米曲霉酸性蛋白酶基因在毕赤酵母中的异源表达及酶学性质

米曲霉酸性蛋白酶基因在毕赤酵母中的异源表达及酶学性质

论文摘要

酸性蛋白酶作为一类重要的天冬氨酸蛋白酶,被广泛应用于食品、医药和皮革等领域。为推动酸性蛋白酶的研究及应用,通过对发酵豆制品样品进行宏基因组测序,从中获得米曲霉酸性蛋白酶基因pepA,在毕赤酵母GS115中进行异源表达,并对重组酶PepA进行酶学性质分析。结果显示毕赤酵母发酵上清液中酸性蛋白酶的活性为50.62 U/mL。SDS-PAGE验证PepA的分子量约为50 kDa,且发酵上清液几乎无杂蛋白。PepA的最适pH值为4.5,最适温度为50℃,Mn2+和Cu2+对其具有激活作用,而Fe3+、Fe2+与Ca2+则具有抑制作用。上述研究结果可为米曲霉酸性蛋白酶的异源表达及其相关工业应用提供指导。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 酸性蛋白酶基因的获取
  •     1.2.2 重组表达载体pPIC9K-pepA的构建
  •     1.2.3 毕赤酵母重组菌株的构建与筛选
  •     1.2.4 重组菌株的诱导表达
  •     1.2.5 重组蛋白的酶活力测定
  •   1.3 酶学性质分析
  •     1.3.1 最适反应温度与温度稳定性
  •     1.3.2 最适反应pH与pH稳定性
  •     1.3.3 金属离子对酶活力的影响
  • 2 结果与分析
  •   2.1 米曲霉酸性蛋白酶基因的克隆与重组载体的构建
  •   2.2 重组菌株的诱导表达
  •   2.3 酶学性质分析
  •     2.3.1 最适温度与温度稳定性
  •     2.3.2 最适反应pH值与pH稳定性
  •     2.3.3 常见金属离子对酸性蛋白酶活性的影响
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 岳晓平,陈朋,朱玥明,曾艳,刘汉民,刘红彦,王敏,孙媛霞

    关键词: 米曲霉,酸性蛋白酶,毕赤酵母,异源表达,酶学性质

    来源: 生物工程学报 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 天津科技大学生物工程学院,中国科学院天津工业生物技术研究所

    基金: 国家重点研发计划(No.2018YFD0400403),天津市科技计划项目(No.16PTYJNC00010),天津市科技计划项目(No.15PTCYSY00020)~~

    分类号: Q78;Q55

    DOI: 10.13345/j.cjb.180321

    页码: 415-424

    总页数: 10

    文件大小: 1134K

    下载量: 452

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