导读:本文包含了猪肝酯酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:猪肝,羧酸,通城,农药,复性,哌啶,活力。
猪肝酯酶论文文献综述
彭开敏,叶泰,曹慧,袁敏,于劲松[1]（2018）在《猪肝酯酶杂化“纳米花”的制备及其对菊酯类农药的水解性能研究》一文中研究指出采用生物矿化策略,在磷酸盐缓冲液中制备了猪肝酯酶(Porcine liver esterase,PLE)杂化"纳米花"(Ca3(PO4)2-PLE)。利用扫描电镜、元素能谱分析及红外光谱对所制备的杂化"纳米花"进行了形貌和成分分析。对杂化"纳米花"制备过程中的参数进行优化,结果表明:在10 mmol/L磷酸盐缓冲液(p H 7. 4)中,猪肝酯酶质量浓度为0. 3 g/L,钙离子浓度为500 mmol/L,制备温度为20℃时,所制备的Ca3(PO4)2-PLE具有最高酶活,其酶活为同等酶浓度下液酶酶活的169%。将制备的Ca3(PO4)2-PLE用于4种菊酯类农药的酶解性能研究,发现相同条件下,Ca3(PO4)2-PLE的酶解率均优于液酶。此外,制备的Ca3(PO4)2-PLE用于菊酯农药酶解循环2次后仍保持70%以上的活力。(本文来源于《分析测试学报》期刊2018年12期）
杨莉,王羚佳,开拓,黄玉坤,黄瑛[2]（2018）在《猪肝酯酶农药敏感性及其与胆碱酯酶的对比研究》一文中研究指出【目的】探讨猪肝酯酶(PLE)对农药的敏感性,为农药残留快速检测提供新的敏感酶源。【方法】以乙酸-1-萘酯为底物,考察PLE酶促反应的最适温度、p H及几种农药的最佳作用时间,同时比较了PLE对几种特异性酶抑制剂的敏感性;以电鳗乙酰胆碱酯酶(ACh E-ee)、马血清丁酰胆碱酯酶(BCh E-hs)为对照酶源,采用酶抑制法,绘制5种有机磷农药(敌百虫、敌敌畏、甲胺磷、辛硫磷、毒死蜱)和5种氨甲酸酯类农药(灭多威、克百威、丁硫克百威、残杀威、涕灭威)的抑制曲线,并计算相关半抑制率(IC50),比较各种酶的农药敏感性。【结果】猪肝酯酶酶活测定方法的最佳温度、时间、p H分别为35℃、15 min、7.0;农药最适作用时间为15min;猪肝酯酶对双(4-硝基苯基)磷酸酯敏感性最高,毒扁豆碱次之,盐酸多奈哌齐最低;与胆碱酯酶相比,猪肝酯酶对供试的多数有机磷农药和氨甲酸酯类农药的IC50更低,,敏感性更好。【结论】猪肝酯酶具有良好的农药敏感性,可以作为酶抑制法农药残留快速检测的候选酶源。(本文来源于《西南农业学报》期刊2018年07期）
刘希妍[3]（2018）在《猪肝羧酸酯酶调控机体炎症水平机制的研究》一文中研究指出猪肝羧酸酯酶(pig liver carboxylesterase,PLE)是哺乳动物同类酶中最复杂的酶家族。目前本研究团队已克隆到包括已报道7种亚型在内的108种PLE同工酶,其中出现频率较高的有55种。哺乳动物羧酸酯酶具有高度的酶活性和底物灵活性,可以水解多种内外源性物质而发挥不可替代的药理学和毒理学作用,但对其生理作用却知之甚少,这与羧酸酯酶在体内分布的丰度不相称。另有研究表明,人类CES可以水解内源性大麻素,这给PLE在生理作用方面的研究提供了思路。常见的内源性大麻素有2-AG和AEA两种,其在机体内按需合成并具有抑炎的作用,主要由经典的大麻降解酶MAGL和FAAH水解。PLE与经典的大麻素降解酶同属于丝氨酸水解酶家族,且2-AG和AEA分别含有可供PLE水解的酯键和酰胺键,有理由推测PLE可能通过水解大麻素调控炎症水平。为证明PLE在炎症反应中的作用并阐明其作用机制,本研究首先原核功能性表达PLE1和PLE6两种亚型,进行体外水解内源性大麻素研究,发现PLE1和PLE6都能够水解大麻素2-AG,且PLE6水解2-AG酶活力水平高达62.7nmol/min/mg。这为研究PLE调控炎症反应机制提供了直接的依据。本研究团队前期研究发现PLE主要分布在肝脏,因此,本研究用含有丰富PLE的成年猪肝脏S9体外水解大麻素2-AG和AEA。