导读:本文包含了小金海棠论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:小金,海棠,转录,缺铁,多酚,因子,基因。
小金海棠论文文献综述
张兆源[1]（2019）在《苹果属小金海棠WRKY55与WRKY64基因的克隆与功能分析》一文中研究指出本研究以小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang)为试材,克隆得到MxWRKY55和MxWRKY64基因,通过序列分析、亚细胞定位分析、组织特异性表达分析和转基因拟南芥抗性鉴定等方法,初步研究了小金海棠MxWRKY55和MxWRKY64基因的功能。根据已知的金冠苹果部分序列设计特异性引物,以小金海棠cDNA为模板,通过PCR扩增得到小金海棠MxWRKY55和MxWRKY64基因。MxWRKY55基因和MxWRKY64基因的开放阅读框分别为984bp和1116 bp。亚细胞定位结果显示MxWRKY55和MxWRKY64蛋白均定位在细胞核中。半定量PCR结果显示,MxWRKY55和MxWRKY64基因的表达具有组织特异性:在正常Hoagland营养液培养时(0 h),MxWRKY55基因和MxWRKY64基因在所有检测部位中都表达,其中MxWRKY55基因在新叶和茎尖中的表达量较高,MxWRKY64基因只在新叶中的表达量较高。在盐胁迫(200 mM NaCl),低温胁迫(2℃),高铁胁迫(160μM Fe-EDTA)和低铁胁迫(4μM Fe-EDTA)下,MxWRKY55和MxWRKY64基因的表达量随处理时间的增加呈先上升后下降的趋势。荧光定量PCR的结果显示,在盐胁迫、低温胁迫、高铁胁迫和低铁胁迫下,MxWRKY55和MxWRKY64基因的表达量在24 h内呈先升后降的趋势:新根中MxWRKY55和MxWRKY64基因表达量达到峰值的时间分别为6 h/9 h、9 h/6 h、9 h/9 h、6 h/9 h,而新叶中MxWRKY55和MxWRKY64基因表达量达到峰值的时间则为9 h/12 h、6 h/3 h、12 h/12 h、12 h/12 h。分别构建了MxWRKY55和MxWRKY64过表达载体,并通过农杆菌侵染的方法转化拟南芥,得到MxWRKY55和MxWRKY64的过表达植株。分别对野生型拟南芥和转基因拟南芥进行2周的低铁胁迫、高铁胁迫和正常铁浓度的处理。低铁胁迫下,野生型拟南芥黄化严重,植株鲜重和主根长度下降明显,而MxWRKY55和MxWRKY64过表达植株仅少数叶片变黄,各项生理指标均显着优于野生型拟南芥。高铁胁迫下,野生型拟南芥叶片黄化甚至变紫,根系生长严重受阻,植株趋于死亡,而MxWRKY55和MxWRKY64过表达植株仅老叶颜色发生改变,大部分新叶仍呈绿色,且各项生理指标均明显优于野生型拟南芥。盐胁迫下,野生型拟南芥叶片黄化萎蔫,而MxWRKY55和MxWRKY64过表达植株的大部分叶片仍呈绿色,其各项测定指标均显着优于野生型拟南芥;停止处理7天后,MxWRKY55和MxWRKY64过表达植株的存活率远高于野生型植株。综上所述,过表达MxWRKY55和MxWRKY64基因能增强拟南芥对高铁胁迫、低铁胁迫和盐胁迫的耐受力。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
