导读:本文包含了粘附素保守区论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:幽门,螺杆,保守,伤寒,基因,免疫,沙门。
粘附素保守区论文文献综述
白杨,陈烨,王继德,唱韶红,张兆山[1]（2004）在《表达幽门螺杆菌粘附素保守区的减毒鼠伤寒沙门菌免疫治疗作用的研究》一文中研究指出探讨表达幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)粘附素保守区 (AB)的减毒鼠伤寒沙门菌X4 0 72 (pYA2 4 8 AB)的免疫治疗效果 ,以及可能的免疫治疗机制 ,以确定X4 0 72 (pYA2 4 8 AB)在Hp疫苗研制中的应用价值 .建立Hp感染小鼠模型 ,在该模型中评价X4 0 72 (pYA2 4 8 AB)治疗Hp感染的效果 ,运用细菌培养法观察Hp根除率及定植量的改变 ,流式细胞术分析免疫后小鼠脾细胞亚型 ,IL 2和IL 4细胞依赖株的细胞测活法检测细胞因子 ,ELISA法检测小鼠血清及肠液中抗AB抗体产生情况 .结果表明 ,免疫治疗后疫苗治疗组根除率为 5 3 3% ,显着高于X4 0 72 (pYA2 4 8)和PBS对照组 (P <0 0 1 ) .未根除Hp的小鼠 ,疫苗治疗组Hp的定植密度明显低于其他两组 (P <0 0 1 ) .应用流式细胞仪分析免疫小鼠脾CD4 + /CD8+ T淋巴细胞的比值时 ,发现疫苗治疗组和鼠伤寒菌对照组的比值均显着高于PBS对照组 (P <0 0 5 ) ,而疫苗治疗组的比值又显着高于鼠伤寒菌对照组 (P <0 0 5 ) .进一步对细胞因子进行分析发现 ,与PBS对照组相比免疫治疗组和鼠伤寒菌对照组IL 2和IL 4明显升高(P <0 0 5 ) .同时 ,免疫治疗组与鼠伤寒菌对照组相比 ,IL 4增高明显 (P <0 0 5 ) .针对AB的抗体测定结果发现 ,仅在免疫治疗组的小鼠肠液中检测到了IgA抗体(本文来源于《生物化学与生物物理进展》期刊2004年01期）
白杨,张亚历,王继德,张兆山,周殿元[2]（2003）在《幽门螺杆菌粘附素基因保守区的克隆及免疫原性研究》一文中研究指出目的 构建表达幽门螺杆菌 (Hp) 4种粘附素 (BabA2 、AlpA、AlpB和HopZ)保守区蛋白质的候选菌株 ,并研究其免疫原性。方法 利用PCR技术扩增粘附素保守区 (命名为CB)基因 ,将其定向插入pET 2 2b(+)载体 ,在BL2 1(DE3)大肠杆菌中表达 ;表达产物经亲和层析纯化和免疫印迹鉴定 ,ELISA法测定Hp感染者血清中抗CB抗体。结果 构建了 4种粘附素保守区的重组质粒 ,测序显示CB基因长 5 88bp ,编码 195个氨基酸。SDS PAGE和凝胶扫描分析 ,CB基因表达的蛋白质相对分子质量约为 2 2 5 0 0 ,其重组蛋白质表达量占菌体总蛋白质的 2 9%。经免疫印迹证实该重组蛋白质可以被Hp阳性患者血清所识别 ,ELISA法共检测了 5 5份血清 ,以快速尿素酶实验 (RUT)作为平行对照 ,两法的评价判断一致性程度的指标卡帕系数为 0 .76。结论 CB有可能成为一种有效的疫苗 ,用于幽门螺杆菌感染的预防和治疗。(本文来源于《中华医学杂志》期刊2003年09期）
白杨,张亚历,陈烨,王继德,杨云生[3]（2002）在《幽门螺杆菌粘附素保守区蛋白的制备及其免疫原性、安全性和粘附作用的体外评价》一文中研究指出目的通过基因工程技术制备幽门螺杆菌(Hp)保守区(AB)蛋白,并在体外探讨其安全性、免疫原性和黏附作用,以确定AB在卸疫苗研制中的应用价值.方法运用PCR技术从Hp总DNA中扩增出AB结构基因.装入pET-22b(+)载体进行序列及生物信息学分析,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,采用金属螯合亲和层析(MCAC)的方法纯化AB,免疫印迹法检测其抗原性;流式细胞术检测AB致T细胞表达FasL的作用,ELISA法测定Hp感染者血清中抗AB抗体,MTT法测定T细胞对AB的增殖反应,光镜计数法研究AB抗体对Hp与胃癌细胞粘附的影响.结果成功构建了AB的重组质粒pET-22b(+)/AB,序列分析显示获得了段588 bp的基因,完整的包含了粘附素C-端的7个保守区,Parker法和Welling法分析显示AB具有良好的抗原性。