研究证明,肝脏S9不仅可以水解大麻素2-AG和AEA,且经羧酸酯酶特异性抑制剂BNPP处理后,成年猪肝脏S9水解内源性大麻素酶活力水平下调,证明肝脏中PLE可水解内源性大麻素。PLE定位在细胞的内质网腔中,只能对进入细胞内的物质发挥水解作用。因此,本研究选择293T细胞系过表达含有信号肽的PLE6,在活细胞水平,试验大麻素2-AG是否可进入细胞内并被PLE水解。LC-MS/MS检测2-AG水解产物花生四烯酸(Arachidonic,AA),结果在细胞培养基中、细胞培养基和细胞混合物中发现产物AA均显着高出对照组,表明大麻素2-AG能够进入细胞、并被定位于内质网腔中的PLE水解,也提示机体产生的内源性大麻素能进入细胞从而被PLE水解,为PLE调控机体炎症机制的研究打下良好的基础。PLE水解内源性大麻素后可生成AA,AA又为前列腺素的前体物质。因此PLE水解大麻素参与炎症反应的调节较复杂。为此,本研究建立了原代猪肝细胞、原代枯否氏细胞、原代淋巴细胞共培养模型,探究机体中的PLE对炎症反应的调控机制。首先,外源添加2-AG处理LPS诱导的共培养细胞炎症模型,蛋白质芯片检测结果证明2-AG发挥抑炎作用。其次,用重组PLE6水解过的2-AG处理LPS诱导的共培养细胞炎症模型,蛋白质芯片检测结果表明PLE水解2-AG后发挥促炎作用。然后,用羧酸酯酶特异性抑制剂BNPP处理LPS诱导的共培养细胞炎症模型,蛋白质芯片检测结果表明BNPP抑制PLE后发挥抑炎作用,即PLE发挥促炎作用。经以上研究证明2-AG具有抑炎作用、PLE水解大麻素发挥促炎作用。最后,用BNPP处理共培养细胞模型3h后,再添加大麻素2-AG作用于LPS诱导的共培养细胞炎症模型,蛋白质芯片检测结果表明BNPP能显着下调2-AG作用后LPS诱导的炎症水平,进一步证明PLE水解大麻素发挥促炎作用。由于原代枯否氏细胞分离到的数量有限,本研究则加入MoDC和肺泡巨噬细胞系,即为原代猪肝细胞、MoDC、KCs和肺泡巨噬细胞系4种细胞共培养。首先,荧光定量检测结果证明2-AG在共培养细胞炎症模型中发挥抑炎作用。其次,本研究外源添加PLE1和PLE6重组蛋白于共培养细胞炎症模型,蛋白质芯片结果为PLE1和PLE6均发挥促炎作用。最后,选用BNPP处理LPS诱导的共培养细胞炎症模型,蛋白质芯片检测结果为BNPP显着抑制LPS诱导的炎症水平,证明PLE在共培养细胞炎症模型中发挥促炎作用。以上研究结果与叁种共培养细胞模型研究结果相一致。最后,用经典的大麻素降解酶MAGL抑制剂JZL184,对比MAGL与PLE在炎症细胞模型中的作用,蛋白质芯片检测结果为JZL184下调LPS诱导的炎症水平,表明PLE与MAGL对炎症反应的调节趋势相同。(本文来源于《华中农业大学》期刊2018-06-01）
陆天怡,赵梨[4]（2017）在《固定化猪肝酯酶法制备S-4-甲基哌啶酸的研究》一文中研究指出S-4-甲基哌啶酸是重要的药物中间体,本文考察了海藻酸钠、壳聚糖等制备固定化猪肝酯酶的工艺稳定性,确定了最适酶浓度、底物浓度、温度和pH。壳聚糖法固定化猪肝酯酶选择性水解制备S-4-甲基-哌啶甲酸,de值高达99%,固定化酶重复利用率高,工艺稳定。(本文来源于《广东化工》期刊2017年24期）
杨路[5]（2016）在《猪肝羧酸酯酶主要亚型功能性表达及其酶活性比较研究》一文中研究指出猪肝羧酸酯酶(pig liver carboxylesterase,PLE)是一个由多种同工酶组成的酶家族,它存在于猪的肝脏中。从猪体内直接提取的PLE是多种同工酶的混合物,且不同批次提取物的成分和活性差异较大。到目前为止,文献报道的PLE有7种亚型,分别为PLE1,PLE2,PLE3,PLE4,PLE5,PLE6以及APLE。PLE具有高度的立体选择性,在水解对映异构体的反应中能选择性地水解其中的一种,获得单一的对映体产物,在功能性单一对映体化合物和药物中间体工业生产中起到重要的作用,因而在有机化学合成领域扮演重要的角色。