导读:本文包含了基因剔除论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,颅脑,小鼠,损伤,溶酶体,蛋白,内质网。
基因剔除论文文献综述
王莉[1]（2018）在《Shh基因在NIPBL基因剔除小鼠模型肢芽内表达规律的研究》一文中研究指出背景和目的:德朗热综合征(Cornelia de Lange Syndrome,CdLS)是一个由基因突变造成的罕见的伴有严重的生长发育缺陷和累及多器官系统的先天性遗传性疾病。这些基因的突变会引起基因表达的失调,并伴有多种严重的骨发育异常,主要表现为生长智能迟滞、认知障碍、上肢畸形、多毛症、特殊面容、心脏瓣膜缺陷等多器官功能异常,严重影响了新生儿及儿童的健康成长,给家庭和社会造成了沉重的负担。其中,该病65%的患儿是由NIPBL、Smc1和Smc3这叁个基因突变所导致,NIPBL基因突变是引起常染色体显性遗传性疾病德朗热综合征的主要病因,约60%的患儿由NIPBL基因突变引起。在胎鼠的肢芽发育阶段中,NIPBL基因对位于肢芽ZPA(Zone of Polarizing Activity)区域的Shh(Sonic Hedgehog)基因具有调控作用,影响Shh基因的表达,但具体两个基因之间的交互作用如何以及规律如何,还未可知。本实验,我们利用NIPBL-Loxp小鼠与Cre小鼠建立NIPBL~(+/-)基因剔除小鼠模型,在此模型的基础上,探讨Shh基因在胎鼠发育的不同时期的表达情况。方法:NIPBL-Loxp小鼠与Cre小鼠的背景品系小鼠是C57BL/6J,SPF级,购于浙江大学,全部小鼠饲养于石河子大学药学院实验动物中心。实验过程遵照石河子大学动物实验伦理委员会管理条例。本实验,我们首先建立NIPBL-Loxp小鼠模型,然后再利用NIPBL-Loxp小鼠与Cre小鼠建立NIPBL~(+/-)基因剔除小鼠模型,然后NIPBL~(+/-)小鼠模型作为亲代鼠,挑选NIPBL~(+/-)小鼠雄性35g左右,雌性30g左右,在晚上20:00点将雌、雄小鼠按2:1合笼,次日早上8点检查雌鼠的阴栓,将阴栓阳性者的雌鼠次日中午作为其胚胎E0.5天。经过相互杂交NIPBL~(+/-)小鼠模型,在孕鼠的E10、E11、E12天,取出孕鼠放在超净台内,用颈部脱臼法处死孕鼠,在严格的无菌操作条件下,取出胎鼠。胎鼠被取出后,分别采用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)技术鉴定得到6只NIPBL~(+/-)胎鼠的肢芽作为实验组,和6只NIPBL~(+/+)胎鼠的肢芽作为对照组,然后分离胎鼠的四肢,放入液氮和-80℃冰箱备用;最后采用定量逆转录聚合酶链式反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)技术分别检测实验组和对照组胎鼠肢芽内Shh基因的表达情况。结果:用NIPBL-Loxp小鼠与Cre小鼠建立NIPBL~(+/-)基因剔除小鼠模型,NIPBL~(+/-)小鼠相互杂交通过RT-PCR技术鉴定出作为实验组和对照组的胎鼠。其中,实验组和对照组胎鼠肢芽内的Shh基因在E10、11、12天均有表达,而且实验组和对照组胎鼠肢芽内的Shh基因在E10天的ΔCt值>E12天的ΔCt值>E11天的ΔCt值(ΔCt值越高,Shh基因的表达水平越低),表明在不同的孕期(E10、11、12天)天数下相比较,实验组和对照组胎鼠肢芽内Shh基因表达趋势是先升后降,差异有统计学意义(P<0.01);在相同的孕期(E10、11、12天)天数内,实验组Shh基因的ΔCt值大于对照组ΔCt值,表明实验组胎鼠肢芽内Shh基因的表达水平低于对照组,这种差异也有统计学意义(P<0.01)。结论:在孕鼠的E10、E11、E12天,NIPBL~(+/-)基因剔除的胎鼠抑制其肢芽内Shh基因的表达,说明Shh基因在胎鼠肢芽发育中的特定时期进行表达,有助于人们更好地了解德朗热综合征中骨骼畸形的发病机制。(本文来源于《石河子大学》期刊2018-05-01）