柴丽静[2]（2019）在《苹果属小金海棠MxWRKY106基因的克隆与功能分析》一文中研究指出本研究以苹果铁高效砧木小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang)为试材,利用同源克隆的方法设计特异性引物,以克隆得到的WRKY转录因子为研究对象,提取小金海棠的RNA并将其逆转录为单链的cDNA,通过PCR扩增得到MxWRKY106基因。MxWRKY106基因开放阅读框长度为1059 bp,编码351个氨基酸,仅含有1个WRKY结构域,且锌指结构为C_2H_2型,说明其归属于WRKY家族的第Ⅱ类。利用软件MEGA 7构建MxWRKY106基因与其它物种里同源基因的系统进化树,显示MxWRKY106与苹果(Malus domestica)MdWRKY53的同源性最高。对其进行亚细胞定位后,结果显示MxWRKY106蛋白定位在细胞核中。半定量RT-PCR的结果表明,MxWRKY106基因在小金海棠不同部位中的表达具有组织特异性。在正常的Hoagland营养液培养时(0 h),MxWRKY106基因在所提取的器官中均有表达,并且在新叶和根中的表达量最大。在低温(2℃)、高盐(200 mM NaCl)、缺铁(4μM FeNa-EDTA)和铁过量(160μM FeNa-EDTA)处理下,MxWRKY106基因的表达量随处理时间的增加呈现先上升后下降的趋势。实时荧光定量PCR结果显示,在正常的Hoagland营养液培养条件下(0 h),MxWRKY106基因在不同部位的表达情况为:新叶中的表达量最高,根次之,老叶略高于韧皮。低温(2℃)、高盐(200 mM NaCl)、缺铁(4μM FeNa-EDTA)和铁过量(160μM FeNa-EDTA)处理下,在小金海棠的新叶中,MxWRKY106基因的表达量在处理后第1 h到第24 h呈现出先升高后降低的趋势,分别在低温处理3 h、高盐处理6 h、缺铁处理9 h和铁过量处理9 h时达到峰值。在小金海棠的根中,MxWRKY106基因的表达同样呈现先升后降的趋势,低温、高盐、缺铁和铁过量分别在9 h、3 h、6 h、6 h达到峰值。表达量的趋势与半定量RT-PCR的结果一致。利用农杆菌介导法将小金海棠MxWRKY106基因在拟南芥中过表达,筛选得到3个转基因株系,经盐处理7天后,野生型植株与转基因型相比表现出极为明显的黄化现象;经缺铁处理14天后,野生型拟南芥黄化矮小,根系较少,而转基因型植株生长发育正常仅少数叶片变黄;经铁过量处理14天后,野生型拟南芥叶片卷缩,叶色发紫,而转基因型植株仅老叶变黄,新叶生长正常。测定的与植物抗性相关的各项生理指标显示,在转MxWRKY106基因的拟南芥各株系中CAT、SOD、POD的活性以及脯氨酸含量较对照组均升高,MDA含量较未处理组变化不大,叶绿素含量下降,与对照组的差异显着。说明经高盐、缺铁和过量铁处理后转MxWRKY106基因拟南芥植株的受损程度减轻,对高盐、缺铁和铁过量胁迫的抗性增强。综上所述,过表达MxWRKY106基因可以增强拟南芥对高盐、缺铁和铁过量胁迫的耐受性。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
盛玉,张金云,陈红莉,潘海发[3]（2018）在《小金海棠MxSTOP1的克隆及功能的初步研究》一文中研究指出铁元素在超过100个氧化还原反应酶的调解中起作用,例如光合作用、呼吸作用、固氮作用以及DNA核苷酸的合成中。转运蛋白Nramp(natural resistance-associated macrophage protein)的作用是转运细胞内金属离子,其在不同的植物物种中发挥多种多样的生物学功能。笔者前期研究表明MxNRAMP1为膜蛋白,在缺铁胁迫时,通过形成内吞膜泡的运输方式,转运铁离子到达特定的细胞器(溶酶体、叶绿体)。在缺铁胁迫下植物体内基因变化表达研究中,近年来逐渐由功能基因的验证过渡到功能基因的调控研究上,即转录因子的发现和功能鉴定。植物在受到逆境胁迫时,细胞感知外界胁迫信号,胁迫信号传递给转录因子,转录因子再与启动子上的顺式作用元件特异结合从而调控下游基因表达。关于调控Nramp基因的转录因子报道较少,有研究表明,Nrat1(Nramp aluminum transporter 1)的表达会在根部上调来调控水稻对Al3+的耐受力,并受C2H2型锌指转录因子(ART1)调节。