导读:本文包含了复制缺陷性腺病毒论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:性腺,病毒,腺病毒,缺陷,细胞,粘膜,载体。
复制缺陷性腺病毒论文文献综述
林元邦[1]（2012）在《改进型复制缺陷性腺病毒（HDAd）转基因载体特异性及稳定性研究》一文中研究指出背景：自我复制缺陷性腺病毒(HDAd)和慢病毒(LV)是转基因治疗中极具吸引力的病毒载体。在质粒载体中的测试已经确认人工合成的启动子AUSEx3具有肌细胞特异性表达的特点。本实验以两种不同的病毒为模板构建含有启动子AUSEx3的基因载体,检测其组织特异性及转基因表达的稳定性。细胞核支架/基质结合区(Scaffold/matrix-attached regions, S/MAR)基因,在基因表达中具有非常重要的作用,能增加质粒转基因的表达水平,可以预防转基因沉默,通过构建含有S/MAR的HDAd,检测S/MAR在HDAd中是否仍具有防止转基因衰退的作用。方法：构建两种表达β-半乳糖苷酶的HDAd载体,分别受AUSEx3或者CMV(或CAG)启动子调控；构建两种表达绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒,分别受AUSEx3或者CMV调控,在非肌源性细胞(HeLa, Jurkat,293A, A549)、成肌细胞和肌管细胞中比较转基因的表达情况。构建两种表达GFP的HDAd载体,一个含有S/MAR基因,一个没有,在HeLa细胞中培养,比较GFP表达。结果：在非肌源性细胞中,AUSEx3调控转基因表达是CAG或CMV表达值的1%或更少,AUSEx3在A549细胞中表达范围是CAG或CMV表达值的5-12%。AUSEx3在成肌细胞表达为0.5%和29%,与CAG或CMV相比,具有显着差异性(p<0.05)。但在肌管细胞中,AUSEx3与CMV基因表达具有同样强度,说明AUSEx3在肌细胞中是个很强的启动子。在体内实验中,AUSEx3转基因在肺、肝和脾中的表达值是CAG表达值的2%或者更少,但在肌肉中是10%。胫骨前肌(tibialis anterior)注射AUSEx3-HDAd,28%的肌纤维β-半乳糖苷酶表达阳性。在慢病毒稳定性实验中,AUSEx3调控的GFP表达也比CMV持久。另一个实验中,持续的检测发现,具有S/MAR转基因的HeLa细胞GFP表达下降比例要比没有S/MAR转基因的HeLa细胞小且慢。结论：经过两种病毒载体(慢病毒载体和辅助腺病毒载体)测试证明,AUSEx3是很强的肌细胞特异性启动子。并且其基因片段小(504bp),非常适合作为肌源性转基因治疗的启动子。S/MAR在HDAd中具有防止基因沉默的作用。(本文来源于《天津医科大学》期刊2012-05-01）
陈彩虹[2]（2011）在《两种新型选择复制性腺病毒M5，M6与复制缺陷型腺病毒Adv-TK的有效性以及安全性的系统比较》一文中研究指出第一部分新型选择复制性腺病毒M5以及M6的构建及鉴定【目的】构建及鉴定两种表达HSV-TK基因的新型选择复制性腺病毒【方法】采用PCR的方法扩增得到HSV-TK基因的全长,通过T4连接酶将TK全长连接到PcDNA3.1+/E3⊿6.7k/gp19k以及PcDNA3.1+/E3⊿ADP上,然后采用同源重组法构建M5以及M6。将得到的病毒感染293后提取HirtDNA,然后通过酶切以及PCR的方法鉴定M5以及M6。【结果】将通过PCR方法扩增得到的全长送到测序公司测序后证明其序列是正确的,将以HirtDNA作为模板PCR扩增后得到的产物进行凝胶电泳,在1.2kb处有目的条带存在,将用BanⅢ酶切过的HirtDNA凝胶电泳后在1.2kb左右以及30kb以上可见目的条带。