谭凤彪[2]（2017）在《ApoM基因剔除小鼠模型构建及其在胰岛素抵抗信号通路中的作用研究》一文中研究指出第一部分ApoM基因剔除小鼠模型的构建目的：Crispr/Cas9技术是用于靶向编辑细胞和动物基因组的重要方法。为探究ApoM对糖代谢的影响,本研究采用Crispr/Cas9技术构建ApoM基因敲除的杂合子小鼠模型(ApoM+/–小鼠),将其与野生型的C57BL/6J(ApoM~(+/+)小鼠)小鼠进行合笼繁育,获得敲除ApoM基因的纯合子小鼠模型(ApoM~(–/–)小鼠)。方法：利用基因组靶向编辑技术Crispr/Cas9,针对ApoM基因外显子ATG之后的共有序列设计导向核糖核苷酸(g RNA)。利用Not I位点将Cas9质粒线性化,分别通过相应的试剂盒在体外进行转录并纯化,将纯化后的样品稀释后注射到来自C57BL/6J雌鼠的受精卵的胞质中,并将受精卵移植到同品系假孕小鼠输卵管内。待孕鼠产仔后,剪尾进行基因型鉴定。根据测序结果,选取基因序列移码的小鼠与野生型小鼠交配,获得子代小鼠,经尾基因型鉴定,并根据测序结果验证ApoM基因是否敲除成功,后续通过建模成功的小鼠进行繁育获得敲除ApoM基因的纯合子模型小鼠。并分别从RNA水平、DNA水平、蛋白表达水平进行验证。结果：利用Crispr/Cas9技术成功构建敲除ApoM基因的杂合子模型小鼠,通过建模成功的小鼠后续有选择性的繁育获得纯合子小鼠。结论：Crispr/Cas9技术能够构建ApoM基因剔除的杂合子模型小鼠,ApoM基因剔除其遗传表型能稳定的遗传给后代。第二部分ApoM基因剔除后小鼠组织形态变化及其对胰岛素信号通路的影响目的：探究ApoM基因剔除后小鼠组织结构形态变化及ApoM基因剔除对胰岛素代谢通路PI3K、MAPK、AMPK信号通路的影响。方法：以ApoM~(+/+)小鼠和ApoM~(+/+)AML12细胞为对照。1.采用全基因表达谱芯片技术分析ApoM-/-小鼠基因表达谱的改变。2.利用光学显微镜和电子透射显微镜观察ApoM-/-小鼠心、肝、肾、胰、睾丸、附睾、脂肪、肺组织形态结构改变。3.采用Crispr/Cas9技术构建ApoM~(–/–)AML12细胞模型,利用油红O染色检测ApoM~(–/–)的AML12细胞内脂代谢情况。4.采用Western blot技术检测ApoM~(–/–)小鼠和ApoM~(–/–)AML12细胞内Ins R/IRS/PI3K/AKT信号通路上游蛋白IRS1、IRS2、IRS3、IRS4及下游蛋白PDK-1、AKT、GSK3;MAPK信号通路Raf、MAPK、ERK蛋白;AMPK信号通路IRS、Enos、AKT、rab-GTP、AS160蛋白的表达水平及磷酸化水平。结果：1.全基因表达谱芯片分析发现ApoM~(–/–)小鼠较ApoM~(+/+)小鼠基因表达谱发生改变,包括204对上调基因和204对下调基因。2.HE染色显示ApoM~(–/–)小鼠较ApoM~(+/+)小鼠肝组织细胞脂肪变性明显,脂滴增多较为明显,有少量的炎性细胞浸润;胰岛数量明显减少,胰岛体积变小,与周围组织边界不清晰,部分胰岛萎缩消失。胰岛细胞变性水肿,胰岛细胞减少,胰岛有少量出血,胰腺间质充血;脂肪细胞明显增大,部分脂肪细胞相互融合。