拟南芥Ib bHLH家族基因CRISPR/Cas9敲除载体的构建

论文摘要

[目的]全氟辛酸（PFOA）处理能显著诱导拟南芥Ib bHLH（Ib basic helix-loop-helix）家族4个转录因子bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的转录水平。为了进一步分析这4个基因在响应PFOA中的潜在作用,利用CRISPR/Cas9技术构建了它们的共敲除载体。[方法]以野生型拟南芥基因中的外显子为模板,设计引物,通过两步PCR扩增法将靶向基因连接到CRISPR/Cas9载体上;将构建成功的重组质粒转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中,挑取阳性菌落,PCR鉴定正确后,将其质粒转入农杆菌GV3101感受态细胞中,再次挑取阳性菌落进行PCR鉴定正确后,提取质粒进行表达盒测序。[结果]通过两步PCR扩增法,成功将4个靶点表达盒转入到CRISPR/Cas9载体中,构建了bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的双元CRISPR/Cas9敲除载体。[结论]成功构建的Ib BHLH家族CRISPR/Cas9敲除载体,为后续拟南芥Ib BHLH家族四突突变体材料的获得提供了可用性载体。

论文目录

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 樊玲玲,马铭悦,韩毅

关键词: 拟南芥,家族基因,载体构建

来源: 安徽农业科学 2019年19期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 合肥工业大学食品与生物工程学院

基金: 国家自然科学基金项目(31300225)

分类号: Q943.2

页码: 118-120+151

总页数: 4

文件大小: 3602K

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标签：拟南芥论文;  家族基因论文;  载体构建论文;