进一步应用INTERNETExPASY、NNPREDICT、ISREC等生物信息软件分析,发现其为膜孔素样结构,是跨膜区膜外区域的重要表位组成部分。在Genebank中BLAST分析了836767个蛋白序列,与其具有同源性者均为厅声外膜蛋白序列。蛋白电泳分析和凝胶扫描表明获得了高效表达AB的克隆株,其分子量为22.5kD,占菌体总蛋白的29.6％,其中可溶性表达占上清的21.9％,纯化后获得纯度达90％的重组蛋白AB,免疫印迹显示该蛋白可被AlpA兔抗血清抗体识别;体外安全性实验表明AB无明显调节T细胞表达FasL的作用;ELISA法共检测了55份血清,同时以RUT作为平行对照,两法的评价判断一致性程度的指标卡帕系数为0.76.同时,低剂量AB即可刺激Hp+PBL的增殖:AB抗血清能部分阻断Hp与胃癌细胞系的粘附,在光镜下表现为经抗AB兔血清预处理后,每细胞周围粘附的细菌数较免疫前兔血清预处理组显着减少(p<0.05).结论获得HeAB的基因工程蛋白产物,为Hp疫苗研制提供了一种新抗原,生物信息学分析显示其为良好的抗原成分;体外实验证实AB是安全的、具有免疫原性的Hp菌体成分,既可以刺激体液免疫,又能够提高细胞免疫,并已其抗体还可防止Hp与胃上皮细胞的粘附。(本文来源于《现代消化及介入诊疗》期刊2002年04期）
白杨[4]（2002）在《表达幽门螺杆菌粘附素保守区的减毒鼠伤寒沙门菌的构建及其免疫治疗作用的研究》一文中研究指出背景／目的：幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的主要病因，与胃腺癌、胃黏膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤的发生亦密切相关。临床实践证明，消化性溃疡愈合后Hp仍(+)者一年复发率达50％以上；根除Hp后不仅溃疡可以愈合，而且一年复发率可降至10％以下。此外，根除Hp后可以治愈MALT淋巴瘤。然而目前根除Hp的主要手段是抗菌疗法，尽管有较高的根除率，但存在诸如费用较高、耐药菌株的不断增加致根除率逐年降低、药物的副作用以及病人的依从性差等问题，并非理想的治疗方法。随着Doige等在1994年发现Hp疫苗的治疗作用后，免疫防治Hp成为治疗Hp最有希望的方法之一。鉴于Hp已证实的四种粘附素保守区(AB)是外膜蛋白(OMP)和膜孔素(porin)样成分，而外膜蛋白和膜孔素样成分是优秀的疫苗候选抗原。因此本研究的目的是：选择暴露于Hp表面的AB为抗原，首先通过基因工程技术将保守区基因克隆入原核表达载体并在大肠杆菌中表达，表达产物经过纯化后在体外探讨其安全性、免疫原性和生物活性；进一步将保守区基因克隆入减毒鼠伤寒沙门菌平衡-致死系统，在已感染Hp的小鼠模型中研究其免疫治疗效果，以及可能的免疫治疗机制，以确定AB及表达AB的减毒鼠伤寒沙门菌在Hp疫苗研制中的应用价值。 方法：(1)运用PCR技术从Hp总DNA中扩增出AB结构基因，装入pET-22b(+)载体进行序列及生物信息学分析，并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达，采用金属螯合亲和层析(MCAC)的方法纯化表达产物AB，免疫印迹法检测其抗原性；(2)二苯胺(DPA)法和流式细胞术检测AB致人外周血淋巴细胞(PBL)凋亡的作用，体外评价AB的安全性；光镜计数法研究AB抗体对Hp与胃癌细胞粘附的影响；ELISA法测定Hp感染者血清中抗AB抗体，MTT法测定PBL对AB的增殖反应，体外评价AB对体液和细胞免疫的影响；(3)采用缺失腺苷酸环化酶(Δcya)、环腺苷酸受体蛋白基因(Δcrp)以及天冬氨酸β-半醛脱氢酶(Δasd)的鼠伤寒沙门菌 比4072）作为宿主，将编码 AB的基因插入 ASd”的组成型表达载体PYA248，通过两次转化引入宿主菌，构建了表达AB基因平衡致死的减毒鼠伤寒沙门重组菌X4072（PYA248－AB），采用桥联法ELISA测定X4072 （pYA248－AB）培养上清液和裂解上清液中 AB的抗原性，参照 Meacock叙述的方法及重组菌的生长曲线的测定来确定重组菌株的稳定性，通过C57BL巧小鼠口服测定半致死量来确定重组菌的安全性；④建立 Hp感染小鼠模型，在该模型中评价 X4072（PYA248－AB）治疗 HP感染的效果，运用细菌培养法观察HP根除率及定植量的改变，流式细胞术分析免疫后小鼠脾细胞亚型，ILZ和 IL4细胞依赖株的细胞测活法检测细胞因子，ELISA 法检测小鼠血清及肠液中抗AB抗体产生情况，探讨X4072（PYA248－AB）可能的免疫治疗机制。 