白细胞介素-10基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞的构建及其对自体外周血Th17细胞的免疫调控

白细胞介素-10基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞的构建及其对自体外周血Th17细胞的免疫调控

论文摘要

目的探究白细胞介素10(interleutin 10,IL-10)基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)对自体外周血Th17细胞的免疫调控作用。方法构建IL-10基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞(interleukin-10 gene-modified adipose mesenchymal stem cells,IL-10-ADSCs)及荧光蛋白标记的兔脂肪来源间充质干细胞(green fluorescent protein-adipose mesenchymal stem cells,GFP-ADSCs),定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction,Q-PCR)及Western blot检测细胞IL-10基因及蛋白表达水平。分离培养兔泪腺上皮细胞及自体外周血淋巴细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)建立淋巴细胞体外激活共培养体系,分组按PBMCsADSCs为51的比例加入等量ADSCs、IL-10-ADSCs及GFP-ADSCs,同时以等比例的成人真皮成纤维细胞-α作为对照组,Q-PCR检测各组Th17细胞相关基因mRNA表达水平。结果成功构建IL-10-ADSCs和GFP-ADSCs,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达率达80%以上。Q-PCR及Western blot检测结果显示,IL-10-ADSCs组IL-10 mRNA及蛋白表达水平均高于GFP-ADSCs组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与对照组相比,ADSCs组、IL-10-ADSCs组及GFP-ADSCs组均可降低兔外周血Th17细胞相关细胞因子IL-17及转录因子维甲酸相关孤独受体C mRNA表达水平(均为P<0.05),且IL-10-ADSCs组降低效果显著高于ADSCs组及GFP-ADSCs组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 IL-10-ADSCs可抑制Th17细胞分化相关基因的表达水平,具有抑制Th17细胞分化的潜能。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 实验动物
  •     1.1.2 主要试剂与仪器
  •   1.2 IL-10重组慢病毒载体的构建及鉴定
  •     1.2.1 IL-10基因片段的制备
  •     1.2.2 重组质粒pHBLV-IL-10的构建及鉴定
  •     1.2.3 pHBLV-IL-10慢病毒的包装
  •     1.2.4 重组慢病毒滴度检测
  •   1.3 IL-10-ADSCs的构建与鉴定
  •     1.3.1 重组慢病毒稳定转染ADSCs
  •     1.3.2 Q-PCR检测IL-10基因的表达
  •     1.3.3 Western blot检测IL-10蛋白的表达
  •     1.3.4 逆转录聚合酶链反应检测感染慢病毒后ADSCs干细胞特性
  •   1.4 IL-10-ADSCs对兔外周血Th17细胞分化相关基因mRNA表达的影响
  •     1.4.1 建立泪腺上皮细胞与自体外周血淋巴细胞共培养体系
  •     1.4.2 IL-10-ADSCs对兔外周血Th17细胞分化相关基因mRNA表达的影响
  •   1.5 统计学方法
  • 2 结果
  •   2.1 IL-10重组慢病毒载体的构建与鉴定
  •     2.1.1 重组质粒pHBLV-IL-10的构建及鉴定
  •     2.1.2 慢病毒包装与滴度检测
  •   2.2 IL-10-ADSCs的构建与鉴定
  •   2.3 IL-10-ADSCs抑制兔外周血Th17细胞分化相关基因mRNA表达
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 赵璐,粘红,韦燕凯,金成成,李娜,陈思思,魏瑞华

    关键词: 基因,慢病毒,过表达,脂肪间充质干细胞,细胞

    来源: 眼科新进展 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 基础医学

    单位: 天津医科大学眼科医院眼视光学院眼科研究所天津市视网膜功能与疾病重点实验室

    基金: 国家自然科学基金资助(编号:81770901,81570834),天津市临床重点学科(专科)建设项目(编号:TJLCZDXKT003)~~

    分类号: R392

    DOI: 10.13389/j.cnki.rao.2019.0254

    页码: 1105-1110

    总页数: 6

    文件大小: 1538K

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