一种基于丝裂霉素诱导的人脂肪干细胞衰老模型

论文摘要

目的建立一种简单有效的人脂肪干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）衰老模型,为研究ADSCs衰老机制及抗衰老药物筛选奠定基础。方法分别用0. 5μg/ml,1μg/ml和3μg/ml的丝裂霉素（MMC）处理ADSCs,以正常培养组作为阴性对照（NC）,利用β-gal活性染色检测不同浓度MMC对ADSCs衰老情况的影响;然后将正常培养与0. 5μg/ml MMC处理的ADSCs分别进行高通量芯片检测,分析找出两组ADSCs差异表达的衰老相关基因;利用q RT-PCR和ELISA验证部分SASP（IL-6、IL-8、IL-1α、IL-1β和TNF-α）及其他衰老相关基因（p16、p21、p53）的表达,并用Western blot检测p21和γ·H2AX的表达。结果与正常培养的ADSCs相比,0. 5μg/ml,1μg/ml和3μg/ml MMC均可诱导ADSCs增殖停滞,细胞体积增大,β-gal染色阳性率升高（P <0. 01）。RNA芯片检测发现,MMC处理的ADSCs富集了多种衰老相关分泌表型（SASP）基因,包括IL-6、IL-8、IL-1α、IL-1β和TNF-α。在MMC（0. 5μg/ml）处理ADSCs后第7天,Western blot结果显示,细胞表达p21和γ·H2AX蛋白明显上调,q RT-PCR和ELISA检测表明,SASP基因IL-6、IL-8、IL-1α和IL-1β表达和（或）分泌出现一定程度上调,其中IL-1α和IL-1β表达差异有统计学意义（P <0. 05）,TNF-α、p16、p21、p53无明显变化（P> 0. 05）。结论 MMC处理的ADSCs表现出细胞衰老的一般特点,并可分泌多种衰老相关SASP。本文成功建立了一种基于MMC诱导的、具有典型衰老特征的ADSCs衰老细胞模型。

论文目录

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张明萌,饶敏腊,刘亭亭,陈艺琳,赵威,廖小欣,李晓毅,彭健愉,刘新光,孙雪荣

关键词: 脂肪干细胞,细胞衰老,衰老相关分泌表型,丝裂霉素

来源: 山西医科大学学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 广东医科大学广东省医学分子诊断重点实验室衰老研究所,广东医科大学药学院,广东医科大学第二临床学院,广东医科大学医学检验学院,广东医科大学生物化学与分子生物学研究所

基金: 国家自然科学基金资助项目(81671399),广东省自然科学基金资助项目(2017A030307034),国家级大学生创新创业训练计划项目(201810571013,201810571014),广东医科大学创新实验项目(ZYDB003,ZYDB005,ZZDS003),广东大学生科技创新培育专项资金(pdjhb0231)

分类号: R339.38

DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2019.04.007

页码: 415-420

总页数: 6

文件大小: 2407K

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