电镜显示ApoM~(–/–)小鼠肝组织糖原堆积明显增加,储脂细胞明显增大,脂滴增多,线粒体肿胀明显;肾组织在肾小管区有脂滴存在,肾小球足细胞增生;肺组织的肺间膈内有脂滴沉积。3.ApoM~(–/–)AML12细胞内脂质堆积。4.ApoM-/-小鼠肝组织P-IRS1/2、IRS4、PI3K、P-AKT、PDK1、AS160蛋白表达降低;P-c-Raf蛋白表达明显降低,GSK3β、P-ERK蛋白表达增加;ampk蛋白表达增加。结论：1.ApoM~(–/–)小鼠其糖脂代谢重要组织(肝、胰、肾、肺)结构变化明显,有脂质和糖原沉积,脂肪细胞增大,且ApoM~(–/–)AML12细胞内也呈现脂质堆积现象,提示ApoM可能参与糖脂代谢。2.ApoM可能通过影响胰岛素代谢通路PI3K、MAPK、AMPK信号通路中的相关蛋白表达而参与糖脂代谢。(本文来源于《皖南医学院》期刊2017-05-01）
蒋雪,章尧,王李卓,王云,夏礼斌[3]（2016）在《Sidt2基因剔除小鼠的肺部形态学改变》一文中研究指出目的:观察Sidt2基因剔除小鼠的肺组织超微结构,探讨Sidt2基因在肺脏形态发育过程中的作用。方法:将利用基因打靶及同源重组技术获得的Sidt2基因全身剔除小鼠和野生型B129品系小鼠合笼交配,鼠尾提取DNA进行基因型鉴定,挑选出子代Sidt2-/+小鼠,同笼交配,再挑选出子代Sidt2-/-小鼠为实验组,以同窝野生型小鼠为对照,进行DNA、RNA和Western鉴定,并行肺组织光镜和电镜形态学观察。结果:通过DNA、RNA、蛋白质水平验证模型构造成功。光镜下对照鼠肺泡壁光滑,仅有少量粒细胞浸润;模型鼠肺泡间质内毛细血管扩张、充血,多处炎症细胞呈灶状分布。电镜下对照鼠的肺组织形态较规则;模型鼠可见肺泡上皮细胞崩解,毛细血管充血及基底膜增厚。结论:Sidt2基因剔除可影响小鼠肺组织形态,表现为细胞坏死,毛细血管充血及基底膜增厚,大量炎症细胞浸润,造成肺损伤。(本文来源于《皖南医学院学报》期刊2016年04期）
蒋雪[4]（2016）在《Sidt2基因剔除小鼠的肺形态学改变及相关信号通路研究》一文中研究指出目的:通过对Sidt2基因剔除(Sidt2-/-)小鼠的肺组织超微结构观察和相关分子学研究,探讨Sidt2基因对小鼠肺脏的形态学影响及与内质网应激、细胞凋亡相关的信号通路分析。方法:1、将利用LoxP-Flox-LoxP系统,基因重组及打靶技术获得的Sidt2-/-小鼠模型,与野生型B129品系小鼠合笼交配,鼠尾提取DNA进行基因型鉴定,挑选出子代Sidt2-/+小鼠,同笼交配,再挑选出子代Sidt2-/-、Sidt2-/+雄鼠为实验组,以同窝或相同批次出生的野生型雄鼠为对照。进行DNA、RNA和Western鉴定后行肺组织光镜和电镜观察形态学观察。2、行Sidt2-/-、Sidt2+/+小鼠肺组织的Bip和Caspase3 activity的免疫组化检测。3、Western blot检测内质网应激和凋亡相关分子:BIP、p-eif2α、ire1α、chop、Caspase3 activity、Caspase3。4、在人类非小细胞肺癌A549水平上用质粒干扰Sidt2的表达,进一步验证BIP表达情况。结果:1、从DNA、RNA、蛋白质水平验证模型构造成功。2、Sidt2-/-小鼠生长发育、应激反应等一般方面落后于野生型小鼠。光镜下对照组小鼠肺泡壁较光滑,仅有少许炎症细胞浸润;模型鼠肺泡间质内毛细血管扩张充血,炎症细胞呈多处灶状分布。电镜下对照组小鼠的肺上皮细胞结构较规则;模型鼠可见肺泡上皮细胞崩解坏死,毛细血管充血及基底膜增厚的表现。3、免疫组化检测发现Sidt2-/-小鼠肺组织的Bip和Caspase3 activity表达量比对照组的表达量低(P<0.05)。