导读:本文包含了胰凝乳蛋白酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:菜青虫,胰凝乳蛋白酶,克隆,原核表达
胰凝乳蛋白酶论文文献综述
张娴,李超林,郑乔木,严子成,廖海[1]（2019）在《菜青虫胰凝乳蛋白酶基因PrCT1的克隆及表达分析》一文中研究指出胰凝乳蛋白酶是昆虫的主要消化酶,可能参与多种消化以外的生理过程。为了解该蛋白质基因表达特性,基于菜青虫(Pieris rapae)转录组数据,克隆了1个菜青虫胰凝乳蛋白酶基因PrCT1并进行相关分析。该基因编码区全长861 bp,编码286个氨基酸,含有典型的丝氨酸蛋白酶催化叁联体(H_(57)、D_(102)、S_(195)),经丝氨酸蛋白酶底物特异性口袋分析,显示其属于胰凝乳蛋白酶。PrCT1与黑脉金斑蝶胰凝乳蛋白酶(GenBank登录号:OWR53227)同源性最高,达到49%,且亲缘关系最近。构建pET28a-PrCT1原核表达重组载体,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株进行原核诱导表达。结果发现,重组PrCT1蛋白以包涵体形式存在,分子质量为33.26 ku。利用实时荧光定量PCR检测菜青虫不同组织中PrCT1 mRNA表达及饥饿、决明胰蛋白酶抑制剂喂食处理后PrCT1 mRNA的表达情况显示,PrCT1基因主要在菜青虫的中肠中表达,且在饥饿、决明胰蛋白酶抑制剂喂食处理后表达水平均下调,推测PrCT1可能是菜青虫中肠中发挥食物消化作用的重要蛋白酶,且可能是重要的抗虫靶点。(本文来源于《河南农业科学》期刊2019年09期）
王舰平,赵树进,李脉,许锋,朱庆玲[2]（2017）在《抗木瓜凝乳蛋白酶单链抗体的筛选、可溶性表达及鉴定》一文中研究指出目的筛选具有较好结合能力的抗木瓜凝乳蛋白酶单链抗体(scFv),并进行可溶性表达和鉴定。方法前期实验室构建了抗木瓜凝乳蛋白酶全套鼠源scFv噬菌体抗体文库,对抗体文库进行4轮富集后,采用ELISA筛选抗木瓜凝乳蛋白酶阳性scFv;将ELISA最强阳性克隆p FAB5C-scFv的重组噬粒切除gene 3 singal后进行表达,SDS-PAGE分析、双抗体夹心ELISA分析、鉴定表达产物,并将阳性克隆可变区序列与Gene Bank数据库进行同源性比较。结果经4轮噬菌体展示富集,筛选到3株亲和力相对较高的阳性克隆;去除gene 3 singal后的重组scFv在宿主菌E.coli XL1-blue中主要以可溶性的形式进行了表达,且对木瓜凝乳蛋白酶有较好的亲和力。基因序列分析表明阳性克隆所包含的重链可变区基因(VH)与小鼠免疫球蛋白γ重链基因同源性达96%,轻链可变区基因(VL)和小鼠免疫球蛋白轻链κ基因同源性达98%。结论成功筛选出结合能力较好的抗木瓜凝乳蛋白酶scFv并进行了可溶性表达,所克隆的scFv基因符合小鼠抗体序列的特征。(本文来源于《广东药科大学学报》期刊2017年04期）
徐小峰[3]（2017）在《α1-抗胰凝乳蛋白酶在朊病毒感染啮齿动物脑组织中变化的研究》一文中研究指出α1-抗胰凝乳蛋白酶是一种急性期炎症相关蛋白,目前已在阿尔茨海默病患者脑组织纤维斑块中发现,但是在朊病毒病中却鲜有报道。为了探究α1-抗胰凝乳蛋白酶在朊病毒病中的变化规律,我们选取了羊瘙痒因子263K感染的仓鼠和139A、ME7感染的小鼠脑组织,利用多种实验方法对α1-抗胰凝乳蛋白酶的变化规律进行分析。我们发现在以上叁种朊病毒毒株感染的啮齿类动物脑组织中,α1-抗胰凝乳蛋白酶的含量明显增加,并且随着疾病潜伏期的增加呈递增的趋势。通过免疫组化实验发现,在羊瘙痒因子感染的啮齿类动物脑组织中,增加的α1-抗胰凝乳蛋白酶主要分布在皮层、丘脑和小脑区域。免疫荧光实验显示,α1-抗胰凝乳蛋白酶与表达GFAP的星形胶质细胞存在共定位,同时与表达Ibal的小胶质细胞和表达NeuN的神经元也存在共定位。后续免疫荧光染色发现羊瘙痒因子263K感染的仓鼠脑组织中,α1-抗胰凝乳蛋白酶与PrP存在大量的共定位,并且朊病毒感染仓鼠脑组织连续切片的免疫组织化学结果显示,PrPSc沉积位点存在α1-抗胰凝乳蛋白酶的阳性信号。但是随后的免疫共沉淀实验却无法在羊瘙痒因子263K感染的仓鼠脑匀浆和朊病毒感染的细胞系SMB-S15裂解液中发现α1-抗胰凝乳蛋白酶与PrP直接分子相互作用的证据。综上结果提示,在朊病毒感染的啮齿动物的脑组织中α1-抗胰凝乳蛋白酶的含量明显增加,同时脑组织中α1-抗胰凝乳蛋白酶与PrP的共定位现象并不是由于直接的分子间相互作用所导致的。(本文来源于《中国疾病预防控制中心》期刊2017-06-30）