拟南芥和水稻中C2H2型锌指转录因子STOP1(sensitivetoproton1)和ART1(Al resistance transcription factor 1)在酸和铝信号转导途径中处于较上游位置,调节了下游一系列抗铝毒或质子毒害的基因,从而在适应低pH和铝毒中起重要作用。以铁高效苹果基因型小金海棠为试验材料,在NCBI数据库中,通过苹果基因组信息同源搜索,找出小金海棠基因组中的STOP1同源基因,并以小金海棠缺铁根部cDNA为模板,克隆得到与缺铁胁迫相关的转录因子MxSTOP1,并将其构建到瞬时表达载体中,通过轰击洋葱表皮细胞探究其亚细胞定位情况;分别提取小金海棠缺铁、6 h、12 h、24 h、3 d、6 d和9 d根部的RNA并反转录成cDNA,利用实时荧光定量PCR获得MxSTOP1的时空表达特性。通过生物信息学分析,MxSTOP1编码含有C2H2锌指结构的蛋白,其基因的cDNA全长为1 852bp,编码区为1 581 bp,编码527个氨基酸,分子量约为58.7 kD。试验结果表明,轰击洋葱表皮后在荧光显微镜下观察MxSTOP1定位在洋葱表皮细胞的细胞核;通过Real-time PCR技术,分析MxSTOP1表达量,结果表明:缺铁3 d后会显着提高基因的表达量,推测MxSTOP1在小金海棠抗缺铁胁迫过程中可能起到一定的作用。下一步试验将验证MxSTOP1的转录激活活性、MxSTOP1与MxNRAMP1的相互作用,同时通过构建过表达MxSTOP1的野生型和NRAMP1缺失型两种拟南芥突变体,研究突变体材料对缺铁的耐受能力,进一步验证MxSTOP1与MxNRAMP1之间的协同关系。(本文来源于《中国园艺学会2018年学术年会论文摘要集》期刊2018-10-17）
潘海发,张金云,盛玉,陈红莉[4]（2018）在《NAA、NPA处理对小金海棠MxNRAMP1表达的影响》一文中研究指出缺铁黄叶病对果树的产量、品质、树势及经济效益均造成极大的损失,因此寻求矫治缺铁失绿症的各种途径和方法变得越来越重要。小金海棠是铁高效基因型,用作砧木可帮助苹果在铁缺乏条件下正常生长和发育。小金海棠在应答缺铁胁迫时根部铁吸收加强。转运蛋白NRAMP(natural resistance-associatedmacrophageprotein)广泛存在于细菌、真菌、植物和动物界,其作用是转运细胞内金属离子。前期以小金海棠(Malus xiaojinensis)为材料,克隆了铁转运蛋白基因MxNRAMP1,初步研究了MxNRAMP1与铁胁迫之间的关系,表明小金海棠中缺铁胁迫诱导了MxNRAMP1的上调表达。前人研究表明,缺铁胁迫下,小金海棠根系铁吸收过程在3d时已经显着加强,生长素,脱落酸等信号物质含量在此时也开始提高。本研究中对小金海棠施加生长素类似物NAA和生长素运输抑制剂NPA,探究上述诱导是否通过生长素信号通路介导和MxNRAMP1参与小金海棠铁吸收和转运的方式与作用。结果显示,在小金海棠根中,正常铁处理施加NAA或者施加生长素抑制剂NPA,MxNRAMP1的表达变化幅度不大。缺铁胁迫下施加NAA同样会诱导小金海棠根中MxNRAMP1的表达,小金海棠中MxNRAMP1在缺铁胁迫下NAA处理3、6、9 d时表达量显着高于正常铁处理的样品,转录提高了2倍以上,而与缺铁处理之间的差异不大;缺铁处理下施加生长素抑制剂NPA会抑制缺铁胁迫对NRAMP1的诱导,缺铁胁迫下施加NPA处理12 h时,根中MxNRAMP1表达量已经低于仅缺铁处理的样品,NPA处理24 h、3 d、6 d、9 d时,相比于缺铁处理的植株,MxNRAMP1表达量显着下调。在小金海棠的新叶和老叶中,施加生长素类似物NAA和生长素运输抑制剂NPA处理后,其MxNRAMP1没有发现明显的规律性变化。(本文来源于《中国园艺学会2018年学术年会论文摘要集》期刊2018-10-17）
