Construction of a One-Vector Multiplex CRISPR/Cas9 Editing System to Inhibit Nucleopolyhedrovirus Replication in Silkworms

论文摘要

Recently the developed single guide（sg）RNA-guided clustered regularly interspaced short palindromic repeats/associated protein 9 nuclease（CRISPR/Cas9） technology has opened a new avenue for antiviral therapy. The CRISPR/Cas9 system uniquely allows targeting of multiple genome sites simultaneously. However, there are relatively few applications of CRISPR/Cas9 multigene editing to target insect viruses. To address the need for sustained delivery of a multiplex CRISPR/Cas9-based genome-editing vehicle against insect viruses, we developed a one-vector（pSL1180-Cas9-U6-sgRNA） system that expresses multiple sgRNA and Cas9 protein to excise Bombyx mori nucleopolyhedrovirus（BmNPV） in insect cells.We screened the immediate-early-1 gene（ie-1）, the major envelope glycoprotein gene（gp64）, and the late expression factor gene（lef-11）, and identified multiple sgRNA editing sites through flow cytometry and viral DNA replication analysis. In addition, we constructed a multiplex editing vector（PSL1180-Cas9-sgIE1-sgLEF11-sgGP64, sgMultiple） to efficiently regulate multiplex gene-editing and inhibit BmNPV replication after viral infection. This is the first report of the application of a multiplex CRISPR/Cas9 system to inhibit insect virus replication. This multiplex system can significantly enhance the potential of CRISPR/Cas9-based multiplex genome engineering in insect virus.

论文目录

文章来源

类型: 期刊论文

作者: Zhanqi Dong,Qi Qin,Zhigang Hu,Peng Chen,Liang Huang,Xinling Zhang,Ting Tian,Cheng Lu,Minhui Pan

来源: Virologica Sinica 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology,Southwest University,Key Laboratory of Sericultural Biology and Genetic Breeding, Ministry of Agriculture, Southwest University

基金: supported by grants from the National Natural Science Foundation of China (Nos. 31872427 and 31572466),China Agriculture Research System (CARS-18),Chongqing Special Postdoctoral Science Foundation (XmT2018020),China Postdoctoral Science Foundation (2018M633309)

分类号: Q78

页码: 444-453

总页数: 10

文件大小: 475K

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