论文摘要
[目的]探讨双组分信号转导系统的应答调节蛋白CpxR与核蛋白H-NS对IncFⅡ质粒接合转移的调控机制,为控制IncFⅡ质粒介导的多重耐药基因水平快速散播提供理论依据。[方法]本研究利用Red同源重组分别构建大肠杆菌ATCC25922的cpxR和hns基因缺失株（ΔcpxR、Δhns）和回补菌株（ΔcpxR/pcpxR、Δhns/phns）后,分别将携带blaCTX-M-65、fosA3和rmtB耐药基因的IncFⅡ质粒电转入上述构建的菌株中,最终获得含有IncFⅡ质粒的重组菌F25922、FΔcpxR、FΔcpxR/pcpxR、FΔhns和FΔhns/phns。利用紫外分光光度计检测5种重组菌的OD600值并绘制生长曲线。以J53为受体菌,F25922、FΔcpxR、FΔcpxR/pcpxR、FΔhns、FΔhns/phns为供体菌,进行接合试验,计算接合频率。同时,利用荧光定量PCR检测5种重组菌中与接合转移相关的traA、traE、traJ、traL、traY的相对mRNA表达水平,并以16SrRNA为内参基因,相对表达量按照2-ΔΔCT进行均一化分析。[结果]根据生长曲线,FΔcpxR和FΔcpxR/pcpxR的生长曲线与F25922相比没有明显变化,仅在生长初期菌株的适应能力较差,而FΔhns和FΔhns/phns除了适应能力较差外,其生长速度也明显变慢。与F25922相比,cpxR和hns缺失后IncFⅡ质粒的接合频率都发生了明显变化,其中FΔcpxR的接合频率下降了18倍,而FΔhns的接合频率下降高达254倍。同时,结果发现cpxR缺失后traY、traJ、traA的相对表达量分别上升了7.4倍、2.1倍和4.1倍;hns缺失后traY、traJ、traE、traA的相对表达量分别上升了635倍、1510倍、1251倍和448倍。而且两回补菌株的相关tra基因的表达量虽然未完全恢复到缺失前水平,但与缺失株相比其表达量有明显降低。[结论]CpxAR和H-NS对大肠杆菌IncFⅡ质粒接合转移呈负调控作用,且后者的调控能力明显更强。
论文目录
文章来源
类型: 国内会议
作者: 胡慧慧,孙华润,邝启红,李文娅,贺丹丹,吴华,潘玉善,胡功政,刘建华,苑丽
关键词: 应答调节蛋白,核蛋白,质粒
来源: 中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会 2019-10-13
年度: 2019
分类: 基础科学,农业科技
专业: 生物学,畜牧与动物医学
单位: 河南农业大学牧医工程学院
分类号: S852.61
DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.034672
页码: 241
总页数: 1
文件大小: 73k
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