韦月平,王鹏[5]（2018）在《小金海棠多酚对肝纤维化的改善及机制研究》一文中研究指出研究小金海棠多酚对CCl4诱导小鼠肝纤维化的改善作用及机制。采用皮下注射CCl4诱导小鼠肝纤维化,同时小金海棠多酚(MXP)灌胃给药(10 mg/kg、20 mg/kg)的方法。结果表明,皮下注射CCl4诱导小鼠肝脏发生明显的损伤。与模型组相比,喂食小金海棠多酚显着降低了血清和肝组织中ALT与AST活性,同时肝组织中SOD和GSH-PX活性显着提高。形态和组织学检测表明,小金海棠多酚显着逆转CCl4诱导的肝损伤。此外,喂食小金海棠多酚能显着抑制皮下注射CCl4引发的IL-1、IL-6和TNF-α等炎性细胞因子的生成。以上结果表明,小金海棠多酚可以明显减轻CCl4诱导产生的肝纤维化,其作用机制可能与其增强机体抗氧化能力、抑制炎性细胞因子合成有关。(本文来源于《食品与生物技术学报》期刊2018年07期）
吕远达[6]（2018）在《小金海棠IRT1上游调控途径分析及其亚硝基化位点进化研究》一文中研究指出铁元素是果树生长必需的微量元素之一,探究苹果砧木铁高效利用机制的研究十分重要。本试验利用小金海棠(Malus xiaojinensis)(铁高效基因型),以及山定子(Malus baccata)(铁低效基因型)为试验材料,系统研究了IRT1基因在缺铁应答反应中的作用。课题组前期研究表明,分析在铁高效基因型小金海棠中关键铁转运基因IRT1启动子,发现TATA-box插入,该元件插入能够提高IRT1的转录活性进而增强植株的铁吸收效率。本研究对已经得到的TATA-box插入增强IRT1的表达的调控机理进行了进一步的探究,利用酵母单杂筛选得到与IRT1启动子TATA-box结合的转录因子TFIID(MDP0000939369),并用EMSA技术进一步验证了该TFIID结合与TATA-box特异结合。因此,TATA-box插入是通过与特定TFIID型转录因子结合来增强IRT1转录活性,在调控植物耐缺铁机制中发挥重要的作用。同时IRT1蛋白(iron-regulated transporter 1)的巯基亚硝基化位点存在被子植物中规律性分化。选取机理Ⅰ代表型植物拟南芥、番茄和小金海棠为试验材料,运用基因定点突变、转基因等试验方法,探究铁转运蛋白IRT1巯基亚硝基化的功能,结果表明IRT1亚硝基化位点参与了植物缺铁应答反应,且缺铁处理的小金海棠和山定子根部总蛋白亚硝基化程度高于正铁处理,正铁+NO释放剂处理根部总蛋白亚硝基化程度高于缺铁+NO抑制剂处理,这表明NO可以通过调节蛋白的巯基亚硝基化来响应植物的缺铁胁迫。(本文来源于《中国农业大学》期刊2018-05-01）
王鹏,韦月平[7]（2017）在《‘小金海棠’多酚对高脂小鼠肝组织的影响》一文中研究指出采用饲喂高脂饲料建立高脂小鼠模型,'小金海棠'多酚(MXP)灌胃给药(50 mg/kg、100 mg/kg)连续7周检测肝组织中甘油叁酯(TG)与总胆固醇(TC)水平,并观察肝组织形态,最后检测糖脂代谢途径相关蛋白(IRS、Akt)的表达状况。结果表明:MXP可以降低肝组织中TG和TC水平,并能明显抑制肝细胞损伤,其中100 mg/kg组效果较好;更为重要的是MXP可以显着提高IR和IRS的表达,改善糖脂代谢信号通路。(本文来源于《上海农业学报》期刊2017年06期）