4、Western blot检测发现:Sidt2-/-、Sidt2-/+小鼠肺组织的BIP、p-eif2α、ire1α、Caspase3 activity、Caspase3表达量比对照组表达量低(P<0.05),但CHOP表达量正好相反,在Sidt2-/-、Sidt2-/+小鼠肺组织的表达多于对照组(P<0.05)。5、质粒成功转染A549细胞,但Bip在蛋白水平的表达量没有明显改变(P>0.05)。结论:1、Sidt2-/-可影响小鼠肺组织形态,表现为细胞的坏死,毛细血管充血及基底膜的增厚,大量炎症细胞的浸润,造成肺部损伤。2、Sidt2作为溶酶体膜蛋白参与了细胞凋亡的进程。Sidt2-/-抑制Bip、p-eif2α、ire1α而抑制了部分内质网应激途径,通过抑制Caspase3 activity、Caspase3表达阻碍了正常细胞凋亡的进程,而使得细胞进入炎症、坏死阶段。其机制尚不十分明确,有待进一步研究。(本文来源于《皖南医学院》期刊2016-03-01）
郭杨,钟春龙,包金岗,曹阳,高阳[5]（2016）在《小鼠GCPⅡ基因剔除对脑外伤后脑水肿的影响》一文中研究指出目的研究普通小鼠和GCPⅡ基因剔除后小鼠脑外伤后脑水肿的变化,探讨并研究GCPⅡ基因剔除后对脑外伤后脑水肿的影响。方法雄性C57BL/6J小鼠随机20只,随机分为两组(C57BL/6J小鼠假手术组10只,C57BL/6J小鼠颅脑损伤组10只)。雄性GCPⅡ基因剔除小鼠随机20只,随机分为两组(GCPⅡ基因剔除小鼠假手术组10只,GCPⅡ基因剔除小鼠颅脑损伤组10只),应用PinPointTMPCI3000精细颅脑撞击仪,设定参数(打击深度为1.5mm;打击时间为80ms,打击的速度为1.5m/s),精确撞击小鼠脑皮质。伤后24h,行干湿重法测脑组织含水量,Western Blot检测AQP4蛋白的表达,MRI检测水肿程度,伊文思蓝检测血脑屏障破坏程度。结果GCPⅡ基因剔除小鼠较C57BL/6J小鼠外伤后神经功能明显改善(P<0.05);GCPⅡ基因剔除小鼠脑组织含水量、水肿体积以及外伤区域T2 WI信号强度较C57BL/6J小鼠降低(P<0.05)。结论小鼠的GCPⅡ基因剔除后脑外伤后脑水肿较C57BL/6J小鼠明显减轻,进一步证明小鼠GCPⅡ基因敲除后对脑外伤后脑组织的保护作用。(本文来源于《立体定向和功能性神经外科杂志》期刊2016年01期）
杨慧,王晓楠,丁磊,封国生[6]（2015）在《Claudin家族基因剔除小鼠表型的研究进展》一文中研究指出密封蛋白(Claudin)是细胞间紧密连接的骨架蛋白,参与维持紧密连接的各种功能,其异常表达可破坏上皮细胞及内皮细胞的结构,导致其功能严重受损。近年来,关于Claudin基因不同生理作用的研究越来越受到人们的关注,基因剔除技术将在整体动物水平研究基因功能成为可能。该文就Claudin家族基因剔除后的小鼠表型进行综述,旨在了解Claudin基因的生理功能。(本文来源于《医学综述》期刊2015年18期）
郭杨,钟春龙,包金岗,曹阳,高阳[7]（2015）在《小鼠GCPⅡ基因剔除对脑外伤后神经元的影响》一文中研究指出目的研究谷氨酸羧肽酶Ⅱ(GCPⅡ)基因剔除小鼠和野生型C57BL/6J小鼠脑外伤后损伤周围区神经元的凋亡以及神经功能变化。方法雄性C57BL/6J小鼠随机20只,雄性GCPⅡ基因剔除小鼠随机20只,随机分为4组(C57BL/6J小鼠假手术组10只,GCPⅡ基因剔除小鼠假手术组10只,C57BL/6J小鼠颅脑损伤组10只,GCPⅡ基因剔除小鼠颅脑损伤组10只),应用PinPointlTM PCI3000精细颅脑撞击仪,设定参数(打击深度为1.5mm,打击时间为80ms,打击的速度为1.5m/s),精确撞击小鼠脑皮质。