导读:本文包含了噬菌体展示抗体库论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:抗体,噬菌体,相思子,免疫,电化学,百草,肺癌。
噬菌体展示抗体库论文文献综述
张雨超,丁龙飞,陈健,张晓燕,徐建青[1]（2019）在《全人源单链抗体库噬菌体展示技术的建立》一文中研究指出目的建立全人源单链抗体(single-chain antibody fragment,scFv)库的噬菌体展示技术。方法采集100名健康老年志愿者的外周血,5 mL/人,混合所有全血并分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),抽提RNA,反转录合成cDNA,以其为模板,IgG类抗体基因为引物,PCR扩增获得重链可变区片段(V_H)和轻链可变区片段(V_L),然后以V_H和V_L为模板,经重迭PCR获得scFv,经sfiⅠ酶切,插入pComb3xss载体,电转后获得一定容量的抗体库;加入辅助噬菌体VCSM13过夜培养,上清液经PEG-NaCl沉淀,无菌PBS重悬噬菌体沉淀,即完成噬菌体抗体库的构建;采用Phage ELISA法进行噬菌体单克隆抗体的特异性鉴定。结果成功构建了库容为2. 6×10~9的噬菌体抗体库;随机挑选的100个噬菌体单克隆中共筛选到2个疑似H1N1株HA抗原的噬菌体抗体。结论成功构建了噬菌体抗体库的技术平台,可用于各类功能抗体的筛选。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年01期）
杨成万[2]（2017）在《新一代噬菌体展示抗体库助力精准医疗》一文中研究指出虽然成都盛世君联生物技术有限公司并不广为人知，但翻开其宣传册，却着实令人刮目相看：在12位创业团队成员中，有3位博士毕业于加拿大萨斯喀彻温大学；另有1位博士来自于清华大学施一公团队。公司成立仅一年多时间，就成功研发了具有自主知识产权的新一代“噬菌体展示抗(本文来源于《金融投资报》期刊2017-08-11）
刘婕,陈俊亨,徐天殊,王丽萍,赵琦[3]（2014）在《大容量人源Fab噬菌体展示抗体库的构建及抗CD276抗体筛选》一文中研究指出目的构建大容量人源Fab噬菌体库,筛选并鉴定抗CD276的特异性抗体。方法通过采集10位健康成人的外周血淋巴细胞,提取总RNA,利用RT-PCR扩增人Fab抗体基因片段,插入噬菌体载体pCANTAB5H中,构建人源Fab噬菌体抗体库。通过固相化的抗原对抗体库进行3轮筛选后,随机挑取96个单克隆进行phage-ELISA鉴定,筛选出与抗原具有较强结合性的噬菌体克隆。结果成功构建库容为5×1010的噬菌体抗体库,从中筛选到11株阳性克隆,对其进行测序鉴定,表明该11株克隆的序列均一致,ELISA证实其对抗原CD276具有较强的结合性。结论构建了大容量人源Fab抗体库,从中获得具有抗CD276的人源Fab抗体片段,为进一步的研究和应用提供实验基础。(本文来源于《中国医药生物技术》期刊2014年04期）
