导读:本文包含了猪传染性胃肠炎病毒论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:胃肠炎,传染性,病毒,干扰素,基因,蛋白,引物。
猪传染性胃肠炎病毒论文文献综述
于天飞,董慧莹,谢鹏宇,孙婉姝,尹海畅[1]（2019）在《猪传染性胃肠炎病毒膜蛋白亲和肽的原核表达及其病毒亲和性分析》一文中研究指出为了研究猪传染性胃肠炎病毒膜蛋白(M蛋白)亲和肽的病毒亲和性,建立快速有效的TGEV检测方法,设计了1条含有TGEV M蛋白亲和肽的串联基因,核苷酸序列依据大肠杆菌偏爱密码子进行优化,人工基因合成获得了含有M蛋白亲和肽基因的重组质粒pUC57-MQHT。然后,根据合成基因的序列,设计合成了1条特异性引物,以pUC57-MQHT为模板,通过PCR获得了150 bp的TGEV M蛋白亲和肽基因。亲和肽基因通过BamHⅠ/XhoⅠ多克隆位点分别插入至原核表达载体pET-32a和pGEX-6p-1,获得重组质粒pET-32a-MQHT和pGEX-6p-MQHT。重组质粒经BamHⅠ单酶切和BamHⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导,获得了重组蛋白TRX-MQHT和GST-MQHT,分子质量分别为25,31 ku。切胶纯化后,重组蛋白TRX-MQHT和GST-MQHT分别经His标签单克隆抗体和GST标签单克隆抗体鉴定,鉴定结果表明,获得的纯化蛋白为目的蛋白。Western Blot分析表明,2种重组蛋白可与TGEV特异性结合。Dot-ELISA分析表明,在TGEV滴度为1×10~3,5×10~2,2.5×10~2 TCID50/mL时2种重组蛋白都可显示出阳性反应,而在1.25×10~2 TCID50/mL滴度时无可见斑点,具有良好的TGEV亲和性。阻断试验表明,1∶100或1∶200稀释的TGEV阳性血清可完全阻断TGEV H株(1×10~5 TCID50/mL)与2种重组蛋白的结合,特异性良好。为建立TGEV诊断方法奠定了一定的理论和物质基础。(本文来源于《华北农学报》期刊2019年05期）
罗钧秋,杜建,王岚,毛湘冰,何军[2]（2019）在《猪传染性胃肠炎病毒感染对仔猪肠道屏障功能的影响及营养调控》一文中研究指出猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染仔猪能够引起仔猪肠道损伤,导致仔猪腹泻脱水甚至死亡,其致病机制主要在于破坏猪小肠黏膜,引起肠道黏膜上皮屏障功能受损,具体主要表现为:TGEV破坏仔猪肠道上皮机械屏障完整和电解质平衡,扰乱生物菌群结构,降低局部免疫功能。TGEV诱导炎症及先天免疫反应的作用机制主要通过激活维甲酸诱导基因Ⅰ样受体(RLR)和Toll样受体(TLR),使核转录因子(NF-κB)活化,进一步诱导细胞因子和干扰素表达。通过饲粮中添加氨基酸、维生素和中草药等营养调控措施可以达到缓解TGEV损伤肠道屏障功能的目的,为预防及治疗TGEV感染对仔猪肠道屏障功能的影响提供参考。(本文来源于《南京农业大学学报》期刊2019年05期）
杜雅楠,李静,刘艳成,杜鹏,包福祥[3]（2019）在《猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法的建立及应用》一文中研究指出为建立一种操作简便、准确率高的检测方法,对内蒙古地区猪传染性胃肠炎流行情况进行调查,参考GenBank中收录的猪传染性胃肠炎病毒的N基因序列,设计合成了一对特异性引物,针对该基因建立了TGEV的RT-PCR检测方法。应用建立的RT-PCR方法对从内蒙古地区7个盟市采集的204份猪腹泻样品进行了TGEV检测。结果显示,受检的204份样品中有24份样品呈现TGEV阳性,阳性率为11.76%。其中从赤峰市采集的样品TGEV阳性率最高,为20.83%;不同类型样品TGEV的检出率也有差异,其中肛门拭子的检出率最高(15.56%),其次是肠道样品(12.00%),粪便样品的检出率最低(7.87%)。表明所建立的RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性强,可用于猪传染性胃肠炎病毒的快速检测。(本文来源于《动物医学进展》期刊2019年09期）