【结论】成功的构建了表达HSV-TK基因的新型选择复制性腺病毒M5以及M6第二部分 两种新型选择复制性腺病毒M5以及M6同Adv-TK体外效应的对比【目的】比较选择复制性腺病毒M5以及M6与Adv-TK的体外效果【方法】Western blot检测M5,M6以及Adv-TK感染肿瘤细胞以及正常细胞后细胞中TK蛋白的表达量,结晶紫染色检测M5,M6以及Adv-TK对肿瘤细胞以及正常细胞的裂解作用,real-time PCR法检测M5,M6以及Adv-TK在肿瘤细胞以及正常细胞中的复制能力,MTT法以及流式细胞术检测并比较M5,M6以及Adv-TK对各种肿瘤细胞以及正常细胞的杀伤作用。【结果】在肿瘤细胞中,M5以及M6的TK蛋白表达量高于Adv-TK,其中M6的表达量在这叁种病毒中最高,而在正常细胞中,Adv-TK的TK蛋白表达量要明显高于M5以及M6,而M6在正常细胞中几乎不表达TK蛋白；结晶紫染色显示Adv-TK对肿瘤细胞没有裂解作用,在腺病毒感染第叁天,M5对肿瘤细胞的裂解效应要强于M6,但到感染第五天,M6对肿瘤细胞的裂解作用要强于M5,而即使以很高的MOI感染正常细胞,M5以及M6也不能裂解正常细胞；在腺病毒感染肿瘤细胞后36小时内,M5的复制量要大于M6,36h之后,M6的复制量要大于M5,Adv-TK在肿瘤细胞中不复制,而在正常细胞中,M5,M6以及Adv-TK均不复制；在以高浓度病毒感染肿瘤细胞时,M5,M6以及Adv-TK对肿瘤细胞的杀伤效应相似,但以低浓度病毒感染肿瘤细胞时,M5以及M6对肿瘤细胞的杀伤效应要明显强于Adv-TK,且M6的肿瘤杀伤效应也强于M5,而当M5,M6以及Adv-TK以500MOI感染正常细胞时,M6对正常细胞几乎无杀伤作用,而M5对正常细胞的杀伤作用也明显小于Adv-TK。【结论】在高MOI时,M5,M6以及Adv-TK对肿瘤细胞的杀伤效应相似；在低MOI时,M5以及M6对肿瘤细胞的杀伤能力要明显强于Adv-TK,且M6的肿瘤杀伤效应也强于M5,但M5以及M6对正常细胞的毒性明显小于Adv-TK。第叁部分M5,M6以及Adv-TK对裸鼠原位瘤治疗效应的对比【目的】比较选择复制性腺病毒M5,M6与Adv-TK的体内效应【方法】构建裸鼠胃癌原位模型,将Ad5/dElA,M5和M6以及Adv-TK注入裸鼠体内,并连续14天注射更昔洛韦,每天60 mg/kg,比较M5,M6以及Adv-TK对原位胃癌肿瘤的治疗作用及对肿瘤转移的影响,并比较对小鼠生存率的影响,HE染色显示对比肿瘤局部的组织结构,原位杂交检测对比腺病毒在肿瘤局部的复制情况,免疫组化检测对比存在于肿瘤局部的腺病毒的量,Weastern blot法检测肿瘤局部TK蛋白的表达量。【结果】M5和M6以及Adv-TK均可抑制原位肿瘤的生长,但M5以及M6对原位肿瘤的生长抑制作用明显强于Adv-TK,而M6对原位肿瘤的生长抑制作用要强于M5；M5以及M6抑制肿瘤转移的能力也强于Adv-TK；相较于其他治疗组,M6组的局部肿瘤组织中可检测到更多病毒量以及病毒复制,M5组局部肿瘤组织检测到的病毒量也多于Adv-TK组；M5以及M6组中的TK蛋白表达量也高于Adv-TK组；M5以及M6组小鼠生存率明显高于Adv-TK组,且M6组小鼠生存率也高于M5组。【结论】M5以及M6对原位肿瘤的生长以及转移的抑制作用明显强于Adv-TK,且M5以及M6对小鼠生存率的提高也明显高于Adv-TK。第四部分M5,M6以及Adv-TK在免疫全能小鼠肿瘤模型中的治疗作用以及代谢情况的对比【目的】比较M5,M6以及Adv-TK对免疫全能小鼠皮下瘤的治疗作用,并对比这叁种腺病毒在全能小鼠肿瘤模型中的代谢情况【方法】构建C57BL/6小鼠结肠癌皮下瘤模型,随机分为5组,分别注射PBS,Ad5/dE1A, M5, M6以及Adv-TK,并每组连续注射更昔洛韦14天,每天60ng/kg,观察各组病毒对小鼠皮下瘤的生长抑制作用,每组分别在病毒注射后1d,4d,7d,14d以及28d处死5只小鼠,real-time PCR法检测瘤体内腺病毒的量以及TK表达量【结果】M5和M6以及Adv-TK均可抑制免疫全能小鼠中皮下瘤的生长,但M5以及M6对肿瘤的生长抑制作用明显强于Adv-TK,且M6对肿瘤的生长抑制作用要强于M5；M5以及M6在肿瘤局部存在的时间比Adv-TK长,且病毒量在注射后第四天急剧减少,到注射后第7天,M5以及M6的病毒水平达到第二个高峰；M5以及M6组中肿瘤中TK的表达量高于Adv-TK组,且M5以及M6组TK表达的持续时间也较Adv-TK组长。