本研究早期的研究表明,在通城猪和大白猪肝脏中有多种PLE同工酶存在,它们的表达丰度和表达水平与年龄及品种显着相关。本研究通过对PLE主要亚型进行原核功能性表达,获得PLE重组蛋白,测定PLE重组蛋白对通用底物和特异性底物的水解活力,获得PLE同工酶的水解特征,为进行PLE水解兽药的研究提供理论依据。又选取PLE同工酶中氨基酸差异最小且酶活力差异最大的亚型,进行基因定点突变,寻找影响酶活性大小的关键氨基酸,探讨影响PLE水解活性的决定因素。本研究在克隆得到多种PLE同工酶c DNA的基础上,通过对PLE的表达丰度分析,筛选出PLE同工酶中的主要亚型PLE1、PLE2、PLE3、PLE4、PLE5、PLE6、APLE、PLE12、PLE13、PLE18,对其进行原核功能性表达。依据Gen Bank中PLE1c DNA序列设计引物。上游引物从去除信号肽之后的核苷酸序列开始,5'端依次加上7个保护性碱基GGAATTC和Nde I酶切位点CATATG;下游引物去除编码内质网滞留信号的12个核苷酸(CATGCTGAGCTG),5'端依次加入3个保护性碱基CCG、Xho I酶切位点CTCGAG和终止密码子TCA。用课题组前期构建的重组p MD18T-PLE为模板,用上述引物扩增PLE的ORF。将PLE基因插入到表达载体p ET15b上,构建p ET15b-PLE原核表达载体。将构建的表达载体与分子伴侣质粒p Gro7在Origami?2(DE3)中进行共表达。首先加入L-阿拉伯糖(L-Arabinose)诱导p Gro7表达,接着加入异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导PLE表达。诱导后离心集菌,破碎菌体收集上清液,用镍离子亲和层析的方法进行纯化,SDS-PAGE电泳分析PLE蛋白。用通用底物对硝基苯基乙酸酯(p-NPA)检测纯化PLE的水解活性,重组PLE1、PLE2、PLE3、PLE4、PLE5、PLE6、APLE、PLE12、PLE13、PLE18水解p-NPA的活力分别为:3.5U/mg、1.75 U/mg、1.19 U/mg、1.41 U/mg、1.78 U/mg、6.72 U/mg、2.91 U/mg、1.83 U/mg、1.73 U/mg、1.71 U/mg。用自动电位滴定仪测定PLE1、PLE2、PLE3、PLE4、PLE5、PLE6、APLE对特异性底物丁酸甲酯和丁酸己酯的活性,发现PLE1,PLE2,PLE3,PLE4,APLE优先水解丁酸甲酯,而PLE5,PLE6优先水解丁酸己酯。笔者对所有已见报道的PLE亚型和本研究新发现的PLE亚型(数据尚未发表)进行分析,发现所有亚型都具有相同的活性中心即催化叁联体(Ser204-Glu336-His449)。但前述研究结果显示不同的同工酶水解活力存在差异,表明PLE的活性中心并不能完全决定酶活力的高低,于是笔者对存在于活性中心以外的可能影响因素进行了研究。本研究前期研究共克隆到54种同工酶(已见报道的有7种),根据同工酶氨基酸序列的相似度将其分为七大类,用大写字母A~G代表,每一大类型用阿拉伯数字进行区别。从上述54种同工酶中筛选出5组彼此之间氨基酸差异最小的同工酶,为PLE-A8/PLE-A9、PLE-C2/PLE-C3、PLE-D4/PLE-D5、PLE-F3/PLE-F4、PLE-G6/PLE-G7,分别进行原核功能性表达。测定它们对p-NPA的酶活力分别为:1.17U/mg/5.9U/mg、0.99 U/mg/0.63U/mg、40.27U/mg/0.83U/mg、7.84U/mg/13.29U/mg、1.57U/mg/0.8U/mg,发现PLE-D4/PLE-D5这组亚型中酶活力相差最大。对PLE-D4和PLE-D5氨基酸全序列进行比对,发现两者间共有4个氨基酸不同,分别位于43、92、150、305位。