林集端[4]（2017）在《巯基准聚轮烷制备及其与胰凝乳蛋白酶和脲酶的相互作用》一文中研究指出准聚轮烷是一种线形超分子组装体,在纳米器件、传感器、分子转换器、体内给药释放系统、基因释放载体以及组织工程支架材料等方面具有广泛的应用。本课题以聚乙二醇(PEG)/?-环糊精(CyD)准聚轮烷为载体,在PEG末端修饰巯基,制备一种氧化还原可控型的准聚轮烷水凝胶,测定胰凝乳蛋白酶和脲酶在水凝胶中的活性和结构的变化,探究此叁元体系的相互作用,并对准聚轮烷的成核机理进行了初步的探索。通过酯化法和叁步合成法制备了巯基聚乙二醇,通过FTIR、Raman、1H NMR表征发现在本实验室条件下,酯化法比较容易合成PEG?SH,产率70%以上。用?-CyD进行穿环反应制备巯基准聚轮烷,利用XRD对巯基准聚轮烷进行晶型分析,表明其属于六方晶系。为探索巯基准聚轮烷能否作为一种软固定化酶的材料,我们研究了胰凝乳蛋白酶在PEG?SH/?-CyD准聚轮烷体系中的活性和结构的变化。实验表明,在PEG?SH/?-CyD准聚轮烷体系中,胰凝乳蛋白酶的酶活提高了19%,稳定性也有明显提高。通过荧光光谱、同步荧光光谱、1H NMR、13C NMR、COSY、NOESY、圆二色谱的研究发现这主要是由于溶液中的胰凝乳蛋白酶与巯基准聚轮烷形成氢键、疏水键、范德华力等次级相互作用造成胰凝乳蛋白酶的结构发生轻微的变化,最终引起酶的催化效率提高。另外,巯基具有提高胰凝乳蛋白酶酶活的作用。以脲酶作为胰凝乳蛋白酶的对照酶,研究了脲酶/巯基准聚轮烷的相互作用。实验表明,巯基准聚轮烷对脲酶的活性和稳定性并没有影响。而在巯基浓度比较高的巯基乙酸(TGA)溶液中,脲酶迅速失活。考察脲酶的荧光光谱发现巯基准聚轮烷会降低酶的荧光强度,溶液中Trp、Tyr残基的微环境也会随着巯基准聚轮烷的加入而发生变化。此外,本课题还对准聚轮烷的相变成核机理进行了初步的探索。在0.1 g/mL?-CyD溶液中,准聚轮烷的形成速率会随着PEG浓度的增加而增加,并最终稳定在5?10-4 mg/mL?s左右。准聚轮烷的穿环及相变过程中,粒径不断增大,最终形成的准聚轮烷的粒径大概在1.5~3?m的范围内。由zeta电位的测试结果可知,在穿环过程中,一旦生成凝结核之后,凝结核迅速聚集,形成不稳定的颗粒体系,并发生相变。(本文来源于《华侨大学》期刊2017-06-15）
[5]（2016）在《伊朗与土耳其共同研究微生物蛋白酶与骆驼凝乳酶对伊朗超滤白干酪挥发性成分和感官特性的影响》一文中研究指出伊朗与土耳其研究者联合研究米黑根毛霉来源蛋白酶与骆驼凝乳酶不同比例复配物(100∶0、75∶25、50∶50、25∶75、0∶100)对伊朗超滤白干酪成熟期(90 d)挥发性成分和感官评价得分的影响。采用固相微萃取-气质联用法测定干酪中挥发性成分。共鉴定了40种化合物,包括12种酯类、6种酸类、9种酮类、3种酸类及其他化合物9种,其中主要化合物种类是酯类、酮类及其他化合物。凝乳剂种类和用量对干酪挥发性成分和感官得(本文来源于《乳业科学与技术》期刊2016年05期）
庚平,李君,朱丹实,何余堂,马涛[6]（2016）在《菠萝蛋白酶凝乳对豆乳凝胶力学性质、持水能力及微观结构的影响》一文中研究指出研究菠萝蛋白酶对豆乳凝胶性质的影响。将酶分别与乳酸菌、氯化镁复合凝乳,考察凝胶流变学的性质。试验结果表明:在40℃、凝乳4 h条件下菠萝蛋白酶所获得的凝胶强度、黏度较高,其中酶添加量为5 U/m L体系的凝胶强度最高,为45 g。体系弹性模量(G′)随酶添加量的增加,凝乳时间的延长呈增大趋势;高酶添加量210 U/m L的豆乳体系则呈下降趋势。菠萝蛋白酶凝胶的持水能力在56%~69%范围,其凝胶微观结构表明,凝乳3~5 h可形成致密网状结构的凝胶,7 h时凝胶结构的孔隙较大。复合凝乳试验结果表明,乳酸菌和氯化镁均可提高体系的G′,其中氯化镁对G′影响更为明显。(本文来源于《中国食品学报》期刊2016年08期）
