利用桥梁载体策略构建水稻条斑病菌T3SS基因诱导表达检测体系

论文摘要

水稻条斑病菌（Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc）侵染水稻,引起细菌性条斑病（bacterial leaf streak, BLS）。Xoc主要依靠hrp基因簇（T3SS基因）编码的III型分泌系统（type III secretion system, T3SS）将效应蛋白注入水稻细胞中,激发寄主水稻的感（抗）病性。为了准确在Xoc中进行T3SS基因表达调控的分析,本研究设计出桥梁载体策略,将目标基因的启动子或者功能片段构建在高拷贝的桥梁载体,获得融合表达元件,通过亚克隆的方式将融合元件转入骨架载体上,获得用于转录表达和蛋白表达分析的载体。为了验证该策略的可行性,选取hrpG、hrpX和hrcC基因构建了相应的启动子探针载体和蛋白表达载体,将这些载体导入毒性调控子基因trh、lrpX和zur的突变体中,GUS活性测定、荧光定量PCR以及蛋白免疫杂交结果显示:在trh、lrpX和zur的突变体中,hrpG、hrpX和hrcC的转录表达水平、mRNA水平和蛋白表达水平呈现一致。这表明这套桥梁载体策略能够有效应用于T3SS基因转录表达和蛋白表达的分析。综上所述,运用桥梁载体能够克服低拷贝载体DNA遗传操作效率低的缺陷,这一策略也适用于毒性相关基因调控机理的研究,这将为Xoc-水稻互作研究提供高效的工作系统。

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类型: 期刊论文

作者: 吾尼尔别克·美丽,杨小菲,张翠萍,杨瑞环,李生樟,李逸朗,陈功友,陈晓斌,邹丽芳

关键词: 水稻条斑病菌,基因,启动子探针载体,蛋白表达载体

来源: 植物病理学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技

专业: 植物保护

单位: 上海交通大学农业与生物学院

基金: 国家重点研发计划资助(2017YFD0200400),国家自然科学基金(31470235,31772122)

分类号: S435.111

DOI: 10.13926/j.cnki.apps.000390

页码: 846-856

总页数: 11

文件大小: 1103K

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标签：水稻条斑病菌论文;  基因论文;  启动子探针载体论文;  蛋白表达载体论文;