以PLE-D4、PLE-D5为模板对这4个位置的氨基酸分别进行定点突变,获得8种突变体。对突变体进行原核功能性表达,测定PLE-D4的4种突变体L43P、T92I、A150D、M305V对p-NPA的酶活力分别为:0.48 U/mg、7.68 U/mg、1.07 U/mg、2.85 U/mg,酶活性相比PLE-D4的40.27 U/mg分别降低84.5倍、5.2倍、37.7倍、14.1倍。PLE-D5的4种突变体P43L、I92T、D150A、V305M对p-NPA的酶活力分别为:1.33 U/mg、2.0 U/mg、0.38 U/mg、0.57 U/mg,酶活性相比PLE-D5的0.83 U/mg,P43L、I92T分别升高1.6倍、2.4倍,D150A、V305M分别降低2.2倍、1.5倍。通过突变体活力分析发现PLE-D4的43位亮氨酸L和92位苏氨酸T能够显着提高PLE对通用底物p-NPA的活力,可作为定点突变提高PLE活力的靶点。(本文来源于《华中农业大学》期刊2016-06-01）
肖启玲[6]（2015）在《通城猪与大白猪猪肝羧酸酯酶表达谱与品种差异研究》一文中研究指出猪肝羧酸酯酶(pig liver esterase,PLE),属于丝氨酸水解酶,是由多种同工酶组成的酶家族,各同工酶之间基因序列高度同源。由于在催化底物水解时具有高度的立体选择性和高度酶活性,PLE成为有机化学合成领域水解酶的主角,而PLE作为药物代谢酶角色的研究很少。本课题组前期研究结果提示:PLE主要成员之一PLE1可催化水解某些磺胺类药物,PLE同工酶活性存在差异,不同品种猪PLE同工酶丰度存在差异。受PLE表现出的高度水解活性、以及人羧酸酯酶的表达水平呈显着年龄相关性且已成为临床用药依据事实的启发,同时基于本课题的前期研究,系统比较研究不同品种和不同年龄猪PLE同工酶丰度和总表达量差异,可望为猪临床合理用药提供必要的理论依据。本研究选取国家重点保护品种通城猪和外来优良瘦肉型品种大白猪,进行PLE的品种差异研究;参考研究人羧酸酯酶表达谱的年龄段,选取8日、1月、3月、成年(6~7月)四个年龄段猪,每个年龄段选取3头叁代以内无血缘关系的猪进行PLE表达谱研究。由于PLE同工酶之间的基因和氨基酸序列高度同源,导致RT-q PCR和WB无法区分各自的m RNA和蛋白质,因此,本研究先根据同工酶保守区的核苷酸序列和氨基酸序列,分别设计RT-q PCR通用引物和制备通用抗体,检测PLE同工酶的m RNA和蛋白质总表达水平,同时用通用底物p-NPA测定肝脏S9的水解活性;再通过对肝脏中PLE同工酶ORF的大量克隆、测序,获得各同工酶出现的频率。结合PLE同工酶的m RNA水平和各同工酶出现的频率,得到各PLE同工酶表达丰度的数据。主要研究内容和结果如下:对1月龄和成年的两个品种猪,首先用RT-q PCR检测了11种组织中(分别是肝脏、心脏、脾脏、肾脏、肺脏、小肠、皮肤、肌肉、脑、淋巴结及胸腺)PLE同工酶m RNA总表达水平,结果表明无论年龄大小,PLE在两种猪肝脏中表达量均为最高,其次为肾脏、小肠和皮肤。肝脏是机体内主要的代谢解毒器官,同时PLE在肝脏中表达量也最高,因此,后续研究集中在猪肝脏中PLE上。RT-q PCR检测四个年龄段的两个品种猪肝脏中PLE同工酶m RNA总表达量。结果表明在通城猪和大白猪肝脏中PLE m RNA总表达量最高的年龄段分别是3月龄和1月龄,但总体上m RNA表达水平与年龄呈正相关。两个品种猪相比,除3月龄时通城猪的PLE m RNA表达水平比大白猪高,其它叁个年龄段都是大白猪比通城猪的高。根据PLE同工酶靠近C末端的氨基酸保守序列设计合成两种多肽段,即PLE-C1-1:SKEAAKKPPKIKC和PLE-C2:CNTQAAKRLKGEE,两种多肽链等量混合后与KLH偶联,合成人工免疫原,免疫新西兰大耳兔,获得免疫血清,免疫血清用已偶联前述两种多肽的Sulfo Link凝胶柱进行免疫亲和层析纯化,得到效价高、特异性强的抗PLE通用抗体。