赵萍,张艳,钟晓武,王凌燕,谭祥[7]（2016）在《胰凝乳蛋白酶抑制剂在蓖麻蚕主要组织中的分布及血液中的含量和活性》一文中研究指出【目的】蓖麻蚕Samia cynthia ricini属于鳞翅目昆虫,其体内存在的胰凝乳蛋白酶抑制剂(chymotrypsin inhibitor,CI)对蓖麻蚕的正常生长发育和自身防御能力有重要的作用。获得蓖麻蚕的CI种类分布信息,以及研究各种CI的功能,可以为鳞翅目害虫的生物防治提供理论依据。【方法】本实验通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE)和CI活性染色技术,对18个蓖麻蚕品系的主要组织器官中胰凝乳蛋白酶抑制剂的多态性分布进行了调查,并对各品系血液中的蛋白含量和CI活性进行了测定。【结果】在p H 8.6电泳下,各品系血液中共检测到7条CI活性带,在p H4.0电泳下,各品系血液中可检测到3条CI活性带;血液中的CI含量从5龄第3天幼虫期到化蛹当天一直维持着很高的含量;头、体壁和脂肪体中的CI都不如血液中的CI含量高,而丝腺中未检测到任何CI。【结论】与家蚕Bombyx mori血液中的含量相比,蓖麻蚕血液中的CI含量更高,CI种类多态性分布不仅体现在不同品系的同一组织,还体现在同一品系的不同组织。(本文来源于《昆虫学报》期刊2016年02期）
李静,钟国伦,夏海平[8]（2016）在《氨基磁性纳米粒子对α-胰凝乳蛋白酶固定过程的研究》一文中研究指出采用分子自组装技术制备氨基功能化磁性纳米粒子,并通过碳二亚胺偶联剂将α-胰凝乳蛋白酶固定在其表面.利用红外光谱及热失重分析等方法表征固定酶的纳米粒子,研究了固定过程中酶浓度和反应时间对载酶量的影响,得到最佳固定条件.在固定过程用Langmuir等温式拟合优于用Freundlich等温式,功能化纳米粒子的载酶量达到127 mg·g-1,与一级反应动力学模型相比,二级反应动力学模型能够更好地拟合该固定过程.(本文来源于《宁波大学学报(理工版)》期刊2016年01期）
柴日奕,王吉鹏,李健,张瑞祥,李青[9]（2015）在《日本血吸虫胰凝乳蛋白酶样蛋白基因功能的初步研究》一文中研究指出目的探索日本血吸虫胰凝乳蛋白酶样蛋白(chymotrypsin-like protease)在终宿主体内的基因表达、定位和潜在功能,评估该蛋白在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护力。方法利用软件分析日本血吸虫胰凝乳蛋白酶样蛋白(Sj CTRL)基因(Gen Bank登录号为FN317561.1)的理化特性,及与其他物种同源基因的种系发生关系。采用整体原位杂交法定位Sj CTRL基因转录本在d26成虫中的表达部位。利用实时定量荧光PCR方法监测感染后14、18、22和26 d等4个发育时期雌雄虫的Sj CTRL基因转录水平。制备Sj CTRL-ds RNA,采用体外浸泡法对d26合抱雌雄虫进行RNA干扰,并利用共聚焦显微镜观察被干扰虫体的形态学变化。设计特异性引物扩增去除跨膜结构的编码基因序列,并克隆至p ET-28a原核表达载体,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)后进行原核表达。将纯化重组蛋白免疫C57BL/6小鼠,用尾蚴(40±2条/鼠)攻击感染进行动物保护性实验。同时设对照组。感染后35 d收集虫体和肝脏,统计减虫率、每克肝组织减卵率。结果原位杂交定位结果显示,该基因转录本位于雌虫后段肠道。Sj CTRL基因仅在d26雌虫体内有较高的转录本丰度。Sj CTRL-ds RNA干扰后雌虫相应基因转录本的相对表达量降至25.7%(P<0.05),但未有可观察到的形态学变化。构建了p ET-28a/Sj CTRL重组质粒,诱导表达获得不可溶重组蛋白。免疫保护试验结果显示,减虫率为25.4%,减卵率为80.5%。结论初步探明日本血吸虫胰凝乳蛋白酶样蛋白基因仅在d26雌虫的后段肠道高转录,体外干扰可降低Sj CTRL基因的转录本水平,该蛋白可一定程度上减少感染日本血吸虫的C57BL/6小鼠的成虫数和肝脏虫卵数。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2015年04期）