王以欣,王紫微,王丽,姜艳平,崔文[4]（2019）在《基于DPO引物检测猪传染性胃肠炎病毒real-time RT-PCR方法的建立及应用》一文中研究指出为建立快速、特异性检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的方法,以TGEV的N基因为靶基因,利用双启动寡核苷酸引物(dual priming oligonucleotide,DPO),建立了检测TGEV的real-time RT-PCR方法。结果显示,与常规引物相比,DPO引物的特异性强,有3个以上碱基与模板发生错配,将导致扩增效率极大降低或终止扩增反应,同时DPO引物有效退火温度范围较宽,在40～65℃均能高效地扩增靶基因,不需要对退火温度进行优化。本研究建立的方法灵敏度高,对TGEV核酸的最低检测限可达1.52×10~1 copies/μL,同时利用该方法对10种病毒株进行检测,仅TGEV为阳性,显示了良好的检测特异性。该方法的检测重复性好,以质粒标准品为模板的组内、组间重复性检测结果的变异系数均小于1.00%。利用建立的方法对采集的213份仔猪腹泻临床样品进行检测,共检出TGEV阳性样本31份,阳性率为14.55%,与常规RT-PCR方法检测结果的符合率为93.55%,与基于N基因测序结果的符合率为100.00%。本研究基于DPO引物建立的检测TGEV的real-time RT-PCR方法,为TGEV的准确检测和流行病学调查提供技术支持。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年08期）
胡靖飞,尹人杰,黄小波,刘志鹏,赵玉佳[5]（2019）在《共检猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的cDNA芯片的技术优化》一文中研究指出【目的】对前期构建的猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和A型猪轮状病毒(PoRVA)共检cDNA芯片进行技术创新和关键参数优化。【方法】根据靶基因PEDV(S和M)、TGEV(N和S)以及PoRVA的(VP7和NSP4)分别设计6对特异性引物,扩增探针制备芯片阵列。重点改进了样品标记技术,引物直接标记与不对称PCR扩增结合,确定了不对称PCR扩增体系;并对点样缓冲液、水合时间、探针浓度、杂交时间和温度、清洗和干燥方式等条件进行优化。【结果】当博奥和百傲两种缓冲液比例为1∶1,水合时间为4 s,探针浓度为600 ng/μL,不对称PCR上下游引物比为1∶40,在48℃杂交3 h,用0.2%SDS清洗,1 000 r/min离心,该cDNA芯片效果最佳。【结论】本研究确定了PEDV-TGEV-GAR共检cDNA芯片的关键技术参数,为开展基因芯片的标准化制备和应用奠定了基础。(本文来源于《四川农业大学学报》期刊2019年04期）
杜雅楠,刘艳成,李静,杜鹏,陈翠英[6]（2019）在《猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及其S基因序列分析》一文中研究指出旨在明确内蒙古地区猪传染性胃肠炎流行毒株S基因遗传进化关系,为该病的防控提供依据。对内蒙古赤峰市采集的腹泻样品进行TGEV分离鉴定,成功分离到1株TGEV,将其命名为TGEV-CF(NMG)株。对TGEV-CF(NMG)株进行S基因的克隆、测序并与国内外已报道的25条基因序列进行比对和遗传进化分析。遗传进化分析结果表明,TGEV-CF(NMG)株与中国的attenuated H株和H16株亲缘关系最近,位于同一分支上。核苷酸序列比对结果显示,TGEV-CF(NMG)株与其他25株TGEV的同源性在95.1%～99.2%之间,其中与中国H16株同源性最高,为99.2%。表明分离株TGEV-CF(NMG)的S基因保守性较高,可作为制备TGEV疫苗的重要候选毒株。(本文来源于《内蒙古农业大学学报(自然科学版)》期刊2019年05期）