孙朝华[8]（2017）在《活性氧在小金海棠缺铁应答中的作用研究》一文中研究指出铁元素作为植物体所必需的微量元素,在细胞氧化还原平衡中,发挥着重要作用。铁是线粒体和叶绿体电子传递链的一个组成部分。缺铁可迅速导致细胞氧化还原态的失衡,致使ROS含量发生改变,因此,铁元素在植物生长发育过程中起着非常重要的作用。但ROS在缺铁调控中的作用至今并不明确,ROS在铁高效型木本植物中缺铁适应性反应的作用需得到进一步的挖掘与探究。本研究以铁高效基因型苹果属植物小金海棠(Malus xiaojinensis)和铁低效基因型苹果属植物山定子(Malus baccata)为材料,在缺铁条件下检测ROS、H_2O_2的含量及ROS清除酶CAT、POD、SOD的活性。缺铁早期施加H202抑制剂DPI,缺铁后期施加H_2O_2对缺铁适应性反应进行检测。对ROPs基因家族进行筛选,挑选出与ROS变化一致的ROPs基因,并对该基因进行了基因功能验证。主要结果如下:1)缺铁早期(9 h),小金海棠的ROS含量和CAT活性显着增高,而山定子则没有变化;在缺铁后期(9 d)小金海棠的CAT、POD、SOD活性高于山定子,ROS含量低于山定子;缺铁早期施加H_2O_2抑制剂DPI,发现ROS含量及几种清除酶活性降低,缺铁适应性反应下降;缺铁后期施加H202,缺铁适应性反应下降。说明缺铁早期ROS的增加可调控缺铁适应性反应增强,随着缺铁时间延长,ROS可抑制表达,负调控缺铁适应性反应。2)对MdROPs基因家族进行聚类分析发现,MdROP1、MdROP8、与AtROP6聚为一类,其中MdROP1与AtROP6亲缘关系最为相近。缺铁早期小金海棠的MdROP1表达量显着高于正常供铁处理的小金海棠和山定子;缺铁后期山定子的MdROP1表达量显着高于正常供铁处理的小金海棠和山定子,且ROS含量的变化与MdROP1基因表达规律一致。3)Mdop1编码一个由198个氨基酸组成的蛋白质,开放阅读框为594bp,且小金海棠和山定子中无碱基差异。构建35S::MxROP1::GFP过表达载体,将其转入番茄原生质体,发现MxROP1定位在原生质体细胞膜上。4)缺铁条件下35S::MxROP1::GFP转基因植株比野生型ROS含量高、叶绿素含量高、根系、发达、FCR活性高,AtRBOHD、AtRBOHF(编码NOX酶活,促进ROS产生的基因)和FIT、IRT1(铁吸收相关基因)表达量上调。说明MxROP1可以促进ROS的产生,增强缺铁适应性反应,提高铁吸收能力。本研究探讨了 ROS对缺铁胁迫的调节机理,发现其在植株缺铁的不同阶段所起到的调控作用不同。小金海棠与山定子对缺铁响应的表现为:缺铁早期ROS含量和缺铁后期ROS的清除效率均不相同,缺铁胁迫下ROS含量随MdROP1表达量升高而增多。MxROP1的基因功能为促进ROS的产生及铁吸收相关基因的表达,从而增强缺铁适应性反应。(本文来源于《中国农业大学》期刊2017-05-01）
韦月平,王鹏[9]（2017）在《小金海棠多酚对高脂饮食小鼠的降脂作用及机制》一文中研究指出本研究旨在探讨小金海棠多酚(Malus xiaojinensis polyphenols,MXP)的降脂减肥作用及其机制。采用饲喂高脂饲料建立高脂小鼠(Mus musculus)模型,小金海棠多酚灌胃给药(50,100 mg/kg),连续7周。检测血清中甘油叁酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)和肝组织中TG与TC水平,并计算肝脾指数。同时检测肝组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)与肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)转录情况并观察肝组织形态。最后检测糖脂代谢途径相关蛋白胰岛素受体底物(insulin receptor substrate,IRS)和蛋白激酶B(Akt)的表达状况。结果显示,MXP可以显着抑制小鼠体重快速增长并降低血清和肝组织中TG、TC及LDL-C的水平,同时提高HDL-C的水平。此外,MXP能显着抑制包括IL-6及TNF-α在内的炎性细胞因子的生成及肝细胞损伤。更为重要的是MXP可以显着提高IRS-1和Akt的表达。因此,小金海棠多酚的降脂功能很可能与其能提高葡萄糖的利用率和抑制炎性细胞因子活性有关,具有开发成为降脂减肥功能食品及保健品的潜力。本研究为科学合理开发小金海棠(Malus xiaojinensis)提供理论基础和依据。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2017年01期）