赵翠娇[4]（2014）在《T7噬菌体展示人源抗体库筛选雌二醇ScFv抗体》一文中研究指出背景：雌二醇（Estradiol，E2）是一种甾体类雌激素，由于可以促进动物生长并且可以提高畜禽瘦肉比，曾经广泛应用于畜禽养殖业，残留于动物组织内的雌二醇通过食物链进入人体，通过干扰内分泌系统的功能危害人体健康。因此，发展简便、快速、灵敏的检测雌二醇残留的方法非常有必要。与其他检测技术相比，免疫分析方法较适合现场检测，但是免疫分析方法的建立首先是制备高特异性抗体，制备雌二醇的高特异性抗体对于其免疫方法的建立尤为重要。目的：制备T7噬菌体尾蛋白P11并制备其多克隆抗体，筛选其单克隆抗体，并将所制备的抗体应用于噬菌体展示抗体库的筛选，从噬菌体展示天然人源抗体库中筛选单链抗体（single chain antibody），并实现其在大肠杆菌体内的表达，并对筛选得到的单链抗体进行性质鉴定。方法：1.以T7select10-3b为模板扩增P11蛋白基因片段，鉴定其序列的正确性后进行原核表达，大量纯化P11蛋白；免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。2.根据P11蛋白的氨基酸序列设计3条抗原表面多肽，免疫Balb/c小鼠，当其效价不再升高时进行细胞融合，筛选P11蛋白的单克隆抗体。3.采用固相筛选法和差减筛选法从T7噬菌体展示天然人源抗体库中筛选针对雌二醇的特异性抗体，而后采用噬菌体ELISA筛选针对雌二醇的特异性重组噬菌体，PCR扩增结合活性较好的重组噬菌体基因序列，构建表达载体pTIG-TRX-ScFv，实现单链抗体的表达及纯化。结果：1.以T7select10-3b为模板，成功扩增出P11蛋白基因片段，测序结果与NCBI数据库相符，成功构建表达载体pTIG-TRX-P11，于大肠杆菌BL21（DE3）进行表达，SDS-PAGE鉴定在约25KDa处有加强带，与预期大小相符，且表达蛋白存在于菌体破碎后上清。2.利用亲和层析柱纯化P11蛋白，SDS-PAGE鉴定P11蛋白得到了明显浓缩，大量制备的纯度较高的P11蛋白，经BCA蛋白定量后用于免疫新西兰大白兔，六次免疫后采血制得抗P11蛋白抗血清，辛酸-硫酸铵沉淀法纯化多克隆抗体，SDS-PAGE鉴定纯化后多克隆抗体纯度较好，BCA蛋白定量抗体浓度为6.3mg/mL，抗体效价为1:32,000。3.经HPLC和ESI-MS鉴定合成的叁条多肽正确，采用多肽-BSA免疫Balb/c小鼠，其效价达到1:32,000时，进行细胞融合和单克隆抗体的筛选，最后，筛选得到特异识别P11-3表位多肽的的P11蛋白单克隆抗体，并制备其腹水型单克隆抗体，采用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后经SDS-PAGE鉴定，结果显示纯化效果较好，BCA蛋白定量抗体浓度为3mg/mL，抗体效价为1:64,000。4.采用固相筛选和差减筛选的方法对T7噬菌体人源抗体库进行了四轮筛选，采用噬菌体ELISA测定重组噬菌体对雌二醇的结合活性，结果显示：5株重组噬菌体的结合活性较好。5.扩增完成5株结合活性较好的重组噬菌体的基因序列，并成功构建表达载体pTIG-TRX-ScFv，SDS-PAGE鉴定在约25KDa处出现表达加强带，经Western blot鉴定，ScFv得到了表达。6.将诱导表达破碎后上清经ELISA和竞争ELISA鉴定其对雌二醇的具有特异性结合活性且具有竞争活性，其中叁株较好，我们采用亲和层析柱纯化此叁个单链抗体，获得了纯度较高的纯化制品。结论：1.完善了噬菌体展示抗体库平台：原核表达P11蛋白成功，并且制备了其多克隆抗体，经Western blot鉴定，多克隆抗体可以识别重组P11蛋白和T7噬菌体。筛选得到了可以特异性识别P11-2多肽表位的P11蛋白的单克隆抗体。这些抗体应用到了噬菌体展示抗体的筛选。2.从T7噬菌体展示天然人源抗体库中筛选得到了5株特异性识别雌二醇的阳性重组噬菌体，经间接ELISA和竞争ELISA对表达的单链抗体进行鉴定，结果显示：对雌二醇具有特异性结合活性且具有竞争活性。(本文来源于《郑州大学》期刊2014-06-01）