【结论】M5以及M6在免疫全能小鼠中对肿瘤的治疗作用强于Adv-TK,其原因与M5以及M6中肿瘤局部的病毒量以及TK表达量要高于Adv-TK组有关。第五部分M5以及M6体内应用的安全性研究【目的】探讨M5以及M6在体内应用的安全性问题【方法】分别将PBS,Ad5/dE1A,M5,M6以及Adv-TK注射入小鼠体内,取眼动脉血进行肝肾功能检测,HE染色检测各脏器病理反应,real-time PCR法检测各组织腺病毒的表达情况,流式细胞术检测外周血以及脾脏中CD4+以及CD8+淋巴细胞的变化情况,TCID50法检测血清中抗腺病毒中和抗体。【结果】同PBS组相比,M5,M6以及Adv-TK仅引起一过性的肌酐的升高；小鼠的肝,脾,肾等也未见明显的病理改变；M5,M6以及Adv-TK被注射入体内后,在肝,脾,肾中均有表达,其中在肝中表达的时间较长,且叁种病毒之间的表达无明显差异；外周血中的CD4+以及CD8+淋巴细胞在病毒注射后无明显变化,而脾中的CD4’以及CD8+淋巴细胞均出现一过性的减少,且M5,M6以及Adv-TK引起的变化趋势以及程度相似；M5,M6以及Adv-TK在小鼠中引起的中和抗体的数量以及变化趋势无明显差异。【结论】M5以及M6在体内应用具有较好的安全性(本文来源于《华中科技大学》期刊2011-05-01）
王公明,田玉科,田学愎,陈建平,安珂[3]（2006）在《用于包装复制缺陷性腺病毒的低代次293细胞的培养》一文中研究指出目的:建立体外培养低代次293细胞的方法。方法:细胞复苏,将冻存的低代次293细胞于37℃水浴中快速融解,移入75cm~2细胞培养瓶中,加入10mL低代次293细胞培养基,6～8h细胞贴壁后更换培养基。细胞传代,吸出培养基,用1×柠檬酸盐细胞消化液洗2遍,留取0.5mL37℃消化5～10min,待细胞脱壁后加入3mL培养基,轻轻吹匀以1∶2比率传代培养。细胞冻存,以1×柠檬酸盐细胞消化液消化5～10min,细胞脱壁后加入5mL细胞培养基中和消化液,离心收集细胞,以1mL的细胞冻存液(90%FBS+10%DMSO)重悬、冻存。结果:细胞传代后8h细胞完全贴壁;以腺病毒感染质粒感染293细胞14d后可观察到腺病毒空斑形成。结论:该方法操作简便,对细胞损伤小且保持细胞生物学特性不变。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2006年18期）
李庆军,刘军,赵东晖,肖颂华,黎祥喷[4]（2004）在《含有NuRR1基因的重组复制缺陷性腺病毒的构建和鉴定》一文中研究指出[目的]构建并鉴定携带NURR1基因的重组复制缺陷腺病毒高效表达载体,为基因调控神经于细胞分化后治疗 帕金森病奠定基础。[方法]将测序鉴定正确的NURR1基因插入穿梭质粒pTrack-CMV后,与Adeasy整合,重组Adeasy质粒在 肾293A细胞内包装成病毒,PCR鉴定并测定病毒滴度,电镜鉴定病毒颗粒。[结果]成功构建的穿梭质粒pTrack-CMV-MURR1 与pAdeasy整合后,重组Adeasyr质粒在肾293A细胞内包装和复制时,细胞病变效应(cytopathogenic effect,CPE)明显,PCR鉴 定病毒DNA中有NURR1基因,病毒滴度测试表明病毒含量高,电镜显示病毒为多面体。[结论]成功构建出含有NURR1基因 的重组复制缺陷性腺病毒表达载体。(本文来源于《中山大学学报(医学科学版)》期刊2004年S2期）
史百芬,张咏南[5]（2000）在《用复制缺陷性腺病毒重组体诱导粘膜免疫》一文中研究指出作者将表达狂犬病病毒ＥＲＡ株糖蛋白的Ｅ１缺陷性腺病毒重组体在转染Ｅ１的２９３细胞上增殖３天后，取冻融上清液作为疫苗免疫小鼠，研究不同途径接种诱导全身和局部粘膜免疫应答的差异。 选６～１０周龄Ｃ３Ｈ／Ｈｅ雌性小鼠，分别于鼻内、皮下、直肠和阴道途径接种重组体(本文来源于《国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册》期刊2000年01期）