王洪微[7]（2019）在《猪传染性胃肠炎病毒M蛋白诱导IFN-β表达分子机制及功能域研究》一文中研究指出猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)是一种有囊膜的单股正链RNA病毒,可引起猪急性、高度接触性、传染性肠道疾病——猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis,TGE)。自2010年以来,TGE在我国多个省市的暴发,给养猪业造成了巨大的经济损失,制约了我国规模化猪场的健康高速发展。TGEV致病机制的研究有助于对TGE的防控。有研究报道TGEV感染可以诱导I型干扰素(IFN)的产生。IFN及其下游的干扰素刺激因子(ISGs)能够有效的抑制病毒感染和病毒在体内的增殖,是宿主抗病毒感染的重要环节。多数病毒感染是拮抗IFN产生的,而TGEV感染细胞后可以诱导I型IFN的产生,目前对其具体分子机制的相关研究报道较少。本研究使用TGEV HE-1株在IPEC-J2细胞上传代适应,盲传至第八代时,细胞开始出现典型的细胞病变(cytopathic effect,CPE),经RT-PCR验证TGEV HE-1株可以在IPEC-J2细胞上适应,荧光显微镜下可观察到随着感染病毒滴度的增加,绿色荧光信号逐渐增强。TGEV HE-1株感染IPEC-J2模型可以用来研究TGEV诱导细胞IFN-β产生的分子机制。实时荧光定量RT-PCR和双荧光素酶分析系统检测结果表明TGEV感染IPEC-J2细胞呈时间和剂量依赖性上调IFN-β表达。同时,TGEV感染可激活IRF-3和NF-κB启动子活性,且IRF-3启动子的表达量变化明显高于NF-κB,Western blot和激光共聚焦结果表明TGEV感染可诱导IRF-3磷酸化和核转移,说明TGEV感染上调IFN-β的表达可能主要依赖于IRF-3转录因子调控。通过RT-PCR扩增了TGEV的S、E、M、N基因,并与pCMV-HA-N真核表达载体连接构建重组质粒,通过Western blot验证各结构蛋白在IPEC-J2细胞内均成功表达。双荧光素酶分析系统检测显示S、N、E蛋白虽也能诱导IFN-β少量表达,但M蛋白作为关键蛋白激活作用最显着。TGEV M基因siRNA转染细胞后,IFN-β表达量显著下调,进一步证明TGEV M蛋白可以诱导IFN-β产生。Western blot和激光共聚焦检测表明,M蛋白通过诱导IRF-3的磷酸化和核转移激活IFN-β。通过截短表达TGEV M基因,构建5个重组质粒,双荧光素酶分析确定M蛋白激活IFN-β的关键功能域位于第1-88位氨基酸。综上,本研究证明了TGEV分离株HE-1株可以在IPEC-J2细胞上生长繁殖;TGEV感染IPEC-J2细胞诱导IFN-β产生依赖于IRF-3转录因子调控,且呈时间和剂量依赖性;TGEV M蛋白是诱导IFN-β产生的关键结构蛋白,通过诱导IRF-3的磷酸化和核转移激活IFN-β信号通路,TGEV M蛋白激活IFN-β信号通路的关键功能域位于第1~88位氨基酸。本研究为阐明TGEV的致病机理奠定基础,为靶向药物的研究及对TGE的有效防控提供理论依据。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