刘小爽[5]（2014）在《抗猪CD46禽源单链噬菌体展示抗体库的构建及特异性抗体的筛选》一文中研究指出噬菌体展示技术是单克隆抗体筛选的关键技术之一，在抗体筛选领域中的应用占有越来越大的比例。CD46又称辅膜蛋白，是广泛存在于有核细胞表面的一种受体，在哺乳动物中相对保守，并在先天免疫的补体的激活和调节的经典途径和替代途径中起着关键作用，除此之外CD46还是一些病毒和细菌的细胞受体。本研究充分利用哺乳动物保守蛋白在禽源免疫系统中具有更高的免疫原性，结合禽源抗体可变区基因更易克隆扩增的优势，采用噬菌体展示技术构建抗猪源CD46的单链抗体库，并从中筛选出特异性抗CD46的scFv，为高亲和力、高特异性禽源单克隆抗体的制备提供技术支撑。本研究采用DNA和蛋白复合免疫的方式免疫SPF公鸡，先用真核表达载体pcDNA-CD46和pCAGG-CD46免疫，然后用原核表达的CD46-His融合蛋白为免疫原。监测血清效价，经4次免疫，分离脾脏B淋巴细胞，提取总RNA后反转录成cDNA，根据文献报道的引物分别扩增VH和VL基因，经重迭PCR大量扩增scFv。选取Sfi I和Not I为酶切位点，酶切消化scFv和pCANTAB5E后，用T4DNA连接酶，将scFv基因连接入pCANTAB5E噬菌粒载体，并将重组载体化学转化入大肠杆菌TG1，采用梯度稀释的方式计算得到的原始抗体库库容为6.0×105。随机挑取10个单克隆，PCR显示阳性率为100%，BstO I酶切其中的8个克隆，其中2个克隆的结果相似，判定库的多样性较丰富。用抗原包被（包被浓度依次为10、5、2.5和2μg/mL）的免疫管进行了4轮固相淘选，使特异性抗体得到了有效富集。库容分别为3.9×106、1.81×107、5.84×108和4.11×109。经phage ELISA判定每轮淘选结束时抗体库与CD46的结合性逐渐升高，说明特异性的噬菌体得到了有效富集。从第4轮淘选结果中随机挑取单克隆，经PCR分析得到23株阳性克隆。应用phage ELISA检测噬菌体融合scFv与CD46的反应性，最终得到叁株反应性良好的scFv-phage克隆。本研究以CD46为免疫原，构建了鸡源scFv噬菌体展示抗体库，并筛选到了3株具有抗CD46活性的scFv，且与CD46蛋白的反应性良好。为以禽源scFv抗体为基础构建的CD46检测试剂盒的建立和与CD46相关的免疫学和病理学研究奠定了基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2014-05-01）
刘冰,童朝阳,刘威,郝兰群,穆晞惠[6]（2013）在《基于噬菌体展示抗体的电化学发光免疫传感器检测相思子毒素研究》一文中研究指出以多克隆抗体包被磁性微球制备捕获探针,以表面负载大量叁联吡啶钌标记物的噬菌体展示抗体为发光探针有效放大信号,成功建立了相思子毒素电化学发光免疫传感检测方法。利用本方法检测相思子毒素,浓度在0.005～100μg/L范围内与电化学发光强度呈良好的对数线性关系,拟合方程为lgY=0.701lgX+1.767(R=0.9964,N=7,p<0.0001),检测限达0.005μg/L(S/N=3)。与采用单克隆抗体制备标记探针相比,检测灵敏度提高20倍,可用于相思子毒素的痕量检测。(本文来源于《分析化学》期刊2013年09期）