复制缺陷性腺病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
第一部分新型选择复制性腺病毒M5以及M6的构建及鉴定【目的】构建及鉴定两种表达HSV-TK基因的新型选择复制性腺病毒【方法】采用PCR的方法扩增得到HSV-TK基因的全长,通过T4连接酶将TK全长连接到PcDNA3.1+/E3⊿6.7k/gp19k以及PcDNA3.1+/E3⊿ADP上,然后采用同源重组法构建M5以及M6。将得到的病毒感染293后提取HirtDNA,然后通过酶切以及PCR的方法鉴定M5以及M6。【结果】将通过PCR方法扩增得到的全长送到测序公司测序后证明其序列是正确的,将以HirtDNA作为模板PCR扩增后得到的产物进行凝胶电泳,在1.2kb处有目的条带存在,将用BanⅢ酶切过的HirtDNA凝胶电泳后在1.2kb左右以及30kb以上可见目的条带。【结论】成功的构建了表达HSV-TK基因的新型选择复制性腺病毒M5以及M6第二部分 两种新型选择复制性腺病毒M5以及M6同Adv-TK体外效应的对比【目的】比较选择复制性腺病毒M5以及M6与Adv-TK的体外效果【方法】Western blot检测M5,M6以及Adv-TK感染肿瘤细胞以及正常细胞后细胞中TK蛋白的表达量,结晶紫染色检测M5,M6以及Adv-TK对肿瘤细胞以及正常细胞的裂解作用,real-time PCR法检测M5,M6以及Adv-TK在肿瘤细胞以及正常细胞中的复制能力,MTT法以及流式细胞术检测并比较M5,M6以及Adv-TK对各种肿瘤细胞以及正常细胞的杀伤作用。【结果】在肿瘤细胞中,M5以及M6的TK蛋白表达量高于Adv-TK,其中M6的表达量在这叁种病毒中最高,而在正常细胞中,Adv-TK的TK蛋白表达量要明显高于M5以及M6,而M6在正常细胞中几乎不表达TK蛋白；结晶紫染色显示Adv-TK对肿瘤细胞没有裂解作用,在腺病毒感染第叁天,M5对肿瘤细胞的裂解效应要强于M6,但到感染第五天,M6对肿瘤细胞的裂解作用要强于M5,而即使以很高的MOI感染正常细胞,M5以及M6也不能裂解正常细胞；在腺病毒感染肿瘤细胞后36小时内,M5的复制量要大于M6,36h之后,M6的复制量要大于M5,Adv-TK在肿瘤细胞中不复制,而在正常细胞中,M5,M6以及Adv-TK均不复制；在以高浓度病毒感染肿瘤细胞时,M5,M6以及Adv-TK对肿瘤细胞的杀伤效应相似,但以低浓度病毒感染肿瘤细胞时,M5以及M6对肿瘤细胞的杀伤效应要明显强于Adv-TK,且M6的肿瘤杀伤效应也强于M5,而当M5,M6以及Adv-TK以500MOI感染正常细胞时,M6对正常细胞几乎无杀伤作用,而M5对正常细胞的杀伤作用也明显小于Adv-TK。【结论】在高MOI时,M5,M6以及Adv-TK对肿瘤细胞的杀伤效应相似；在低MOI时,M5以及M6对肿瘤细胞的杀伤能力要明显强于Adv-TK,且M6的肿瘤杀伤效应也强于M5,但M5以及M6对正常细胞的毒性明显小于Adv-TK。第叁部分M5,M6以及Adv-TK对裸鼠原位瘤治疗效应的对比【目的】比较选择复制性腺病毒M5,M6与Adv-TK的体内效应【方法】构建裸鼠胃癌原位模型,将Ad5/dElA,M5和M6以及Adv-TK注入裸鼠体内,并连续14天注射更昔洛韦,每天60 mg/kg,比较M5,M6以及Adv-TK对原位胃癌肿瘤的治疗作用及对肿瘤转移的影响,并比较对小鼠生存率的影响,HE染色显示对比肿瘤局部的组织结构,原位杂交检测对比腺病毒在肿瘤局部的复制情况,免疫组化检测对比存在于肿瘤局部的腺病毒的量,Weastern blot法检测肿瘤局部TK蛋白的表达量。