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海洋高产尿酸氧化酶菌株筛选鉴定及酶学性质研究

2020-12-02阅读(998)

海洋高产尿酸氧化酶菌株筛选鉴定及酶学性质研究

论文摘要

尿酸氧化酶广泛用于常规临床分析和临床药物,在医学治疗和诊断中的重要性日益增加。为得到高产尿酸氧化酶的优良菌株,以大连黄海海泥、海水为材料,依次分别采用透明圈法、酶偶联分光光度法进行初筛和复筛,获一株高产尿酸氧化酶菌株Z7,根据菌株Z7的16S rDNA基因序列和形态学、生理生化特征,该菌株被鉴定为苛求芽孢杆菌（Bacillus fastidiosus）。酶学性质研究表明:尿酸氧化酶蛋白的分子量约为33.1 kD;最适作用温度是25℃,酶活高达673.7 U/mg;最适作用pH为8.0,在pH 8-9表现出较强的稳定性;Fe3+、Ca2+对尿酸氧化酶具有激活作用。Ag+、Hg2+对该酶抑制性较强,使其几乎丧失活性。该菌株产酶活性及稳定性良好,可为尿酸氧化酶的工业化生产奠定理论基础,并具有潜在开发价值。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 样品
  •     1.1.2 试剂
  •     1.1.3 培养基
  •     1.1.4 设备与仪器
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 菌株筛选
  •       1.2.1. 1 初筛
  •       1.2.1. 2 复筛
  •     1.2.2 菌株鉴定
  •       1.2.2. 1 形态学特征
  •       1.2.2. 2 生理生化特征通过
  •       1.2.2. 3 菌株分子生物学鉴定
  •     1.2.3 粗酶液制备方法
  •     1.2.4 酶活测定方法
  •     1.2.5 酶的分离纯化
  •       1.2.5. 1 盐析[30-31]取10 m L经破碎离心处理后的粗
  •       1.2.5. 2 透析和超滤
  •       1.2.5. 3 Sephadex G-100凝胶过滤层析纯化尿酸氧化酶
  •       1.2.5. 4 SDS-PAGE电泳检测纯度
  •     1.2.6 酶学性质
  •       1.2.6. 1 酶最适作用温度
  •       1.2.6. 2 酶的热稳定性
  •       1.2.6.3酶最适作用pH
  •       1.2.6. 4 酶的p H稳定性
  •       1.2.6. 5 化学试剂对酶活影响
  • 2 结果
  •   2.1 菌株筛选
  •   2.2 菌株鉴定
  •     2.2.1 形态学特征
  •     2.2.2 生理生化特征
  •     2.2.3 16S rDNA基因序列分析与系统发育树构建
  •   2.3 尿酸氧化酶分离纯化
  •     2.3.1 Sephadex G-100凝胶过滤层析纯化尿酸氧化酶
  •     2.3.2 尿酸氧化酶分离纯化结果
  •   2.4 酶学性质
  •     2.4.1 酶最适作用温度
  •     2.4.2 酶的热稳定性
  •     2.4.3 酶最适作用pH
  •     2.4.4 酶的pH稳定性
  •     2.4.5 化学试剂对酶活影响
  • 3 讨论
  • 4 结论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张庆芳,逄飞,于爽,肖景惠,窦少华,迟乃玉

    关键词: 苛求芽孢杆菌,鉴定,尿酸氧化酶,分离纯化,酶学性质

    来源: 生物技术通报 2019年07期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学

    单位: 大连大学生命科学与技术学院,辽宁省海洋微生物生物工程技术研究中心

    基金: 国家高技术研究发展计划“863”计划项目(2014AA093512)

    分类号: Q93

    DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-1057

    页码: 61-69

    总页数: 9

    文件大小: 3758K

    下载量: 181

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