任立成,李冬娜[7]（2012）在《噬菌体抗体库展示技术及其研究进展》一文中研究指出1噬菌体展示技术的基本原理噬菌体展示技术(phage display technology)是一项通过基因重组的方法,将目的蛋白或部分片段基因以融合的方式重组到噬菌体的外壳蛋白的基因上,通过噬菌体的包装将目的蛋白展示在噬菌体的表面。这项技术在蛋白质组学、医药工程、临床等方面具有重要的应用价值。该技术是以改造的噬菌体(本文来源于《海南医学院学报》期刊2012年12期）
古雅珏,杨晓仪,张晓坤[8]（2012）在《人源性肺癌噬菌体展示抗体库的构建》一文中研究指出目的应用噬菌体展示技术,构建天然人源抗肺癌噬菌体抗体组合文库,筛选能与肺癌细胞特异结合的抗体。方法用RNA提取试剂盒提取淋巴细胞RNA,以Oligo DT为引物反转录合成cDNA,以半套式PCR扩增轻链和重链可变区抗体基因并重组到原核表达载体中,通过噬菌体外壳蛋白形成融合蛋白,形成噬菌体抗体组合文库。结果电泳显示扩增的mRNA有清晰的28s、18s和5.8s的条带,600~700bp片段者为重组克隆;噬菌体展示抗体库大小在108~107之间;优化电转化条件,最终得到库容为1.2×108cfu,双链重组率为41%的抗体库。结论成功构建人源抗肺癌噬菌体展示文库,为下一步筛选具有肺癌细胞特异亲和力的人源性单克隆抗体奠定了基础。(本文来源于《中国医药指南》期刊2012年19期）
陈卉爽[9]（2012）在《T7噬菌体展示人源抗体库筛选百草枯抗体》一文中研究指出百草枯(1,1’-二甲基-4,4'-二氯二吡啶,PQ)是一种在农业上应用广泛的非选择性除草剂,它的大量使用给世界农业带来贡献,同时它的高致死率也引起了全球的关注。全世界每年都有多起百草枯中毒事件的报道,随着报道的增多,医生和学者们也开始对它关注起来。百草枯中毒的致死率为90%以上,导致中毒的原因有很多,如皮肤接触,意外吸入或吞食以及自主吞服,其中自杀性吞服百草枯是主要原因。由于百草枯毒性剧烈,并发症较多且往往伴随有不可逆的后遗症,而且临床上目前尚无特效解毒药,因此具有特异性以及高亲和力的百草枯抗体的研究很有必要。人源非免疫抗体由于不会产生或只会有很小的免疫反应而受到关注。噬菌体展示抗体库技术由于无需免疫动物,可直接从噬菌体抗体库中淘选出特异噬菌体抗体,可以得到按常规免疫方法难以获得的人源抗体,且所展示的抗体与其所对应的基因存在于同一个重组噬菌体内,获得抗体的同时也就获得了它的基因,便于用抗体工程大规模生产抗体。因此可作人源抗体库的理想载体。本研究的目的是制备特异性中和百草枯的单克隆抗体。实验部分主要包括全套人源抗体基因的克隆,抗体库的构建、动物免疫、抗体库的筛选、单克隆抗体的表达、纯化。研究内容主要有以下几个方面：将噬菌体的外壳蛋白10A在BLT5615中表达出来,纯化后免疫家兔获得用于T7噬菌体展示筛选的抗噬菌体外壳蛋白抗体,为T7噬菌体展示人源抗体库筛查抗百草枯抗体奠定基础。从健康志愿者外周血中分离淋巴细胞,用Trizol法提取总RNA,用M-MLV逆转录酶反转mRNA成cDNA后分别克隆人全套抗体重链可变区(VH)、轻链可变区(VL)基因,并利用重迭延伸PCR技术重组连接成抗体库构建所需要的VH-linker-VL单链抗体基因。经EcoRⅠ和HindⅢ酶切后与T7噬菌体载体相连,完成体外包装后,侵染宿主BLT5403扩增得到初级库。采用固相筛选与液相筛选交替进行的方式从人源抗体库中筛选抗百草枯抗体。固相筛选：用OVA/BSA偶联的百草枯作为抗原包被在固相支持物上,加入抗体库孵育一定时间,洗去未结合的噬菌体从而富集特异噬菌体。液相筛选：羧基化的百草枯小分子与氨基化的磁珠偶联,加入抗体库孵育一定时间,洗去未结合的噬菌体从而筛选特异性结合的噬菌体。