伤后24h行神经功能评分,免疫荧光染色,损伤周围区凋亡神经元计数。结果GCPII基因剔除小鼠较C57BL/6J小鼠外伤后神经功能明显改善(P<0.05);损伤周围区神经元凋亡数值较C57BL/6J小鼠组明显降低(P<0.05)。结论小鼠GCPⅡ基因剔除后,脑外伤后损伤周围区神经元凋亡数较C57BL/6J小鼠明显减少,神经功能明显改善,进一步证明小鼠GCPⅡ基因敲除后对脑外伤后脑组织的保护作用。(本文来源于《立体定向和功能性神经外科杂志》期刊2015年03期）
郭杨[8]（2015）在《GCPⅡ基因剔除对颅脑外伤后神经元的保护作用以及对外伤性脑水肿的影响》一文中研究指出研究背景脑外伤是神经系统疾病中最常见的损伤,对人类的生命有着严重的威胁,其致残率、患病率和死亡率居高不下,并且每年都有上升的趋势。我国人口基数大人口增长快,无论患病还是发病数量都是惊人。早前报道全球每年有近1000万人发生脑外伤,其中有580万人因脑外伤而死亡,占到世界死亡人口的10%,根据预测到2020年脑外伤将成为全球第叁大类疾病。我国在研究脑外伤方面,主要侧重在临床方面,如脑外伤的救治、预后以及康复等方面,涉及到颅脑外伤的急救,各种治疗方式的优缺点,治疗后的认知功能障碍护理、后遗症等等,然而对脑外伤的内源性保护机制的研究相对较少。脑外伤引起的神经损伤主要为直接损伤和继发性的间接脑损伤,直接或间接引起的神经元的凋亡以及外伤后脑水肿引起的继发性损害。大脑是动物和人类的一个重要的组织器官,大脑皮层包括大量的神经元,是控制行动、语言、思维活动的重要区域。科学家在人类和动物的实验中发现,脑外伤后大脑皮层的损伤,可以引起严重的行为、语言、思维活动的损害,严重的影响了患者的病情和预后,目前尚缺乏有效的治疗和保护措施,尤其是内源性的保护机制。因此对脑外伤后大脑的保护机制以及措施的研究成为国际和国内近几年研究的热门话题。颅脑损伤后,遭受打击的神经细胞会释放以谷氨酸为主的兴奋型神经递质,激活谷氨酸受体并且直接或者间接的启动电压依赖性Ca2+通道,Ca2+的大量内流使细胞内Ca2+超载。Ca2+与钙离子调节蛋白相结合,进一步的反应作用而使得皮层神经元受到损害。另一方面,产生大量超氧阴离子产生,进一步反应生成过氧化亚硝酸盐离子或亚硝酸根离子,进而进一步抑制能量代谢。能量代谢的抑制使细胞内膜损伤和自由基增加,致使细胞内线粒体肿胀等多种因素引起细胞的凋亡。近年来我们在研究中发现在脑外伤脑损伤后释放大量谷氨酸的同时也释放着一种具有神经保护作用的肽类神经递质N-乙酰天冬氨酸谷氨酸(N-acetylaspartylglutamate,NAAG),NAAG对外伤后谷氨酸的释放具有极强的抑制作用。NAAG肽酶位于胶质细胞上,然而NAAG释放后很快被NAAG肽酶水解成N-乙酰天冬氨酸(N-acetylaspartate,NAA)及谷氨酸,因此而失去了神经保护作用。由此NAAG肽酶的活性被抑制,从而抑制NAAG的降解,提高突触间隙NAAG的浓度,进而减少谷氨酸释放在病理进程中的进一步损害。NAAG肽酶抑制剂在大量的试验中被成功合成并在谷氨酸过度释放的谷氨酸毒性模型中进一步证实了其保护作用,然抑制剂易受环境以及自身药物浓度等方面的影响而影响其发挥作用的稳定度,NAAG肽酶基因剔除后能更稳定的消除NAAG肽酶的表达从而起到神经保护作用,目前在基因层面的研究目前鲜为少见。在本试验中,应用控制性脑皮质撞击仪,对前期成功建立起来的GCPⅡ基因剔除模型小鼠进行打击制作中度颅脑损伤模型的研究,通过一系列检测指标,观察大脑皮层损伤以及继发性变化,从而进一步认证GCPⅡ基因剔除对小鼠脑外伤后脑组织的保护作用。