单玲玲[8]（2019）在《原核表达猪IFN-γ抑制猪传染性胃肠炎病毒的复制及相关机制的研究》一文中研究指出猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus)引起的一种高传染性的猪肠道疾病,具有很高的发病率和死亡率。TGEV可感染任何日龄猪,主要感染新生仔猪造成仔猪的急性腹泻。虽然市场上有较多的疫苗用于TGEV的预防,但是目前还没有有效的制剂能够治疗TGEV的感染,本研究通过猪IFN-γ(Interferon-γ,IFN-γ)的原核表达进行猪IFN-γ抗TGEV活性和相关机制的研究。IFN-γ主要具有调节宿主免疫应答的能力,但是其最初被发现是由于具有抗病毒活性,而目前IFN-γ在抑制TGEV感染中的功能知之甚少。本研究使用大肠杆菌原核表达系统进行IFN-γ的表达纯化,该系统具有易于操作,生产量大,速度快,成本低等优点,目前是一种应用最广泛的表达系统。本研究首先将优化的Fc片段克隆至原核表达载体pET-21b中获得pET-21b-Fc重组载体,然后将IFN-γ克隆连接至pET-21b-Fc载体中,成功获得重组质粒pET-21b-IFN-γ-Fc,将其转化到E.coli Shuffle表达菌种,经过条件摸索对其进行诱导表达,并对菌体上清进行Protein A纯化。通过SDS-PAGE发现大肠杆菌可溶性表达IFN-γ,Western-Blot验证获得IFN-γ。对IFN-γ进行抗TGEV研究,通过检测荧光定量PCR,TCID_(50)测定,间接免疫荧光等方法,结果显示IFN-γ能够呈剂量依赖性抑制TGEV或TGEV-GFP在ST细胞和IPEC-J2细胞中的复制。对其机制进行进一步探索发现IFN-γ显著上调猪干扰素调节因子1(Porcine Interferon regulatory factor 1,poIRF1)的表达,而且poIRF1能够影响IFN-γ介导的信号通路,对poIRF1敲低发现可以完全消除IFN-γ对TGEV的抑制作用,由此可以看出,IFN-γ主要通过poIRF1信号通路抑制TGEV的复制。此外,本实验使用I型干扰素缺失的Vero E6细胞证明IFN-γ具有直接抗TGEV活性,不完全依赖IFN-α/β,但是同时发现IFN-γ在ST细胞和IPEC-J2细胞中表现出比Vero E6细胞中更有效抑制TGEV感染的现象,说明I型干扰素在II型干扰素抑制TGEV的复制作用过程中扮演重要的角色。因此我们对IFN-γ处理ST细胞后进行检测,发现IFN-γ能够诱导I型干扰素的上调表达,且IFN-γ和IFN-α的共处理对TGEV的抑制有非常明显的协同作用,这表明IFN-γ可通过诱导I型干扰素表达并与I型干扰素具有协同抗TGEV复制的作用。本研究利用大肠杆菌成功表达IFN-γ,并发现IFN-γ能抑制TGEV的复制,而其抑制作用主要通过poIRF1介导,并且IFN-γ能够诱导I型干扰素的表达,与I型干扰素具有协同抑制TGEV复制的作用,这为预防和治疗TGEV奠定一定的基础。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2019-06-01）
单玲玲,符芳,薛美,李亮,刘平黄[9]（2019）在《γ干扰素通过上调I型干扰素表达协同抑制猪传染性胃肠炎病毒的复制》一文中研究指出为探索干扰素(IFN)在猪消化道冠状病毒的预防和治疗中的作用,通过反转录定量PCR(reverse transcription-q PCR,RT-qPCR)和间接免疫荧光试验,分别检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)拷贝数和TGEV核衣壳蛋白的表达,发现猪源IFN-γ能够显著抑制TGEV在猪睾丸细胞中的复制,并且相同质量浓度的IFN-γ比IFN-α能更有效地抑制TGEV的复制,与猪源IFN-α有明显的协同抑制作用。对其机制进一步探索,发现IFN-γ能够不依赖于I型干扰素发挥直接抗病毒活性,但是能够通过诱导I型干扰素表达水平的上调,增加其抗病毒活性。结果表明,IFN-γ通过诱导I型干扰素的表达与I型干扰素协同抑制TGEV的复制,对预防和治疗TGEV感染有重要意义。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年06期）
