBS1和NBS2则在共转染后对SV40启动子活性没有明显的影响。【结论】1.NKX3.1能够在转录水平上调PC-3细胞中caspause3的表达,从而促进caspase3的活化,促进TNF-α和CHX对细胞凋亡的诱导作用。2.NKX3.1可以通过与caspase3基因上游一个功能性的NKX3.1结合元件NBS3(-718 bp/-732 bp)的结合正向调控caspase3基因的表达,从而促进对细胞凋亡的诱导作用。第叁部分NKX3.1下调胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)基因表达,抑制细胞增殖的作用研究【研究目的】研究NKX3.1对IGF1R的负向调控作用并初步探讨其机制。【研究方法和结果】1.基因芯片结果显示,NKX3.1稳定表达的PC-3(+)细胞中,IGF1R表达降低,进一步应用RT-PCR、Western blotting进行验证;结果显示PC-3(+)细胞中IGF1R mRNA和蛋白质的表达均低于PC-3细胞。2.100ng/ml IGF1分别作用PC-3和PC-3(+)细胞,MTT法、流式细胞术检测IGF1对两组细胞细胞增殖和细胞周期的影响;结果表明:100ng/ml IGF1作用24 h,PC-3细胞增殖增殖活性增加55.1%,G0/G1期细胞由68.18%减至56.85%;而PC-3(+)细胞增殖活性增加17.1%,G0/G1期细胞期细胞由92.4%减至85.51%。3.提取人基因组DNA,PCR扩增IGF1R基因5'上游3304 bp(-3259 bp/+45 bp)启动调控区序列,插入pGL3-basic,构建IGF1R启动子-荧光素酶报道基因表达载体pGL3-pIGF1R,进行酶切和测序鉴定;结果显示:重组质粒pGL3-pIGF1R酶切鉴定及DNA测序结果均正确。4.pGL3-pIGF1R瞬时转染前列腺癌细胞PC-3,同时与pcDNA3.1或pcDNA3.1-NKX3.1共转染PC-3细胞,荧光素酶报道基因分析检测IGF1R启动子活性及NKX3.1对启动子活性的影响;结果显示:该3304 bp片段具有启动子活性,转染NKX3.1可使该启动子活性降低50%。5.计算机软件MatInspector2.2分析IGF1R基因3304 bp启动子区存在2个NKX3.1可能的结合序列(NBS1～2)。首先通过EMSA、ChIP检测NKX3.1与NBS1～2的结合活性。然后,人工合成NBS1-2,将其插入pGL3-promoter的SV40启动子上游,与pcDNA3.1/pcDNA3.1-NKX3.1共转染PC-3细胞,报道基因分析观察启动子活性变化,确定NBS1～2的功能;结果显示:EMSA和ChIP检测表明NKX3.1与NBS1～2均无明显的结合活性。进一步的报告基因检测显示NBS1～2对SV40启动子活性没有明显影响。【结论】1.NKX3.1能够在转录水平降低PC-3细胞中IGF1R的表达,并且抑制IGF1对细胞增殖的激活作用。2.NKX3.1不是通过与NKX3.1的结合序列直接结合发挥其对IGF1R基因的调控作用,可能通过与其他反式作用因子间接作用负向调控IGF1R基因的表达,从而抑制IGF1/IGF1R对细胞增殖的调节作用。NKX3.1调控IGF1R基因表达的机制有待于进一步研究。(本文来源于《山东大学》期刊2009-04-20）
高晓东,陈一戎[10]（2007）在《端粒酶hTERT基因反义核酸对TNF-α诱导前列腺癌PC3细胞凋亡的影响》一文中研究指出目的:探讨hTERT基因的两端部分硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)抑制前列腺癌细胞PC3端粒酶活性后,肿瘤坏死因子α(TNF-α)对PC3凋亡的增敏作用。方法:采用端粒重复序列扩增法及TRAP-PCR-ELISA法检测前列腺癌细胞的端粒酶活性;采用MTT比色试验观察hTERTAS PS-ODN与TNF-α共同作用对前列腺癌细胞PC3生长活力的影响;倒置显微镜观察凋亡细胞的形态变化;通过流式细胞仪测定凋亡细胞的百分率。结果:hTERTAS PS-ODN作用于PC3细胞48h,其端粒酶活性下降,作用72h,其端粒酶活性受到抑制,与正义寡核苷酸组及空白对照组相比差异有显着性(P<0.05)。hTERTAS PS-ODN作用于PC3细胞后加入TNF-α作用48h,PC3细胞的抑制率与对照组、S PS-ODN组、AS PS-ODN组、TNF-α组及S PS-ODN+TNF-α组相比有统计学差异(P<0.01)。hTERTAS PS-ODN作用于PC3细胞后加入TNF-α作用48h,细胞出现典型的凋亡形态变化。hTERT ASPS-ODN作用于PC3细胞后加入4μg/ml TNF-α作用48h,凋亡细胞的百分率分别与对照组、S PS-ODN组、AS PS-ODN组、TNF-α组及S PS-ODN+TNF-α组相比差异有显著性(P<0.05)。结论:hTERTAS PS-ODN能降低前列腺癌细胞PC3端粒酶活性;hTERT基因反义核酸对TNF-α诱导前列腺癌细胞PC3凋亡有增敏作用。(本文来源于《中华男科学杂志》期刊2007年08期）
人前列腺癌诱导基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