第一部分小鼠GCPⅡ基因剔除对脑外伤后神经元的影响的研究目的通过对小鼠中度颅脑损伤模型的建立,对小鼠大脑损伤周围区神经元的凋亡情况进行研究,探讨GCPⅡ基因剔除对脑外伤后神经元的影响。方法雄性C57BL/6J小鼠随机20只,随机分成两组(C57BL/6J小鼠假手术组10只,C57BL/6J小鼠颅脑损伤组10只);雄性GCPⅡ基因剔除小鼠20只,随机分成两组(GCPⅡ基因剔除小鼠假手术10只,GCPⅡ基因剔除小鼠颅脑损伤组10只)(均为8-12W,体重20-25g,均由上海南方模式生物研究中心提供)。取0.6%戊巴比妥溶液,80mg/kg对小鼠行腹腔注射麻醉;将小鼠固定于脑立体定向仪(Stoeling Inc.USA);并在人字缝和矢状缝的交界处消毒。作正中切口,镊子分开头皮并用骨膜剥离子剥离骨膜;电钻在人字缝之间和右侧冠状缝、中线旁3mm处进行颅骨钻孔,做出直径为3mm的骨窗并暴露完整硬脑膜;应用Pin PointTMPCI3000精细颅骨撞击仪(Hatteras Instruments Inc.USA)设定打击参数(打击深度1.0mm;打击时间均为80ms;打击速度均为1.5m/s),以直径3mm的打击头行精确撞击小鼠脑皮质。还回骨瓣,头皮进行缝合。假手术组在麻醉后暴露骨窗,对脑皮质不打击,还纳骨瓣并缝合头皮。伤后24h对小鼠进行神经功能评分,断头、取脑、切片后行免疫荧光染色,通过对损伤周围区域凋亡神经元进行计数,观察不同组别神经元凋亡的变化。结果神经功能评分的结果表明,实验结果显示脑外伤后GCPⅡ基因剔除小鼠在神经功能综合评分方面相对C57BL/6J小鼠明显的改善和提高,外伤后GCPⅡ基因剔除小鼠与C57BL/6J小鼠神经功能评分差距有统计学意义(p<0.05),GCPⅡ基因剔除小鼠较C57BL/6J小鼠外伤后神经元凋亡数量明显减少,两组数值差距具有统计学意义(p<0.05)。结论通过研究我们发现小鼠GCPⅡ基因敲除后,脑组织损伤周围区域神经元凋亡细胞数目明显减少,小鼠神经功能明显改善。第二部分小鼠的GCPⅡ基因剔除对脑外伤后脑水肿的影响的研究目的研究普通小鼠和GCPⅡ基因剔除后小鼠脑外伤后脑水肿以及神经功能的变化,探讨并研究GCPⅡ基因剔除后对脑外伤后脑水肿的影响。方法雄性C57BL/6J小鼠随机20只,随机分成两组(C57BL/6J小鼠假手术组10只,C57BL/6J小鼠颅脑损伤组10只);雄性GCPⅡ基因剔除小鼠20只,随机分成两组(GCPⅡ基因剔除小鼠假手术10只,GCPⅡ基因剔除小鼠颅脑损伤组10只)(均为8-12W,体重20-25g,均由上海南方模式生物研究中心提供)。应用Pin PointTMPCI3000精细颅脑撞击仪,设定参数(打击深度为1.0mm;打击时间为80ms,打击的速度为1.5m/s),精确撞击小鼠脑皮质。小鼠颅脑外伤后24h,进行干湿重比较法测定脑组织含水量,MRI扫描并测量计算损伤区域水肿体积以及T2WI序列的信号强度,行大脑外伤周围区域免疫荧光染色,检测Western Blot检测AQP4蛋白的表达,检测血脑屏障破坏程度。结果GCPⅡ基因剔除小鼠较C57BL/6J小鼠外伤后神经功能明显善(p<0.05);GCPⅡ基因剔除小鼠脑组织含水量、水肿体积以及外伤区域T2WI信号强度较C57BL/6J小鼠组降低(p<0.05);GCPⅡ基因剔除小鼠明显减少损伤侧伊文思蓝含量(p<0.05);GCPⅡ基因剔除小鼠免疫荧光检测到脑组织损伤区域周围星形胶质细胞AQP4蛋白含量明显下降;Western Blot检测AQP4蛋白的表达明显下降(p<0.05)。结论小鼠的GCPⅡ基因剔除后脑外伤后脑水肿较C57BL/6J小鼠明显减轻,神经功能明显改善,进一步证明小鼠GCPⅡ基因敲除后对脑外伤后脑组织的保护作用。(本文来源于《上海交通大学》期刊2015-04-01）
