表达EDA-EmIMP1的重组枯草芽孢杆菌的制备及其免疫效果评价

论文摘要

枯草芽孢杆菌可以作为外源蛋白的表达系统,其作为重组蛋白的递呈载体具有很大优势,而纤维连接蛋白外域A（EDA）是一种能够提高目标蛋白抗原性的佐剂。为增强巨型艾美耳球虫的免疫相关蛋白1（IMP1）的抗原性,本研究从已构建的重组质粒中扩增EDA-EmIMP1和EmIMP1基因片段,并构建重组表达质粒pH T01-EDA-EmIMP1和pH T01-EmIMP1,将获得的重组质粒转化枯草芽孢杆菌感受态细胞,制备的重组枯草芽孢杆菌鉴定正确后增殖培养。将实验鸡分为5组,分别是:EDA组（免疫pH T01-EDA-EmIMP1重组枯草芽孢杆菌）、EmIMP1组（免疫pH T01-EmIMP1重组枯草芽孢杆菌）、枯草芽孢杆菌组、空白组（PBS）和攻虫对照组。每组鸡口服相应菌液（0.3 mL1010 cfu/mL菌液/只）进行免疫,每隔2周免疫1次,共免疫3次,每次免疫2周后采血。三免2周后攻虫。采用ELISA方法检测各组鸡血清中EmIMP1的抗体滴度以及细胞因子IL-10和IL-4的含量;并对攻虫后各组鸡的增重、肠道病变计分以及卵囊排出量进行计算。结果显示:制备的重组枯草芽孢杆菌可以表达目的蛋白,蛋白大小为70 ku。ELISA检测结果显示,EDA组的抗体效价最高,约为1∶3 200;三免EDA组的IL-10和IL-4的含量均显著高于其它组（p<0.05）;EDA组的卵囊排出量显著低于其它组,而枯草芽孢杆菌组和EmIMP1组的卵囊排出量也均显著低于攻虫组（p<0.05）;EDA组对肠道保护效果显著优于其它经过攻虫处理的组（p<0.05）,而枯草芽孢杆菌组和EmIMP1组之间无显著差异;EDA组增重显著高于攻虫组和枯草芽孢杆菌组（p<0.05）。本研究证实枯草芽孢杆菌作为EmIMP1的抗原递呈载体可以有效提高免疫原性,其中EDA佐剂组的免疫效果最好。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈志,丁可欣,林霞琳,黄潇航,黄志坚,殷光文

关键词: 枯草芽胞杆菌,胞内表达,佐剂,巨型艾美耳球虫

来源: 中国预防兽医学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 福建农林大学动物科学学院/福建省动物药物工程实验室

基金: 国家自然基金-青年项目(31502058),国家自然科学基金面上项目(31872466),福建省高校杰出青年人才培育项目(KLa16029A),福建省高校新世纪优秀人才项目(KLa17059A)

分类号: S852.4

页码: 408-413

总页数: 6

文件大小: 441K

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标签：枯草芽胞杆菌论文;  胞内表达论文;  佐剂论文;  巨型艾美耳球虫论文;