等量混合同年龄段S9配制S9样品,WB检测S9样品中PLE总蛋白量,用Image J读取PLE和内参GAPDH的灰度值,计算两者的比值,得到四个年龄段通城猪和大白猪的比值依次是0.74,2.00,3.62,3.09和1.30,3.86,2.89,3.82,表明通城猪和大白猪PLE总蛋白表达量最高的年龄段分别是3月龄和1月龄,但总体上PLE蛋白表达水平与年龄呈正相关。两个品种猪相比,除3月龄时通城猪蛋白表达水平比大白猪高,其它的叁个年龄段都是大白猪比通城猪高。PLE蛋白表达趋势与m RNA一致。在含1μmol/L p-NPA的PBS(50m M,p H7.2)反应体系中,检测肝脏S9样品的催化水解活性,测得四个年龄段通城猪和大白猪的S9样品比活依次是:0.19U,0.59U,0.9U,1.29U和0.4U,1.05U,1.22U,1.69U。PLE酶活性表现出随年龄增长而增强的趋势,与PLE的m RNA、蛋白质的表达趋势大体一致。两个品种猪相比,四个年龄段大白猪的肝脏S9对p-NPA的水解活性都比通城猪强。通过以上试验获得了PLE同工酶的总表达量,但无法获得同工酶各自表达丰度的数据。克隆每头猪肝脏中PLE同工酶各亚型的完整ORF。每头猪随机挑取至少20个阳性克隆进行测序,共测序800多个阳性克隆。经统计发现共克隆到108种PLE亚型,除去5种已报道的亚型,发现103种新亚型,重复出现的PLE亚型有50多种,在2头猪以上出现的有39种,其中有19种在两个品种的猪中出现。将出现频率高的54种亚型,按25个变异位点的氨基酸的相似度分为7大类(A~G),每一大类再用阿拉伯数字区分。统计发现两个品种猪肝脏中PLE同工酶表达丰度存在明显差异,大白猪的四个年龄段都是PLE-A1表达丰度最高,其次是PLE-B9;相反地,通城猪在前叁个年龄段都是PLE-B9表达丰度最高,其次是PLE-A1(8日)或PLE-G5(1月和3月),而成年阶段是PLE-G3表达丰度最高。还发现PLE-G5和PLE-G3分别在两个品种猪的1月龄和成年期表达量大幅上升,提示PLE-G3和PLE-G5可能在两个品种猪的生长和成年阶段发挥重要作用。本研究发现通城猪和大白猪肝脏中PLE存在显着的品种差异,且其表达水平与年龄显着相关,这将导致相同兽药对不同年龄段和不同品种猪的疗效和毒副作用差异,因此,猪相关兽药的使用应根据猪的品种和年龄作出相应的调整。本研究获得的数据、以及利用本研究获得的大量PLE新亚进行水解兽药特性的后续研究结果,可为猪的临床合理用药提供必要的理论依据。(本文来源于《华中农业大学》期刊2015-06-01）
肖启玲,李朋辉,闫秉芳,杨路,王喜亮[7]（2015）在《猪肝羧酸酯酶1基因的克隆和在原核细胞中的功能性表达》一文中研究指出为获得有活性的猪肝羧酸酯酶1(PLE1)并研究其功能,利用RT-PCR与常规PCR方法,从大白猪肝组织中扩增PLE1基因的ORF。将PLE1的ORF序列连接到pET15b原核表达载体,在Origami TM2(DE3)中与pGro7质粒共诱导表达,纯化目的蛋白质并检测其酶活性。测序结果表明克隆到PLE1基因编码区全长1 686bp的片段,该片段编码562个氨基酸。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,PLE1融合蛋白质成功表达,在30℃的培养温度下,IPTG诱导6h后,PLE1重组蛋白质表达量最高,且大部分以可溶性形式存在。酶活性试验结果表明,PLE1融合蛋白质水解底物p-NPA的酶活力为1.24U。研究结果不仅为研究PLE1水解兽药特性提供高纯度的具有原有酶活性的重组蛋白质,也为PLE同工酶家族其他重要成员的活性功能研究提供理论依据和技术手段。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2015年04期）
