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具有抗生素耐受性的琼胶降解菌的性质研究

2020-12-08阅读(237)

具有抗生素耐受性的琼胶降解菌的性质研究

论文摘要

琼胶是一种海洋生物多糖,其降解产物琼胶寡糖具有多种生物活性,有较好的经济价值和应用前景。筛选出高效和抗逆性好的琼胶降解菌是制备琼胶寡糖的一个重要环节。本文自广西防城港市红树林沉积物中筛选了一株琼胶降解菌,对其进行了 16srRNA鉴定,测定了菌株的部分生理生化性质,测定菌株对部分抗生素的耐受性,确定了不同因素对菌株产琼胶酶的影响,优化了菌株产琼胶酶的条件,测定了琼胶酶的部分性质。论文得到的主要研究结果如下:经16s rRNA鉴定,确定该菌株为寡养单胞菌属Stenotrophomonas的细菌,命名为Stenotrophomonassp.N1,保藏编号为CCTCCNO:M2019073。该菌株为革兰氏阴性菌,好氧,耐盐,不能分解纤维素,不产硫化氢。该菌株有极强的抗生素耐受性,能在分别含有诺氟沙星、磺胺甲恶唑、四环素（浓度均为1000mg/L）的营养琼脂培养基上正常生长。测定了单因素条件温度、起始pH、接种龄、接种量、培养时间等对菌株Stenotrophomonassp.N1产琼胶酶的影响,确定菌株适宜的产酶条件为:培养温度40℃,培养基起始pH值为7.5,接种龄10 h,接种量10%,培养时间48 h。根据单因素实验结果,用正交试验优化了菌株的产琼胶酶条件,优化后的产酶条件为:培养温度40℃、培养基起始pH值为7.5、接种量12%、培养时间48 h。在优化的产酶条件下,低浓度的诺氟沙星、磺胺甲恶唑或四环素对琼胶酶活力的影响较小,单一抗生素浓度为300 mg/L时,琼胶酶活力下降17.47-18.03%,抗生素浓度大于500mg/L时,琼胶酶活力降低的幅度较大。菌株Stenotrophomonassp.N1所产琼胶酶为胞外β琼胶酶,能将琼胶降解为新琼二糖。该琼胶酶的最适催化温度为35℃,在25-45℃的温度范围内具有良好的热稳定性,能保持70%以上的相对酶活力。该琼胶酶最适催化pH值为7.0,在5.0-8.0的pH值范围内具有良好的酸碱稳定性,能保持70%以上的相对酶活力。在琼胶含量为0.3%时,琼胶酶活力最高。该琼胶酶对卡拉胶也具有良好的降解性,难以降解褐藻酸钠、壳聚糖。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 第一章 绪论
  •   1.1 琼胶
  •   1.2 琼胶寡糖
  •     1.2.1 琼胶寡糖的制备方法
  •     1.2.2 国内外研究现状
  •     1.2.3 琼胶寡糖的应用现状
  •   1.3 寡养单胞菌
  •     1.3.1 寡养单胞菌简介
  •     1.3.2 寡养单胞菌的应用
  •   1.4 研究意义、内容与创新点
  •     1.4.1 研究意义
  •     1.4.2 研究内容
  •     1.4.3 创新点
  • 第二章 具有抗生素耐受性的琼胶降解菌的筛选
  •   2.1 引言
  •   2.2 材料与方法
  •     2.2.1 采样地点
  •     2.2.2 实验培养基
  •     2.2.3 抗生素耐受菌的筛选
  •     2.2.4 琼胶降解菌的筛选
  •     2.2.5 菌株的鉴定
  •     2.2.6 琼胶酶活力的测定
  •     2.2.7 酶解产物分析
  •   2.3 结果与分析
  •     2.3.1 菌株的筛选
  •     2.3.2 菌株的鉴定
  •     2.3.3 琼胶酶活力
  •     2.3.4 酶解产物分析
  •   2.4 本章小结
  • 第三章 菌株Stenotrophomonas sp.N1产琼胶酶的条件测定
  •   3.1 引言
  •   3.2 材料与方法
  •     3.2.1 粗酶液制备
  •     3.2.2 琼胶酶活力的测定
  •     3.2.3 生长曲线的测定
  •     3.2.4 产酶曲线的测定
  •     3.2.5 产酶条件单因素实验
  •     3.2.6 菌株产酶条件的优化
  •     3.2.7 抗生素对菌株产酶的影响
  •   3.3 结果与分析
  •     3.3.1 菌株的生长曲线
  •     3.3.2 菌株的产酶曲线
  •     3.3.3 单因素条件对菌株产琼胶酶的影响
  •     3.3.4 产酶条件的优化
  •   3.4 讨论
  •   3.5 本章小结
  • 第四章 琼胶酶的酶学性质
  •   4.1 引言
  •   4.2 材料与方法
  •     4.2.1 琼胶酶的酶解反应最适温度和热稳定性
  •     4.2.2 琼胶酶的酶解反应最适pH和酸碱稳定性
  •     4.2.3 底物浓度对琼胶酶活力的影响
  •     4.2.4 琼胶酶的底物专一性
  •   4.3 结果与分析
  •     4.3.1 琼胶酶的酶解最适温度和热稳定性
  •     4.3.2 琼胶酶的酶解最适pH和酸碱稳定性
  •     4.3.3 底物浓度对琼胶酶活力的影响
  •     4.3.4 琼胶酶的底物专一性
  •   4.4 讨论
  •   4.5 本章小结
  • 第五章 结论与展望
  •   5.1 结论
  •   5.2 展望
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录

    • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 谭琳山

    导师: 王维生

    关键词: 琼胶降解菌,抗生素耐受,琼胶寡糖,琼胶酶

    来源: 广西大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 生物学,有机化工

    单位: 广西大学

    分类号: Q939.9;TQ281

    总页数: 59

    文件大小: 4224K

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