论文摘要
目的:构建蛋白酶体亚基α3（proteasome subunit alpha type 3,PSMA3）基因腺病毒重组载体,并观测腺病毒介导PSMA3基因过表达对肝癌SMMC7721细胞增殖、周期、凋亡及其荷瘤生长的影响。方法:RT-PCR法扩增PSMA3基因全长CDs序列后,克隆入pTG19-T载体,再亚克隆入pAdTrack-CMV腺病毒穿梭载体中,构建重组pAdTrack/PSMA3腺病毒载体,随后与骨架质粒pAdEasy-1同源重组形成p Ad/PSMA3重组腺病毒,经包装及滴度测定,获高感染力的pAd/PSMA3病毒。用pAd/PSMA3病毒感染人肝癌SMMC7721细胞,荧光显微镜观测被感染的SMMC7721细胞的绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的变化情况。Cell counting kit-8（CCK-8）法检测pAd/PSMA3病毒对SMMC7721细胞增殖的影响。Real-time PCR和Western blot分别检测被感染的SMMC7721细胞的PSMA3基因、增殖细胞核抗原基因（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、Caspase-3促凋亡基因及其编码蛋白的表达情况。流式细胞仪（FCM）检测被感染的SMMC7721的周期、凋亡变化。将经pAd/PSMA3病毒感染的SMMC7721细胞移植裸鼠皮下以生成荷瘤,逐日观察荷瘤的生长情况。所有实验以空病毒感染及未感染的细胞做对照。结果:克隆到768 bp的PSMA3基因,并构建了其具高感染力的pAd/PSMA3重组病毒。CCK-8法结果表明,过表达PSMA3基因的SMMC7721细胞,其增殖明显减慢（P<0.05）。Real-time PCR、Western blot检测显示,pAd/PSMA3重组病毒可介导SMMC7721细胞过表达PSMA3基因,上调其Caspase-3基因及其编码蛋白的表达,并下调其PCNA基因及其蛋白的表达（P<0.05）。FCM检测证实,过表达PSMA3基因的细胞可被阻滞于G1期（细胞周期）,并可促使其凋亡,其凋亡率差异有统计学意义（P<0.05）。动物实验证实,p Ad/PSMA3病毒可明显抑制裸鼠荷瘤的生长（P<0.01）。结论:重组病毒pAd/PSMA3可将SMMC7721细胞阻滞于G1期（细胞周期）,抑制其增殖,促使其凋亡,并可抑制其裸鼠荷瘤的生长,这些可能和下调其增殖相关PCNA蛋白,上调其凋亡相关caspase-3蛋白的表达密切相关。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 南映瑜,项颖,龚奕,肖春燕,杨涛,张文军,黄德鸿,李启英,童永红
关键词: 蛋白酶体亚基,细胞,增殖,凋亡,荷瘤
来源: 重庆医科大学学报 2019年12期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技
专业: 肿瘤学
单位: 重庆大学附属肿瘤医院/重庆市肿瘤研究所/重庆市肿瘤医院肿瘤转移与个体化诊治转化研究重庆市重点实验室
基金: 重庆市科委应用开发计划资助项目(编号:CSTC2014yykfA110031),中国医师协会研究资助项目(编号:ZGYSXH20120701)
分类号: R735.7
DOI: 10.13406/j.cnki.cyxb.002108
页码: 1582-1588
总页数: 7
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相关论文文献
- [1].人蛋白酶体α亚基3型(PSMA3)对促细胞凋亡蛋白分子Bim的影响[J]. 长江大学学报(自科版) 2013(15)