结果：＊）成功构建了AB的重组质粒pET22b卜＊／AB，序列分析显示获得了一段588hP的基因，完整的包含了粘附素C－端的7个保守区。Parker法和Welling法分析显示AB具有良好的抗原性和疏水性。进一步应用 INTERNET EXPASY、NNPREDICT、ISREC等生物信息软件分析，发现其为膜孔素样结构，是跨膜区膜外区域的重要表位组成部分。在Genebank中BLAST分析了836767个蛋白序列，与其具有同源性者均为HP外膜蛋白序列。蛋白电泳分析和凝胶扫描表明获得了高效表达AB的克隆株，其分子量为22．shD，占菌体总蛋白的29．6儿 其中可溶性表达占上清的21．9％，纯化后获得纯度达卯％的重组蛋白AB，免疫印迹显示该蛋白可被AIPA兔抗血清和HP感染患者的血清抗体识别；狸）体外安全性实验表明AB无明显调节PBL细胞表达FasL和致PBL细胞凋亡的作用；ELISA法共检测了55份血清，同时以RUT作为平行对照，两法的评价判断一致性（agreement）程度的指标卡帕系数（KaPPa值）为0．76，同时，低剂量 AB即可刺激 HPPBL的增殖；AB抗血清能部分阻断 Hp与胃癌细胞系的粘附，在光镜下表现为经抗AB兔血清预处理后，每细胞周围粘附的细菌数较免疫前兔血清预处理组显着减少…m．05＼ ①成功构建了表达AB 的减毒鼠伤寒沙门菌重组菌株S．tyPhimuriumX4072（pYA248－AB），桥联法ELISA测定表明重组菌X4072（PYA248－AB）培养上清中AB的含量高于菌体裂解液，重组菌PYA248｛B在没有选择压 －2－ 力的情况下培养100代，随机挑选的重组菌全部都能生长，且在ELISA 测定妞抗原时均显阳性。重组菌的生长曲线测定表明，X4072叩YA248） 和X4072（wAZ抡－AB）的生长状态基本一致；口服 重组菌株 X4072（PYA248－AB）1．OX 10“CfU．30天后，C57BL／6存活率仍为 100％。（4） 免疫治疗后疫苗治疗组根除率为53．3兄 显着高于其它两组…州．of人 未根除HP的小鼠，疫苗治疗组伽的定植密度明显低于其它两组 h州．of人应用流式细胞仪分析免疫小鼠脾CD4＊CDS＊淋巴细胞的比值(本文来源于《第一军医大学》期刊2002-06-01）
粘附素保守区论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的 构建表达幽门螺杆菌 (Hp) 4种粘附素 (BabA2 、AlpA、AlpB和HopZ)保守区蛋白质的候选菌株 ,并研究其免疫原性。方法 利用PCR技术扩增粘附素保守区 (命名为CB)基因 ,将其定向插入pET 2 2b(+)载体 ,在BL2 1(DE3)大肠杆菌中表达 ;表达产物经亲和层析纯化和免疫印迹鉴定 ,ELISA法测定Hp感染者血清中抗CB抗体。结果 构建了 4种粘附素保守区的重组质粒 ,测序显示CB基因长 5 88bp ,编码 195个氨基酸。SDS PAGE和凝胶扫描分析 ,CB基因表达的蛋白质相对分子质量约为 2 2 5 0 0 ,其重组蛋白质表达量占菌体总蛋白质的 2 9%。经免疫印迹证实该重组蛋白质可以被Hp阳性患者血清所识别 ,ELISA法共检测了 5 5份血清 ,以快速尿素酶实验 (RUT)作为平行对照 ,两法的评价判断一致性程度的指标卡帕系数为 0 .76。结论 CB有可能成为一种有效的疫苗 ,用于幽门螺杆菌感染的预防和治疗。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
粘附素保守区论文参考文献
[1].白杨,陈烨,王继德,唱韶红,张兆山.表达幽门螺杆菌粘附素保守区的减毒鼠伤寒沙门菌免疫治疗作用的研究[J].生物化学与生物物理进展.2004
[2].白杨,张亚历,王继德,张兆山,周殿元.幽门螺杆菌粘附素基因保守区的克隆及免疫原性研究[J].中华医学杂志.2003
[3].白杨,张亚历,陈烨,王继德,杨云生.幽门螺杆菌粘附素保守区蛋白的制备及其免疫原性、安全性和粘附作用的体外评价[J].现代消化及介入诊疗.2002
[4].白杨.表达幽门螺杆菌粘附素保守区的减毒鼠伤寒沙门菌的构建及其免疫治疗作用的研究[D].第一军医大学.2002
论文知识图