石岩[10]（2016）在《小金海棠柠檬酸合成酶基因MxCS2的克隆与功能分析》一文中研究指出本研究以铁高效基因型苹果砧木小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang)为试材,以从中克隆得到一个新的柠檬酸合成酶基因(CS)为研究对象,利用已公布的苹果金冠全基因组序列图谱的柠檬酸合成酶基因序列保守区设计兼并引物,用Trizol法提取小金海棠的RNA,在逆转录酶的作用下反转录合成单链c DNA,通过巢式PCR扩增的方法获得小金海棠CS基因片段,区别于之前从小金海棠中克隆得到的Mx CS1基因,将该基因命名为Mx CS2。测序结果发现Mx CS2基因的开放阅读框全长为891bp,利用DNAMAN5.2软件将测序获得的核苷酸序列翻译为氨基酸序列,推测Mx CS2基因负责编码一个由296个氨基酸组成的蛋白质,预测其分子量约为33.2k Da,理论等电点为7.79。对Mx CS2蛋白的叁维结构进行分析,该蛋白的功能结构域包含有叁个α螺旋和三个无规则卷曲,亚细胞定位显示Mx CS2蛋白定位于线粒体和细胞质膜上。利用NCBI网站中的blast功能进行Mx CS2基因和其他物种的CS基因的氨基酸和核苷酸相似性分析,得到同源进化树,Mx CS2与Mx CS1和Pp CS1(桃)聚合在一簇,At CS4(拟南芥),Dc CS(胡萝卜),Nt CS(烟草)聚合在另一簇,Os CS(水稻)单独为第叁簇。实时荧光定量PCR分析显示在正常供铁时,Mx CS2在叶中、根部和韧皮部均表达,在木质部中几乎不表达,其表达情况为幼叶表达量最高,其次是真叶、根部、韧皮部,表达量最低的是木质部。说明Mx CS2基因主要在生命活动活跃的器官中发挥作用。在低铁处理和IAA处理时,小金海棠的幼叶、韧皮部和根部中的Mx CS2基因的表达量,随着处理时间的延长,呈现先升高后降低的趋势,在处理12h时达到最大值,在处理24h后缓慢降低;而在高铁处理过程中这些部位的Mx CS2基因的表达随着处理时间的延长有较低程度的减弱。真叶中Mx CS2基因在铁胁迫条件下的表达水平与上述部位相反,而在IAA处理下与上述部位具有相同趋势。此外,ABA处理对Mx CS2基因的表达水平影响并不显着。在转入Mx CS2基因的拟南芥植株T3代鉴定试验中发现,在正常供铁时,转基因型拟南芥植株和野生型植株的表现型都正常;低铁处理时,野生型植株有明显的黄化现象,而转基因型植株没有出现明显的黄化现象;高铁处理时,转基因型植株的表现型要好于野生型。说明在缺铁和过量铁的情况下转基因型拟南芥比野生型表现出更强的耐铁胁迫能力。通过对转基因拟南芥的铁吸收相关生理指标测定,得到如下结果:在高铁和低铁环境下,转基因型植株的鲜重与野生型植株相比,分别为野生型的1.9倍和2.1倍。测得在高铁和低铁环境下转基因型植株的根长分别为野生型的1.4倍和1.9倍。转基因型植株幼苗中的叶绿素含量比野生型高,特别是处于低铁和高铁胁迫下,野生型植株的叶子有更多枯萎和黄化现象,与叶绿素含量情况一致。在高铁和低铁环境下,转基因型植株的CS活性分别是野生型的3.1倍和3.8倍。在高铁、正常铁和低铁环境下,转基因型植株的铁浓度分别是野生型植株的1.3倍、1.1倍、1.8倍。在高铁和低铁环境下,转基因型植株的CA浓度分别是野生型的3.1倍、3.1倍。在正常铁浓度环境下,转基因型植株的CA浓度是野生型植株的2.2倍。总而言之,转基因型拟南芥与野生型相比,具有较高的鲜重、根长、CS活性、柠檬酸含量、叶绿素含量和铁含量,尤其是在低铁环境下。(本文来源于《东北农业大学》期刊2016-06-01）