蔡勤安,于志晶,尚丽霞,许诺,曾军[10]（2015）在《木瓜凝乳蛋白酶基因的克隆及在原核细胞中的表达》一文中研究指出以青番木瓜总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增出木瓜凝乳蛋白酶基因CHY(chymopapain),构建带有His-tag的原核表达载体p EASY-E1-CHY。将该重组载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,重组菌株用IPTG诱导表达,在诱导6 h,IPTG浓度为0.05 mmol/L时重组蛋白表达量最高。SDS-PAGE凝胶电泳和West-ern-Blot杂交分析结果表明蛋白大小为45 k Da。用脱脂奶粉进行凝乳分析,证明此木瓜凝乳蛋白酶具有凝乳活性,此结果为今后利用生物技术进行木瓜凝乳蛋白酶工程化生产奠定了基础。(本文来源于《吉林农业科学》期刊2015年03期）
胰凝乳蛋白酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的筛选具有较好结合能力的抗木瓜凝乳蛋白酶单链抗体(scFv),并进行可溶性表达和鉴定。方法前期实验室构建了抗木瓜凝乳蛋白酶全套鼠源scFv噬菌体抗体文库,对抗体文库进行4轮富集后,采用ELISA筛选抗木瓜凝乳蛋白酶阳性scFv;将ELISA最强阳性克隆p FAB5C-scFv的重组噬粒切除gene 3 singal后进行表达,SDS-PAGE分析、双抗体夹心ELISA分析、鉴定表达产物,并将阳性克隆可变区序列与Gene Bank数据库进行同源性比较。结果经4轮噬菌体展示富集,筛选到3株亲和力相对较高的阳性克隆;去除gene 3 singal后的重组scFv在宿主菌E.coli XL1-blue中主要以可溶性的形式进行了表达,且对木瓜凝乳蛋白酶有较好的亲和力。基因序列分析表明阳性克隆所包含的重链可变区基因(VH)与小鼠免疫球蛋白γ重链基因同源性达96%,轻链可变区基因(VL)和小鼠免疫球蛋白轻链κ基因同源性达98%。结论成功筛选出结合能力较好的抗木瓜凝乳蛋白酶scFv并进行了可溶性表达,所克隆的scFv基因符合小鼠抗体序列的特征。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胰凝乳蛋白酶论文参考文献
[1].张娴,李超林,郑乔木,严子成,廖海.菜青虫胰凝乳蛋白酶基因PrCT1的克隆及表达分析[J].河南农业科学.2019
[2].王舰平,赵树进,李脉,许锋,朱庆玲.抗木瓜凝乳蛋白酶单链抗体的筛选、可溶性表达及鉴定[J].广东药科大学学报.2017
[3].徐小峰.α1-抗胰凝乳蛋白酶在朊病毒感染啮齿动物脑组织中变化的研究[D].中国疾病预防控制中心.2017
[4].林集端.巯基准聚轮烷制备及其与胰凝乳蛋白酶和脲酶的相互作用[D].华侨大学.2017
[5]..伊朗与土耳其共同研究微生物蛋白酶与骆驼凝乳酶对伊朗超滤白干酪挥发性成分和感官特性的影响[J].乳业科学与技术.2016
[6].庚平,李君,朱丹实,何余堂,马涛.菠萝蛋白酶凝乳对豆乳凝胶力学性质、持水能力及微观结构的影响[J].中国食品学报.2016
[7].赵萍,张艳,钟晓武,王凌燕,谭祥.胰凝乳蛋白酶抑制剂在蓖麻蚕主要组织中的分布及血液中的含量和活性[J].昆虫学报.2016
[8].李静,钟国伦,夏海平.氨基磁性纳米粒子对α-胰凝乳蛋白酶固定过程的研究[J].宁波大学学报(理工版).2016
[9].柴日奕,王吉鹏,李健,张瑞祥,李青.日本血吸虫胰凝乳蛋白酶样蛋白基因功能的初步研究[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志.2015
[10].蔡勤安,于志晶,尚丽霞,许诺,曾军.木瓜凝乳蛋白酶基因的克隆及在原核细胞中的表达[J].吉林农业科学.2015