体外三维血管生成模型的建立及肿瘤细胞分泌的MCP-1/VEGF对该模型的影响

体外三维血管生成模型的建立及肿瘤细胞分泌的MCP-1/VEGF对该模型的影响

论文摘要

目的:建立体外三维血管生成模型,观察肿瘤细胞分泌的单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)/血管内皮生长因子(VEGF)对该模型血管生成的影响。方法:分别将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)及小鼠内皮细胞SVEC4-10EE2包被于磁珠表面,与纤维蛋白原混合后接种于含有凝血酶的细胞培养板中进行培养,包被在磁珠上的内皮细胞在含有纤维蛋白凝聚物的三维空间中生长成脉管样结构,以建立体外血管生成的三维模型。在模型中分别加入肿瘤细胞(人乳腺癌细胞MDA-MB-231和小鼠髓样乳腺癌细胞E0771)共培养,观察肿瘤细胞在体外对血管生成的影响。用酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测肿瘤细胞培养上清液中影响血管生成的MCP-1和VEGF的浓度,并在内皮细胞-肿瘤细胞共培养体系中加入MCP-1受体C-C趋化因子受体2(CCR2)的拮抗剂以及VEGF受体的抑制剂司马沙尼(SU5416),观察其对血管生成的影响。收集肿瘤细胞刺激后的肿瘤细胞培养上清液作为条件培养液,加入到内皮细胞HUVECs或SVEC4-10EE2单独培养的血管生成系统中,在加入或不加入CCR2的拮抗剂以及SU5416的情况下分别观察其对血管生成的影响。结果:在不加入任何影响血管生成的物质时,内皮细胞HUVECs和SVEC4-10EE2均能在体外培养基中形成多细胞组成的脉管样结构,即建立起体外三维血管生成模型;加入肿瘤细胞(MDA-MB-231和E0771)共培养,可显著促进脉管样结构形成(P<0.05)。ELISA检测结果显示,肿瘤细胞上清液中MCP-1和VEGF水平显著增高(P<0.05),MCP-1具有体外促进三维培养体系中脉管生成作用,而在加入MCP-1受体CCR2的拮抗剂以及VEGF受体的抑制剂SU5416之后,可显著抑制血管形成(P<0.05)。条件培养液可促进内皮细胞体外脉管生成,而这一作用可以被CCR2的拮抗剂以及SU5416阻断(P<0.05)。结论:成功建立了体外三维血管生成模型,肿瘤细胞共培养可以显著促进内皮细胞脉管形成,机制可能与其分泌的MCP-1和VEGF有关。

论文目录

  • 材 料 和 方 法
  •   1 主要试剂
  •   2 主要方法
  •     2.1 细胞培养
  •     2.2 体外三维血管生成模型的建立
  •     2.3 体外内皮细胞-肿瘤细胞三维共培养系统
  •     2.4 血管生成结果判断
  •     2.5 酶联免疫法(ELISA)检测细胞培养上清液中细胞因子含量
  •     2.6 VFGF及MCP-1对血管生成的影响
  •   3 统计学处理
  • 结 果
  •   1 血管内皮细胞体外三维血管生成模型
  •   2 肿瘤细胞体外促进血管生成
  •   3 肿瘤细胞体外促进MCP-1和VEGF分泌
  •   4 条件培养基(conditioned media, CM)对体外血管生成的影响
  •   5 VEGF参与肿瘤细胞体外诱导的血管生成
  •   6 MCP-1参与肿瘤细胞促进的体外血管生成
  • 讨 论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 胡敏,韩要武,李璐,马克龙,吕磊,张道芹,杨建澳,汪思应

    关键词: 血管生成,单核细胞趋化蛋白,血管内皮生长因子,转移,侵袭

    来源: 中国病理生理杂志 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 肿瘤学

    单位: 安徽中医药大学,安徽医科大学

    基金: 安徽省自然科学基金资助项目(No.1608085MH187),2017年安徽省留学回国人员创新创业扶持计划,中国博士后科学基金第59批面上资助项目(No.2016M592037),2019大学生创新创业训练计划项目(No.201910369023)

    分类号: R730.2

    页码: 2187-2193

    总页数: 7

    文件大小: 4419K

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