蔡泽远[9]（2014）在《小鼠Mrad9和Mrad1基因剔除引发肿瘤易感性及其蛋白功能差异》一文中研究指出生物体的遗传物质无时不刻都面临着内源和外源因素造成各种各样损伤,这些损伤如果不及时修复的话,就会导致错误遗传物质的不断积累,最终造成生物体的灾难性后果,譬如癌症。幸运的是经过长期的进化,生物已经发展了一套近乎完美的DNA损伤修复机制来清除错误遗传物质的积累。Rad9,Rad1和Hus1是一组从酵母到人等真核细胞生物中高度保守的基因,其蛋白质产物Rad9,Rad1和Hus1能够形成9-1-1异源叁聚复合体,在参与细胞周期监控点控制和DNA损伤修复以及细胞凋亡方面起着重要作用。目前的研究认为,Rad9和Rad1蛋白除了形成9-1-1复合体外各自以单体的形式发挥抑癌作用。为了从生物个体水平回答Rad9和Rad1是否在9-1-1复合体以外发挥着作用,我们以具有同一遗传背景的Mrad9~(+/-)和Mrad1~(+/-)小鼠为实验对象,用DMBA+TPA诱导肿瘤发生,实验表明Mrad9+/和 Mrad1~(+/-)小鼠具有不同的肿瘤发生率,因此Rad9和Rad1蛋白并非以严格形成9-1-1复合体的形式发挥作用。同时Mrad1~(+/-)小鼠比Mrad9~(+/-)小鼠具有更高的肿瘤发生率,说明Rad1蛋白比Rad9蛋白在抑制肿瘤方面发挥着更重要的作用。为了阐明Rad1蛋白与Rad9蛋白在抑制肿瘤方面的功能差异,我们从Mrad9~(+/-)和Mrad1~(+/-)乳鼠中分离角质细胞并进行生长曲线实验。结果显示Mrad9剔除明显阻滞了角质细胞的生长,预示着Rad9与Rad1在细胞周期调控以及细胞凋亡中扮演了不同的角色。进一步的实验发现,Mrad9~(+/-)和Mrad1~(+/-)角质细胞细胞周期和凋亡以及DNA双链断裂方面存在显着差异,同时Mrad9~(+/-)角质细胞显着激活了 p53-p21通路,通过以上实验说明Rad9与Rad1蛋白具有独立功能,并非以严格异源叁聚体形式发挥功能。(本文来源于《福建农林大学》期刊2014-04-01）
满晓朏,周后德[10]（2013）在《利用IRS-1基因剔除小鼠研究其参与骨髓基质细胞定向分化的机制》一文中研究指出目的研究IRS-1剔除小鼠表型、血糖调节能力及胰岛素敏感性、进食量、骨密度等的变化,并利用IRS-1~(-/-)小鼠模型探讨IRS-2是否对IRS-1的缺失产生代偿及其可能的机制。方法1.从Jackson Laboratory引进IRS-1全身基因剔除杂合子及野生型小鼠,通过杂交及基因鉴定获得IRS-1~(-/-)小鼠,比较IRS-1~(+/+)、IRS-1~(+/-)、IRS-1~(-/-)叁种基因型小鼠表型、血糖、进食量及运(本文来源于《中华医学会第五次中青年骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议论文集》期刊2013-06-27）
基因剔除论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