【结果】M5和M6以及Adv-TK均可抑制原位肿瘤的生长,但M5以及M6对原位肿瘤的生长抑制作用明显强于Adv-TK,而M6对原位肿瘤的生长抑制作用要强于M5；M5以及M6抑制肿瘤转移的能力也强于Adv-TK；相较于其他治疗组,M6组的局部肿瘤组织中可检测到更多病毒量以及病毒复制,M5组局部肿瘤组织检测到的病毒量也多于Adv-TK组；M5以及M6组中的TK蛋白表达量也高于Adv-TK组；M5以及M6组小鼠生存率明显高于Adv-TK组,且M6组小鼠生存率也高于M5组。【结论】M5以及M6对原位肿瘤的生长以及转移的抑制作用明显强于Adv-TK,且M5以及M6对小鼠生存率的提高也明显高于Adv-TK。第四部分M5,M6以及Adv-TK在免疫全能小鼠肿瘤模型中的治疗作用以及代谢情况的对比【目的】比较M5,M6以及Adv-TK对免疫全能小鼠皮下瘤的治疗作用,并对比这叁种腺病毒在全能小鼠肿瘤模型中的代谢情况【方法】构建C57BL/6小鼠结肠癌皮下瘤模型,随机分为5组,分别注射PBS,Ad5/dE1A, M5, M6以及Adv-TK,并每组连续注射更昔洛韦14天,每天60ng/kg,观察各组病毒对小鼠皮下瘤的生长抑制作用,每组分别在病毒注射后1d,4d,7d,14d以及28d处死5只小鼠,real-time PCR法检测瘤体内腺病毒的量以及TK表达量【结果】M5和M6以及Adv-TK均可抑制免疫全能小鼠中皮下瘤的生长,但M5以及M6对肿瘤的生长抑制作用明显强于Adv-TK,且M6对肿瘤的生长抑制作用要强于M5；M5以及M6在肿瘤局部存在的时间比Adv-TK长,且病毒量在注射后第四天急剧减少,到注射后第7天,M5以及M6的病毒水平达到第二个高峰；M5以及M6组中肿瘤中TK的表达量高于Adv-TK组,且M5以及M6组TK表达的持续时间也较Adv-TK组长。【结论】M5以及M6在免疫全能小鼠中对肿瘤的治疗作用强于Adv-TK,其原因与M5以及M6中肿瘤局部的病毒量以及TK表达量要高于Adv-TK组有关。第五部分M5以及M6体内应用的安全性研究【目的】探讨M5以及M6在体内应用的安全性问题【方法】分别将PBS,Ad5/dE1A,M5,M6以及Adv-TK注射入小鼠体内,取眼动脉血进行肝肾功能检测,HE染色检测各脏器病理反应,real-time PCR法检测各组织腺病毒的表达情况,流式细胞术检测外周血以及脾脏中CD4+以及CD8+淋巴细胞的变化情况,TCID50法检测血清中抗腺病毒中和抗体。【结果】同PBS组相比,M5,M6以及Adv-TK仅引起一过性的肌酐的升高；小鼠的肝,脾,肾等也未见明显的病理改变；M5,M6以及Adv-TK被注射入体内后,在肝,脾,肾中均有表达,其中在肝中表达的时间较长,且叁种病毒之间的表达无明显差异；外周血中的CD4+以及CD8+淋巴细胞在病毒注射后无明显变化,而脾中的CD4’以及CD8+淋巴细胞均出现一过性的减少,且M5,M6以及Adv-TK引起的变化趋势以及程度相似；M5,M6以及Adv-TK在小鼠中引起的中和抗体的数量以及变化趋势无明显差异。【结论】M5以及M6在体内应用具有较好的安全性
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
复制缺陷性腺病毒论文参考文献
[1].林元邦.改进型复制缺陷性腺病毒（HDAd）转基因载体特异性及稳定性研究[D].天津医科大学.2012
[2].陈彩虹.两种新型选择复制性腺病毒M5，M6与复制缺陷型腺病毒Adv-TK的有效性以及安全性的系统比较[D].华中科技大学.2011
[3].王公明,田玉科,田学愎,陈建平,安珂.用于包装复制缺陷性腺病毒的低代次293细胞的培养[J].实用医学杂志.2006
[4].李庆军,刘军,赵东晖,肖颂华,黎祥喷.含有NuRR1基因的重组复制缺陷性腺病毒的构建和鉴定[J].中山大学学报(医学科学版).2004
[5].史百芬,张咏南.用复制缺陷性腺病毒重组体诱导粘膜免疫[J].国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册.2000
论文知识图
