水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E在昆虫细胞中的表达、鉴定及免疫原性分析

论文摘要

目的:利用昆虫-杆状表达系统建立表达和纯化分泌形式的水痘-带状疱疹病毒（varicellazoster virus,VZV）糖蛋白gE的方法,并鉴定其理化性质及免疫原性。方法:利用Gibson assembly同源重组试剂盒快速构建重组质粒pFastbac-VZV gE。在sf9昆虫细胞中鉴定序列优化前后表达量的差异,并在High FiveTM细胞中大量表达。通过Ni-NTA亲和层析方法得到高纯度gE蛋白,之后通过酶联免疫吸附试验等验证了其理化性质,并进行小鼠免疫分析其免疫原性。结果:构建了pFastbac-VZV g E1/2重组质粒,经过PCR及双酶切鉴定后均为阳性克隆。使用BAC/PAC试剂盒提取Bacmid转染sf9细胞制备杆状病毒,经Western blot检测,sf9细胞开始表达gE蛋白且随着病毒代次升高g E蛋白表达量增加。序列优化后表达量明显增加,但是大部分以胞内形式存在。通过Ni-NTA一步亲和层析获得纯度较高的gE蛋白,并与VZV单抗9C8具有较好的反应性。通过免疫小鼠产生高滴度抗体,且免疫荧光结果显示其血清可以与天然病毒上的gE抗原结合。结论:成功获得了杆状表达系统表达的gE蛋白并且纯化和鉴定了蛋白质的性质及免疫原性,为进一步研发具有自主产权的VZV亚单位疫苗研究奠定了基础。

论文目录

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 齐家龙,高瑞雨,靳输梅,高福兰,杨旭,马雁冰,刘存宝

关键词: 水痘带状疱疹病毒,糖蛋白,昆虫表达系统,免疫原性

来源: 中国生物工程杂志 2019年08期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所,云南省药物研究所云南白药集团创新研发中心云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室

基金: 中国医学科学院医学与健康科技创新工程(2017-12M-3-022)资助项目

分类号: R392

DOI: 10.13523/j.cb.20190803

页码: 17-24

总页数: 8

文件大小: 502K

下载量: 241

相关论文文献

• [1].免疫原性细胞死亡相关分子的表达机制及对免疫的调节[J]. 现代肿瘤医学 2020(02)
• [2].医疗器械免疫原性评价与试验策略[J]. 中国医疗器械杂志 2012(01)
• [3].冻干水痘减毒活疫苗在健康儿童中两剂免疫后的免疫原性及安全性[J]. 中国生物制品学杂志 2018(05)
• [4].国产单价腮腺炎减毒活疫苗加强免疫的免疫原性和安全性观察[J]. 中国疫苗和免疫 2018(05)
• [5].纳米金颗粒负载的免疫原性多肽体外T细胞筛选[J]. 中国细胞生物学学报 2016(08)
• [6].对动物源性医疗器械免疫原性评价的思考[J]. 生物技术通讯 2016(06)
• [7].冷冻预处理温度对胎兔许旺细胞免疫原性的影响[J]. 骨科 2011(01)
• [8].红斑丹毒丝菌免疫原性蛋白的鉴定及其编码基因的克隆和测序[J]. 微生物学报 2016(02)
• [9].B族链球菌表面免疫原性蛋白的黏膜免疫效果[J]. 中国生物制品学杂志 2009(06)
• [10].发热伴血小板减少综合征疫苗株免疫原性比较[J]. 中国生物制品学杂志 2019(11)
• [11].BCG接种策略的调整需考虑对儿童健康的影响[J]. 微生物学免疫学进展 2017(02)
• [12].罗非鱼无乳链球菌弱毒株与其母源株部分生物学特性及免疫原性比较研究[J]. 西南农业学报 2015(05)
• [13].淋病奈瑟菌表面蛋白A克隆、表达和免疫原性鉴定[J]. 中国现代医生 2012(03)
• [14].抗体药物的药学监护[J]. 中国医院药学杂志 2020(14)
• [15].肿瘤细胞免疫原性死亡研究进展[J]. 南京医科大学学报(自然科学版) 2020(07)
• [16].不同冻存液及降温方式对心脏瓣膜组织学及免疫原性的影响[J]. 山东大学学报(医学版) 2016(08)
• [17].肺炎球菌结合疫苗与其他儿童常规免疫疫苗同时接种对免疫原性和安全性影响[J]. 中国公共卫生 2018(11)
• [18].多柔比星诱导人前列腺癌细胞免疫原性死亡[J]. 生命科学研究 2015(05)
• [19].冻干甲肝减毒活疫苗免疫原性及持久性分析[J]. 中国公共卫生 2008(11)
• [20].国产无硫柳汞三价流感病毒裂解疫苗上市后免疫原性和安全性观察[J]. 中国疫苗和免疫 2019(02)
• [21].副猪嗜血杆菌黏附基因的表达和免疫原性鉴定[J]. 中国预防兽医学报 2010(05)
• [22].截去跨膜区对羊痘病毒P32基因免疫原性的影响[J]. 中兽医医药杂志 2009(04)
• [23].脑膜炎球菌多糖疫苗纳入国家免疫规划的可行性及免疫程序的确定依据[J]. 中国疫苗和免疫 2008(02)
• [24].寨卡病毒包膜蛋白重组人腺病毒5型载体的构建与免疫原性测定[J]. 中国感染控制杂志 2019(06)
• [25].旋毛虫HSP70基因的原核表达及其免疫原性[J]. 中国兽医科学 2012(03)
• [26].弗氏佐剂乳化抗原不同注射体积与小鼠鼓包结痂形成及免疫原性的关系[J]. 畜牧兽医科学(电子版) 2020(11)
• [27].树鼩白细胞介素6的原核表达、纯化及免疫原性鉴定[J]. 生物技术通讯 2017(06)
• [28].两种新城疫灭活疫苗免疫原性比较[J]. 动物医学进展 2018(03)
• [29].E.tenella河北株重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗免疫原性及抗氧化能力[J]. 中国兽医学报 2018(05)
• [30].低浓度吉西他滨对肾癌786-0细胞免疫原性相关分子表达的影响[J]. 实用医学杂志 2015(03)

标签：水痘带状疱疹病毒论文;  糖蛋白论文;  昆虫表达系统论文;  免疫原性论文;