第一部分ApoM基因剔除小鼠模型的构建目的：Crispr/Cas9技术是用于靶向编辑细胞和动物基因组的重要方法。为探究ApoM对糖代谢的影响,本研究采用Crispr/Cas9技术构建ApoM基因敲除的杂合子小鼠模型(ApoM+/–小鼠),将其与野生型的C57BL/6J(ApoM~(+/+)小鼠)小鼠进行合笼繁育,获得敲除ApoM基因的纯合子小鼠模型(ApoM~(–/–)小鼠)。方法：利用基因组靶向编辑技术Crispr/Cas9,针对ApoM基因外显子ATG之后的共有序列设计导向核糖核苷酸(g RNA)。利用Not I位点将Cas9质粒线性化,分别通过相应的试剂盒在体外进行转录并纯化,将纯化后的样品稀释后注射到来自C57BL/6J雌鼠的受精卵的胞质中,并将受精卵移植到同品系假孕小鼠输卵管内。待孕鼠产仔后,剪尾进行基因型鉴定。根据测序结果,选取基因序列移码的小鼠与野生型小鼠交配,获得子代小鼠,经尾基因型鉴定,并根据测序结果验证ApoM基因是否敲除成功,后续通过建模成功的小鼠进行繁育获得敲除ApoM基因的纯合子模型小鼠。并分别从RNA水平、DNA水平、蛋白表达水平进行验证。结果：利用Crispr/Cas9技术成功构建敲除ApoM基因的杂合子模型小鼠,通过建模成功的小鼠后续有选择性的繁育获得纯合子小鼠。结论：Crispr/Cas9技术能够构建ApoM基因剔除的杂合子模型小鼠,ApoM基因剔除其遗传表型能稳定的遗传给后代。第二部分ApoM基因剔除后小鼠组织形态变化及其对胰岛素信号通路的影响目的：探究ApoM基因剔除后小鼠组织结构形态变化及ApoM基因剔除对胰岛素代谢通路PI3K、MAPK、AMPK信号通路的影响。方法：以ApoM~(+/+)小鼠和ApoM~(+/+)AML12细胞为对照。1.采用全基因表达谱芯片技术分析ApoM-/-小鼠基因表达谱的改变。2.利用光学显微镜和电子透射显微镜观察ApoM-/-小鼠心、肝、肾、胰、睾丸、附睾、脂肪、肺组织形态结构改变。3.采用Crispr/Cas9技术构建ApoM~(–/–)AML12细胞模型,利用油红O染色检测ApoM~(–/–)的AML12细胞内脂代谢情况。4.采用Western blot技术检测ApoM~(–/–)小鼠和ApoM~(–/–)AML12细胞内Ins R/IRS/PI3K/AKT信号通路上游蛋白IRS1、IRS2、IRS3、IRS4及下游蛋白PDK-1、AKT、GSK3;MAPK信号通路Raf、MAPK、ERK蛋白;AMPK信号通路IRS、Enos、AKT、rab-GTP、AS160蛋白的表达水平及磷酸化水平。结果：1.全基因表达谱芯片分析发现ApoM~(–/–)小鼠较ApoM~(+/+)小鼠基因表达谱发生改变,包括204对上调基因和204对下调基因。2.HE染色显示ApoM~(–/–)小鼠较ApoM~(+/+)小鼠肝组织细胞脂肪变性明显,脂滴增多较为明显,有少量的炎性细胞浸润;胰岛数量明显减少,胰岛体积变小,与周围组织边界不清晰,部分胰岛萎缩消失。胰岛细胞变性水肿,胰岛细胞减少,胰岛有少量出血,胰腺间质充血;脂肪细胞明显增大,部分脂肪细胞相互融合。电镜显示ApoM~(–/–)小鼠肝组织糖原堆积明显增加,储脂细胞明显增大,脂滴增多,线粒体肿胀明显;肾组织在肾小管区有脂滴存在,肾小球足细胞增生;肺组织的肺间膈内有脂滴沉积。3.ApoM~(–/–)AML12细胞内脂质堆积。4.ApoM-/-小鼠肝组织P-IRS1/2、IRS4、PI3K、P-AKT、PDK1、AS160蛋白表达降低;P-c-Raf蛋白表达明显降低,GSK3β、P-ERK蛋白表达增加;ampk蛋白表达增加。结论：1.ApoM~(–/–)小鼠其糖脂代谢重要组织(肝、胰、肾、肺)结构变化明显,有脂质和糖原沉积,脂肪细胞增大,且ApoM~(–/–)AML12细胞内也呈现脂质堆积现象,提示ApoM可能参与糖脂代谢。2.ApoM可能通过影响胰岛素代谢通路PI3K、MAPK、AMPK信号通路中的相关蛋白表达而参与糖脂代谢。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因剔除论文参考文献
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