闫慧平[8]（2014）在《猪肝羧酸酯酶1水解磺胺类药物的特性研究》一文中研究指出猪肝羧酸酯酶(Pig liver esterase, PLE),属于丝氨酸蛋白酶,是由多种同工酶组成的酶家族,其中猪肝羧酸酯酶1(PLE1)含量较高,是该家族的重要成员。PLE具有高度的水解活性和立体选择性,成为有机合成中主要的水解酶之一。但PLE作为药物代谢酶的角色,在猪的药物代谢和解毒中是否发挥作用尚未见报道。据其在有机化学合成中显示出的强大水解活性,以及人类CES显示出的重要药物代谢和解毒作用,推测PLE可能在猪用药物代谢中发挥不可忽视的作用,并由此影响药物的疗效和毒副作用,因此,本课题拟研究PLE1是否水解临床兽药、水解特点及机制,为猪临床合理用药提供必要的理论依据,具有重要的理论和实践意义。本课题在功能性表达PLE1的基础上,首先通过PLE1的体外水解抑制试验,快速检测了83种临床上常用的各种类型兽药对PLE1水解p-NPA的抑制作用,以筛选获得可能被PLE1水解的兽药种类；测定了兽药对PLE1的抑制常数,以确定抑制类型,进一步预测药物被PLE1水解的可能性；建立高效液相色谱(HPLC)及液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)等仪器分析方法,定量检测PLE1对兽药的水解,确定兽药是否被PLE1水解,分析PLE1对兽药的米氏常数与药物对PLE1的抑制常数的相关性,以佐证结果的可信度；最后,跟据人的CES晶体结构,建立PLE1同源模型,将兽药分子与之对接,阐明PLE1催化水解兽药的机理。具体研究内容和结果如下：1.药物抑制PLE1水解p-NPA的情况测定了83种兽医临床常用药物(化学合成抗菌药、抗生素、抗真菌药物、抗寄生虫药物、解热镇痛抗炎药、局麻药物)对PLE1水解p-NPA的抑制作用,结果只发现抗生素和化学合成抗菌药中的某些药物具有不同程度的抑制作用,如属于抗生素的泰乐菌素显着抑制PLE1的水解活性(0.01<P<0.05)；化学合成抗菌药中的磺胺类药物酞磺噻唑(PST)与磺胺异恶唑(SIZ)极显着抑制PLE1的水解活性(P<0.01),磺胺氯哒嗪(SCP)显着抑制PLE1的水解活性(0.01<P<0.05)。2. HPLC测定PLE1对泰乐菌素的水解建立泰乐菌素的HPLC定量方法,测定经PLE1水解前后泰乐菌素浓度的变化。结果显示泰乐菌素并未被PLE1所水解,说明仅凭对PLE1的水解产生抑制作用的结果不能预测兽药是否是PLE1的适宜底物,结合抑制作用类型的确定可望提供进一步的参考。3.磺胺类药物对PLE1抑制类型的确定以p-NPA为底物,测定并计算了24种磺胺类药物对PLE1水解的抑制常数,发现不同的磺胺类药物对PLE1的抑制常数不同,但各磺胺类药物的Alpha值均大于1,显示磺胺类药物抑制PLE1水解的类型均为竞争性抑制,即这24种磺胺类药物和通用底物p-NPA与PLE1结合的位点相同,提示磺胺类药物很有可能被PLE1催化水解。查询PubChem Compound网站获取24种磺胺类药物的分配系数XlogP值,将XlogP值与log Ki值进行相关性分析,发现两者呈现出一定的相关性,即在一定范围内(XlogP值为0.1-1.5),随着XlogP值的不断增大,log Ki值出现先降后升的趋势,并在XlogP=1.0时,达到最低值,即抑制程度最大。说明磺胺类药物对PLE1的抑制与其结构(分配系数)有关。4. LC-MS/MS测定PLE1对磺胺类的降解作用建立了检测磺胺类药物的LC-MS/MS方法,采用乙腈与0.1%的甲酸水作为流动相,通过梯度洗脱使药物得到良好的分离,使用全扫描方式对药物进行定量定性分析。大部分磺胺类药物在1-32ppb范围内线性关系良好(r_>0.999)。测定了PLE1对不同浓度下的24种磺胺类药物的降解速度,计算了PLE1对24种磺胺类药物的米氏常数Km与催化降解的最大反应速率Vmax。