龚双燕,李小璟,李幽幽,朱玲,徐志文[10]（2019）在《猪传染性胃肠炎病毒诱导PK-15细胞凋亡相关基因mRNA转录水平变化的研究》一文中研究指出为探究PK-15细胞感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)后相关凋亡基因Bcl-XL、MCL-1及PUMA mRNA转录水平差异以及TGEV增殖与细胞凋亡之间的关联,本研究在TGEV感染PK-15细胞前后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,结果显示TGEV具有诱导PK-15细胞发生凋亡的能力;并利用建立的q PCR方法对凋亡相关基因Bcl-XL、MCL-1和PUMA mRNA的转录水平进行测定,结果显示,感染TGEV (实验组)后Bcl-XL、MCL-1和PUMA mRNA转录水平与未感染病毒组(对照组)有明显差异,进一步表明TGEV感染PK-15细胞诱导了细胞凋亡的进程。本研究为了解TGEV诱导PK-15细胞凋亡的机制提供了实验依据。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年03期）
猪传染性胃肠炎病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染仔猪能够引起仔猪肠道损伤,导致仔猪腹泻脱水甚至死亡,其致病机制主要在于破坏猪小肠黏膜,引起肠道黏膜上皮屏障功能受损,具体主要表现为:TGEV破坏仔猪肠道上皮机械屏障完整和电解质平衡,扰乱生物菌群结构,降低局部免疫功能。TGEV诱导炎症及先天免疫反应的作用机制主要通过激活维甲酸诱导基因Ⅰ样受体(RLR)和Toll样受体(TLR),使核转录因子(NF-κB)活化,进一步诱导细胞因子和干扰素表达。通过饲粮中添加氨基酸、维生素和中草药等营养调控措施可以达到缓解TGEV损伤肠道屏障功能的目的,为预防及治疗TGEV感染对仔猪肠道屏障功能的影响提供参考。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
猪传染性胃肠炎病毒论文参考文献
[1].于天飞,董慧莹,谢鹏宇,孙婉姝,尹海畅.猪传染性胃肠炎病毒膜蛋白亲和肽的原核表达及其病毒亲和性分析[J].华北农学报.2019
[2].罗钧秋,杜建,王岚,毛湘冰,何军.猪传染性胃肠炎病毒感染对仔猪肠道屏障功能的影响及营养调控[J].南京农业大学学报.2019
[3].杜雅楠,李静,刘艳成,杜鹏,包福祥.猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法的建立及应用[J].动物医学进展.2019
[4].王以欣,王紫微,王丽,姜艳平,崔文.基于DPO引物检测猪传染性胃肠炎病毒real-timeRT-PCR方法的建立及应用[J].中国兽医学报.2019
[5].胡靖飞,尹人杰,黄小波,刘志鹏,赵玉佳.共检猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的cDNA芯片的技术优化[J].四川农业大学学报.2019
[6].杜雅楠,刘艳成,李静,杜鹏,陈翠英.猪传染性胃肠炎病毒的分离鉴定及其S基因序列分析[J].内蒙古农业大学学报(自然科学版).2019
[7].王洪微.猪传染性胃肠炎病毒M蛋白诱导IFN-β表达分子机制及功能域研究[D].东北农业大学.2019
[8].单玲玲.原核表达猪IFN-γ抑制猪传染性胃肠炎病毒的复制及相关机制的研究[D].中国农业科学院.2019
[9].单玲玲,符芳,薛美,李亮,刘平黄.γ干扰素通过上调I型干扰素表达协同抑制猪传染性胃肠炎病毒的复制[J].中国兽医科学.2019
[10].龚双燕,李小璟,李幽幽,朱玲,徐志文.猪传染性胃肠炎病毒诱导PK-15细胞凋亡相关基因mRNA转录水平变化的研究[J].中国预防兽医学报.2019
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