D-甘露糖异构酶的克隆表达及酶法制备D-甘露糖

论文摘要

将大肠杆菌BL21中的D-甘露糖异构酶（MIase）基因yihS克隆到表达载体pET-28a（+）中,并转入大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中表达。重组菌株经IPTG诱导培养6 h后MIase发酵酶活可达4.2 U/mL。重组MIase生产D-甘露糖时不需要金属离子的参与。该酶在40℃和pH 7.5条件下表现出催化D-果糖的最高活性,转化率为25%左右;通过研究底物浓度对酶活性的影响,得出该酶的活性不受底物浓度的抑制,以D-果糖为底物时,动力学参数Km为123.32mmol/L,Vmax为113.64μmol/（min·mg）,催化效率kcat/Km为0.691 （s·mmol/L）。

论文目录

1 材料与方法

1.1 菌株与质粒

1.2 重组MIase的克隆及表达

1.3 发酵培养

1.4 MIase的分离纯化

1.5 MIase酶学性质研究

1.5.1 温度对酶活及热稳定性的影响

1.5.2 pH对酶活及热稳定性的影响

1.5.3 不同金属离子对酶活的影响

1.6 MIase酶活定义

2 结果与讨论

2.1 重组质粒p ET-28a （+） -yihS的构建

2.2 MIase的表达及分离纯化结果

2.3 最佳酶转化反应的条件

2.3.1 MIase的最适温度及温度稳定性

2.3.2 pH对MIase酶活及稳定性的影响

2.3.3 不同金属离子对MIase酶活的影响

2.3.4 D-甘露糖的酶法制备

2.3.5 MIase的反应动力学参数

3 结语

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 胡兴,张涛,沐万孟,缪铭,江波

关键词: 甘露糖,甘露糖异构酶,表达,生物制备

来源: 食品与生物技术学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 食品科学与技术国家重点实验室江南大学,江南大学食品学院

基金: 国家863计划项目(2013AA102102),国家自然科学基金项目(31230057)

分类号: Q53;Q78

页码: 58-63

总页数: 6

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D-甘露糖异构酶的克隆表达及酶法制备D-甘露糖

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