一、PTEN敲除小鼠前列腺癌模型的蛋白组学分析目的：通过高通量的质谱技术以及SILAC精确的计量技术,使蛋白组学能够应用于前列腺癌蛋白质组的系统分析,明确在肿瘤进程中有意义的蛋白指标。方法：使用精氨酸10、赖氨酸8标记的SILAC培养液对PTEN敲除小鼠前列腺癌细胞株进行培养。RIPA液对细胞进行裂解。正常组织、肿瘤标本的石蜡切片及小鼠前列腺癌细胞系提取蛋白,胰蛋白酶消化,肽链的分离及液相质谱分析,软件数据分析。结果：数据分析最终得到约2000种蛋白。其中肿瘤标本中明显上调蛋白占264种,明显下调蛋白303种。PTEN敲除标本中有关细胞粘附的蛋白表达上调(胶原蛋白、层粘连蛋白、整合素…)；有关蛋白质运输(RAB)上调；调节细胞周期的部分蛋白下调(MAPK7、胞裂蛋白及组蛋白),有关未折迭蛋白反应中的一系列基因下调。结论：利用SILAC技术的定量蛋白组学研究能够精确地对比肿瘤组织与正常组织之间的蛋白水平差异,能够更好地了解前列腺癌进展的分子生物学机制,为前列腺癌早期的生物学标志物的筛选、寻找有效地靶向治疗基因及对于前列腺癌治疗效果进行有效的监测建立了良好的基础。二、抑制PTEN表达后前列腺癌细胞22Rv1的变化目的：结合蛋白组学分析结果,PTEN基因的缺失可能会引起有关未折迭蛋白反应的基因的改变,从而对细胞的增殖与凋亡产生影响。目前PTEN与未折迭蛋白反应中有关凋亡的Chop基因之间的关系尚无有关报道。方法：实验采用前列腺癌细胞株22Rv1,首先利用siRNA干扰技术沉默22Rv1细胞中的PTEN基因。MTT检测22Rv1细胞沉默PTEN基因后的细胞活力。流式细胞仪检测细胞凋亡。使用realtimePCR技术检测未折迭蛋白反应中Chop基因,观察其随着PTEN基因沉默后的表达情况。利用WesternBlot检测蛋白表达情况。结果：抑制或沉默PTEN后前列腺癌细胞22Rv1的凋亡减少,细胞活力升高。westernBlot可见P-AKT473表达水平降低。Realtime PCR可见未折迭蛋白反应中的Chop基因mRNA水平下降,westernblot检测后可见Chop基因随PTEN的抑制而下调。结论：结合前期蛋白组学分析结果,抑制PTEN基因后可见未折迭蛋白反应中有关细胞凋亡的Chop基因下调,提示Chop基因可能在前列腺癌细胞的增殖及其凋亡中发挥作用。叁、Chop基因对前列腺癌细胞生长和凋亡的影响目的：Chop,又称为gadd153(DNA损伤诱导转录因子3)是由于内质网在应激刺激下稳态失衡所诱导高表达的基因。我们研究表明随着PTEN的下调,Chop基因随之下调。chop基因的表达与细胞凋亡有关,但是chop基因在前列腺癌细胞中与细胞凋亡及增殖的关联还未被证实。方法：实验采用前列腺癌细胞株22Rv1,通过siRNA沉默22Rv1细胞中的Chop基因,MTT检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡。利用携带Chop基因的质粒转染进入22Rv1,48小时候利用WestemBlot检测蛋白表达情况。同时MTT检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：1、抑制或沉默Chop基因后前列腺癌细胞22Rv1细胞凋亡减少、细胞活力增多。过表达Chop基因后可见细胞活力降低,细胞凋亡增加。2、过表达Chop基因后可见pAkt473、Ki67表达降低。结论：我们的数据显示抑制PTEN表达后chop基因表达减少,细胞凋亡随之减少,细胞活力升高。过表达Chop后细胞凋亡增多,细胞活力降低。随着Chop表达增多,pAkt473基因与Ki67基因表达显着下降。证明了在Chop基因可能是引起细胞凋亡过程中的一重要因素,通过降低pAkt473的表达水平,Chop基因能够促使细胞进入凋亡。同时,过表达Chop基因可见Ki67基因表达下调,推测Chop基因可能与细胞增殖有关。四、构建出可诱导表达c-myc基因的22Rv1细胞系。目的：Myc已知可直接或间接调节众多基因及途径的转录过程。本实验在此基础上结合可调控基因治疗的观念与手段,采用四环素诱导表达的载体系统,创建可诱导表达c-myc基因的22Rv1前列腺癌细胞系。方法：实验采用前列腺癌细胞株22Rv1,首先构建稳定转染的携带调节载体的22Rv1细胞系,然后转入携带c-myc基因的可调控表达载体,利用Blasticidin和Zeocin两种药物进行筛选,挑出单克隆并培养出稳定细胞系。结果：构建出可诱导表达c-myc基因的22Rv1细胞系。结论：本实验利用可调控基因治疗的观念与手段,采用四环素诱导表达的载体系统,构建出可诱导表达c-myc基因的22Rv1细胞系,为进一步研究致癌基因c-myc对于前列腺癌细胞的影响打下了良好的基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人前列腺癌诱导基因论文参考文献
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[2].景宝.PTEN敲除小鼠前列腺癌模型的蛋白组学分析靶基因Chop的确定及诱导性表达c-myc细胞系的建立[D].天津医科大学.2013
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[8].卢子文,王晨,张显军,朱敏,俞洪元.冬凌草甲素上调人前列腺癌PC-3细胞PTEN基因的表达及其诱导凋亡作用[J].中国临床药理学与治疗学.2010
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