小金海棠论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本研究以苹果铁高效砧木小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang)为试材,利用同源克隆的方法设计特异性引物,以克隆得到的WRKY转录因子为研究对象,提取小金海棠的RNA并将其逆转录为单链的cDNA,通过PCR扩增得到MxWRKY106基因。MxWRKY106基因开放阅读框长度为1059 bp,编码351个氨基酸,仅含有1个WRKY结构域,且锌指结构为C_2H_2型,说明其归属于WRKY家族的第Ⅱ类。利用软件MEGA 7构建MxWRKY106基因与其它物种里同源基因的系统进化树,显示MxWRKY106与苹果(Malus domestica)MdWRKY53的同源性最高。对其进行亚细胞定位后,结果显示MxWRKY106蛋白定位在细胞核中。半定量RT-PCR的结果表明,MxWRKY106基因在小金海棠不同部位中的表达具有组织特异性。在正常的Hoagland营养液培养时(0 h),MxWRKY106基因在所提取的器官中均有表达,并且在新叶和根中的表达量最大。在低温(2℃)、高盐(200 mM NaCl)、缺铁(4μM FeNa-EDTA)和铁过量(160μM FeNa-EDTA)处理下,MxWRKY106基因的表达量随处理时间的增加呈现先上升后下降的趋势。实时荧光定量PCR结果显示,在正常的Hoagland营养液培养条件下(0 h),MxWRKY106基因在不同部位的表达情况为:新叶中的表达量最高,根次之,老叶略高于韧皮。低温(2℃)、高盐(200 mM NaCl)、缺铁(4μM FeNa-EDTA)和铁过量(160μM FeNa-EDTA)处理下,在小金海棠的新叶中,MxWRKY106基因的表达量在处理后第1 h到第24 h呈现出先升高后降低的趋势,分别在低温处理3 h、高盐处理6 h、缺铁处理9 h和铁过量处理9 h时达到峰值。在小金海棠的根中,MxWRKY106基因的表达同样呈现先升后降的趋势,低温、高盐、缺铁和铁过量分别在9 h、3 h、6 h、6 h达到峰值。表达量的趋势与半定量RT-PCR的结果一致。利用农杆菌介导法将小金海棠MxWRKY106基因在拟南芥中过表达,筛选得到3个转基因株系,经盐处理7天后,野生型植株与转基因型相比表现出极为明显的黄化现象;经缺铁处理14天后,野生型拟南芥黄化矮小,根系较少,而转基因型植株生长发育正常仅少数叶片变黄;经铁过量处理14天后,野生型拟南芥叶片卷缩,叶色发紫,而转基因型植株仅老叶变黄,新叶生长正常。测定的与植物抗性相关的各项生理指标显示,在转MxWRKY106基因的拟南芥各株系中CAT、SOD、POD的活性以及脯氨酸含量较对照组均升高,MDA含量较未处理组变化不大,叶绿素含量下降,与对照组的差异显着。说明经高盐、缺铁和过量铁处理后转MxWRKY106基因拟南芥植株的受损程度减轻,对高盐、缺铁和铁过量胁迫的抗性增强。综上所述,过表达MxWRKY106基因可以增强拟南芥对高盐、缺铁和铁过量胁迫的耐受性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
小金海棠论文参考文献
[1].张兆源.苹果属小金海棠WRKY55与WRKY64基因的克隆与功能分析[D].东北农业大学.2019
[2].柴丽静.苹果属小金海棠MxWRKY106基因的克隆与功能分析[D].东北农业大学.2019
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