结果表明,绝大多数磺胺类药物浓度在PLE1作用下有明显降低,说明PLE1对绝大多数磺胺类药物有明显的催化降解作用。对磺胺类药物的log Km值与log Ki值进行相关性分析,发现log Km值与log Ki值显着正相关(0.01<P<0.05),说明不同磺胺类药物与PLE1的亲和性越大,其对PLE1催化水解通用底物的抑制越明显,反之亦然。5.同源模建及分子对接构建了PLE1叁聚体及单体的3D结构模型,并与不同的磺胺类药物进行分子对接。结果显示,磺胺类药物与PLE1活性中心的结合方式与其通用底物p-NPA类似,磺胺类药物分子中的硫原子可能扮演了p-NPA中的羰基碳原子的角色。对PLE1有抑制作用的磺胺类药物与酶的结合能量普遍低于酶与通用底物(p-NPA)的结合能量,说明磺胺类药物与酶的亲和性普遍高于通用底物p-NPA与酶的亲和性,提示磺胺类药物是PLE1的合适底物,可被PLE1水解。(本文来源于《华中农业大学》期刊2014-06-01）
黄寿锟,关怡新,于洪巍,姚善泾[9]（2014）在《巯基微球协助重组γ-猪肝酯酶包涵体体外复性》一文中研究指出猪肝酯酶(PLE)是一种广泛应用于光学活性醇或羧酸合成的水解酶。大肠杆菌异体表达为大规模生产猪肝酯酶γ同工酶提供了可能,但表达过程中会形成包涵体,需经体外重折迭恢复其生物活性。针对γ-PLE含二硫键的特点,制备了叁种不同巯基负载量的功能聚合物微球SG-DTT(6.1μmol·g-1、25.2μmol·g-1和143.4μmol·g-1),将其应用于协助γ-PLE包涵体体外复性,并考察了微球浓度、pH、温度和尿素浓度对复性效果的影响。复性过程需要适宜的氧化还原环境,较高的巯基负载量微球协助复性效果较好,当γ-PLE浓度为1000μg·ml-1时,微球协助复性后γ-PLE的活性可达到1885 U·L-1,比对照组提高了72%。研究表明,巯基微球能有效促进二硫键的正确配对,阻止蛋白分子间的聚集,是一种新型高效的复性添加剂。(本文来源于《化工学报》期刊2014年01期）
王振豹[10]（2011）在《成年猪与仔猪肝脏γ猪肝羧酸酯酶表达差异研究》一文中研究指出肝脏是动物(或人)机体清除药物的主要器官,它可表达多种药物代谢酶(Drug-metabolizing enzyme, DMEs),γ猪肝羧酸酯酶(γpig liver carboxlesterase,γ-PLE, EC 3.1.1.1)是肝脏最重要最常见的药物代谢酶之一,属于Ⅰ相药物代谢酶。具有促使各种包含酯类、胺类和硫酯药物生物转化的功能,以及激活前药物和代谢的作用。除此以外,还参与多种环境毒物、致癌物质的解毒和代谢；参与脂质运输和代谢以及参与信号跨膜转导及保持生物膜的完整性。药物在临床上的联合应用是目前最为常见的用药方式,而不论两种或多种药物同时或连续应用,药物治疗效果变化的可能性是存在的；临床用药时,药物在不同日龄、不同品种猪之间的使用剂量不同；而这些作用的产生大多数是由药物代谢酶介导的。因此,对于γ-PLE表达谱的研究将为这些临床用药中存在的问题提供理论依据。本研究运用Western blot、Real-time PCR技术,对γ-PLE在不同日龄猪肝脏中的表达,进行了γ-PLE表达谱的研究,取得如下研究结果：1.1,猪肝羧酸酯酶基因的克隆及重组表达质粒的构建提取猪肝脏总RNA, RT-PCR获全长cDNA, PCR扩增获得γ-PLE基因片段,大小为1686 bp,酶切回收后连接到pET-32a(+)载体,对重组质粒进行PCR鉴定、酶切分析及测序分析,与GenBank序列号为X63323的γ-PLE基因片段序列进行BLAST比对,同源性达99%,成功构建pET32a-yPLE重组表达质粒。2.γ猪肝羧酸酯酶的原核表达及表达蛋白的纯化和活性检测携带γ-PLE基因的pET32a-yPLE表达质粒在E. coli BL21 (DE3)中进行表达,并对表达条件进行优化,结果显示pET32a-yPLE在37℃条件下诱导5h后表达量最佳,表达物分子量约为75 KDa。