第一轮和第叁轮用磁珠筛选,第二轮和第四轮分别用BSA偶联的百草及枯OVA偶联的百草枯包被固相载体筛选。经过4轮“吸附—洗脱—扩增”筛选过程,获得抗原特异性较强的百草枯scFv噬菌体抗体。扩增特异性较强的噬菌体抗体株中的目的片段,构建表达载体进行表达并纯化抗体,对可溶性抗体的结合和竞争活性进行验证。本实验制备了T7噬菌体衣壳蛋白多克隆抗体,为噬菌体展示筛选特异性抗体实验提供了基础。成功构建了库容较大,多样性好的T7Select单链抗体库,为筛选抗多种单链抗体奠定了基础。利用百草枯为抗原,直接从非免疫人源噬菌体抗体库中筛选噬菌体抗体克隆,表达之后得到1株具有较好抑制率的特异性抗体,由于非免疫人源噬菌体抗体库的库容非常大,而噬菌体本身对BSA以及OVA有一定的结合能力,不能排除与封闭液等的非特异性结合的可能性,进而增加了淘洗的难度和非特异性抗体的产生。因此,仍需完善和探索更好的实验方法。(本文来源于《华中农业大学》期刊2012-06-01）
范献军,宁保安,白家磊,彭媛,柳明[10]（2012）在《T7噬菌体展示阿特拉津抗体库的构建和筛选》一文中研究指出阿特拉津(atrazine)又称为莠去津,是曾经广泛应用的除草剂。近年来的研究表明,阿特拉津能干扰激素的调节功能,引起人和两栖动物的生殖缺陷,诱导肿瘤发生和体重减轻。在众多的检测方法中,简便灵敏的酶联免疫吸附分析法(ELISA)逐渐受到人们的重视。而针对小分子化合物的特异性抗体制备则是(本文来源于《第七次全国分析毒理学大会暨第四届分析毒理专业委员会第二次会议论文摘要集》期刊2012-04-27）
噬菌体展示抗体库论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
虽然成都盛世君联生物技术有限公司并不广为人知，但翻开其宣传册，却着实令人刮目相看：在12位创业团队成员中，有3位博士毕业于加拿大萨斯喀彻温大学；另有1位博士来自于清华大学施一公团队。公司成立仅一年多时间，就成功研发了具有自主知识产权的新一代“噬菌体展示抗
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
噬菌体展示抗体库论文参考文献
[1].张雨超,丁龙飞,陈健,张晓燕,徐建青.全人源单链抗体库噬菌体展示技术的建立[J].中国生物制品学杂志.2019
[2].杨成万.新一代噬菌体展示抗体库助力精准医疗[N].金融投资报.2017
[3].刘婕,陈俊亨,徐天殊,王丽萍,赵琦.大容量人源Fab噬菌体展示抗体库的构建及抗CD276抗体筛选[J].中国医药生物技术.2014
[4].赵翠娇.T7噬菌体展示人源抗体库筛选雌二醇ScFv抗体[D].郑州大学.2014
[5].刘小爽.抗猪CD46禽源单链噬菌体展示抗体库的构建及特异性抗体的筛选[D].西北农林科技大学.2014
[6].刘冰,童朝阳,刘威,郝兰群,穆晞惠.基于噬菌体展示抗体的电化学发光免疫传感器检测相思子毒素研究[J].分析化学.2013
[7].任立成,李冬娜.噬菌体抗体库展示技术及其研究进展[J].海南医学院学报.2012
[8].古雅珏,杨晓仪,张晓坤.人源性肺癌噬菌体展示抗体库的构建[J].中国医药指南.2012
[9].陈卉爽.T7噬菌体展示人源抗体库筛选百草枯抗体[D].华中农业大学.2012
[10].范献军,宁保安,白家磊,彭媛,柳明.T7噬菌体展示阿特拉津抗体库的构建和筛选[C].第七次全国分析毒理学大会暨第四届分析毒理专业委员会第二次会议论文摘要集.2012
论文知识图