Western blot证实重组蛋白具有较好的免疫反应活性。经包涵体复性纯化,获得了高纯度的表达蛋白,浓度为2.01mg/mL,为制备兔抗γ-PLE多抗奠定了基础；表达产物可进行酶活性染色,说明复性后的表达产物具有酶活性。3.兔抗γ-PLE多抗的制备与纯化用纯化的表达蛋白pET32a-yPLE免疫健康家兔,经多次免疫,制备了兔抗PET32a-yPLE的高免血清。将所得高免血清采用饱和硫酸铵粗提和G-200过柱纯化,最后得到了纯化的兔抗pET32a-yPLE多克隆抗体。Western blot证实此多抗具有较好的免疫反应活性,为γ-PLE的表达谱的研究奠定了基础。4.γ-PLE表达谱的研究提取仔猪、成年猪肝脏蛋白,以β-actin蛋白为内参蛋白,利用制备的多抗做Western blot,实验结果表明γ-PLE在成年猪表达量较高；提取仔猪和成年猪肝脏总RNA,反转录cDNA,以GAPDH基因为内参基因,利用荧光定量PCR技术,实验结果表明γ-PLE在成年猪表达量是仔猪的31倍,差异极显着。分别从蛋白水平和mRNA水平进行了γ-PLE表达谱的研究。(本文来源于《华中农业大学》期刊2011-06-01）
猪肝酯酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】探讨猪肝酯酶(PLE)对农药的敏感性,为农药残留快速检测提供新的敏感酶源。【方法】以乙酸-1-萘酯为底物,考察PLE酶促反应的最适温度、p H及几种农药的最佳作用时间,同时比较了PLE对几种特异性酶抑制剂的敏感性;以电鳗乙酰胆碱酯酶(ACh E-ee)、马血清丁酰胆碱酯酶(BCh E-hs)为对照酶源,采用酶抑制法,绘制5种有机磷农药(敌百虫、敌敌畏、甲胺磷、辛硫磷、毒死蜱)和5种氨甲酸酯类农药(灭多威、克百威、丁硫克百威、残杀威、涕灭威)的抑制曲线,并计算相关半抑制率(IC50),比较各种酶的农药敏感性。【结果】猪肝酯酶酶活测定方法的最佳温度、时间、p H分别为35℃、15 min、7.0;农药最适作用时间为15min;猪肝酯酶对双(4-硝基苯基)磷酸酯敏感性最高,毒扁豆碱次之,盐酸多奈哌齐最低;与胆碱酯酶相比,猪肝酯酶对供试的多数有机磷农药和氨甲酸酯类农药的IC50更低,,敏感性更好。【结论】猪肝酯酶具有良好的农药敏感性,可以作为酶抑制法农药残留快速检测的候选酶源。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
猪肝酯酶论文参考文献
[1].彭开敏,叶泰,曹慧,袁敏,于劲松.猪肝酯酶杂化“纳米花”的制备及其对菊酯类农药的水解性能研究[J].分析测试学报.2018
[2].杨莉,王羚佳,开拓,黄玉坤,黄瑛.猪肝酯酶农药敏感性及其与胆碱酯酶的对比研究[J].西南农业学报.2018
[3].刘希妍.猪肝羧酸酯酶调控机体炎症水平机制的研究[D].华中农业大学.2018
[4].陆天怡,赵梨.固定化猪肝酯酶法制备S-4-甲基哌啶酸的研究[J].广东化工.2017
[5].杨路.猪肝羧酸酯酶主要亚型功能性表达及其酶活性比较研究[D].华中农业大学.2016
[6].肖启玲.通城猪与大白猪猪肝羧酸酯酶表达谱与品种差异研究[D].华中农业大学.2015
[7].肖启玲,李朋辉,闫秉芳,杨路,王喜亮.猪肝羧酸酯酶1基因的克隆和在原核细胞中的功能性表达[J].畜牧兽医学报.2015
[8].闫慧平.猪肝羧酸酯酶1水解磺胺类药物的特性研究[D].华中农业大学.2014
[9].黄寿锟,关怡新,于洪巍,姚善泾.巯基微球协助重组γ-猪肝酯酶包涵体体外复性[J].化工学报.2014
[10].王振豹.成年猪与仔猪肝脏γ猪肝羧酸酯酶表达差异研究[D].华中农业大学.2011
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