陈妙徐义霞史文
南京市第二医院南京江苏210003
摘要：目的：对一种新的纯化狂犬病疫苗（Vero细胞）的安全性和免疫原性进行评价。方法：将60名年龄在18~50岁的健康人随机分成三组，每组20人，采用0，7，21天免疫程序，第一组肌肉注射1ml自制冻干人用狂犬病纯化疫苗，第二组皮内注射0.1ml自制冻干人用狂犬病纯化疫苗，第三组肌肉注射市售的维尔博狂犬病疫苗作为阳性对照。观察每针次接种后7天内的局部和全身不良反应，并采用快速荧光抑制试验分别在7，21，42天对免疫原性进行测定。结果：在三组受试者中，共计报告116人次局部和全身不良反应，大多数症状较为轻微，并自行消失，无后遗症。第一组和第二组在首剂免疫7天后几何平均滴度（GMC）分别为0.55和0.64IU/ml，第21天上升到2.96和3.26IU/ml，第42天为7.82和6.12IU/ml，与阳性对照比较，无统计学差异（P<0.05）。结论：该种新的冻干人用狂犬病纯化疫苗（Vero细胞）无论是肌肉还是皮内注射均具有良好的耐受性和免疫原性。
关键词：狂犬病疫苗；安全性；免疫原性；Vero细胞
1.前言
狂犬病是一种致命的病毒性人畜共患病，至少发生在100个国家和地区，其中主要是在发展中国家。超过33亿人处在严重感染的风险中[1]，大约每年有55000人死亡，其中有20000例发生在印度，24000例在非洲[2]。而且这些数字有可能被低估[3]。
在贫穷国家，传统狂犬病疫苗的高成本以及有效性造成一个持续问题，毫无疑问也导致了疫苗接种的低覆盖率。近年来，安全有效的疫苗已经从细胞培养中得到，如来源于人二倍体细胞，Vero细胞，或鸡胚胎细胞。这些疫苗已成功应用于暴露前和暴露后预防[4]。正是由于其良好的免疫原性，这些疫苗可以用于皮内注射，而且剂量只是传统肌肉注射的十分之一，这是一个最主要优点，从而减少主动免疫成本[3]。皮内注射目前已经被广泛采用，即使是在印度，菲律宾，斯里兰卡和泰国等国家的暴露后预防[5，6]。
利用Vero细胞系，我院正在研制一种新的狂犬病疫苗，可用于肌肉注射和皮内注射。经过单次和重复给药的大鼠和小鼠实验显示其具有良好的耐受性、无致畸性后，我们进行了临床试验研究。本文将对该种疫苗在健康人类志愿者中的第一手临床实验结果进行报道。
2.材料和方法
1.1疫苗自制冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞），批号：20140114，规格：1.0ml/剂（效价为4.35IU/剂），有效期至2016年1月。阳性对照为法国赛诺菲巴斯德公司分包装的冻干人用狂犬病纯化疫苗（Vero细胞），批号：Y1449-2，规格：0.5ml/剂（5.8IU/剂），有效期至2016年4月。
1.2研究对象和给药2014年7月~2014年10月在南京市选择60名18~50岁无犬伤史、无狂犬病疫苗接种史的健康自愿者，随机分成三组，每组20人，于0、7、21天接种3剂，第一组肌肉注射1ml自制狂犬病疫苗，第二组皮内注射0.1ml自制狂犬病疫苗，第三组肌肉注射0.5ml阳性对照，分别于0天接种前、接种后7，21，42天从肘静脉采血3.0ml。
1.3安全性和免疫原性检测方法安全性通过疾病史、生命体征测量、血常规及化学和验尿来评估，分别在接种后第7和28天采集数据。同时观察每针次接种后7天内局部和全身反应，严重的副反应则从0天观察到第42天；免疫原性则通过快速荧光抑制试验测定疫苗免疫后血清狂犬病毒中和抗体效价进行评估。免疫后血清≥0.5IU/ml为中和抗体有效保护阳性。
1.4数据统计采用SPSS13.0软件，数据以表示，计量资料两组样本均数比较采用t检验分析，多组计量资料样本均数比较采用方差分析，计数资料用检验，P<0.05为差异有统计学意义。
3.结果
3.1研究对象基本特征从98名受试者中筛选出60名合格受试者进行研究，年龄范围19~48岁，其中男性32人，女性28人，两组间性别比例的差异无显著性。平均年龄肌肉注射组为28.05岁，皮内注射组为34.70岁，阳性对照组为31.00岁，3组间年龄具有可比性，见表1。所有合格受试者在接种前均进行血常规、尿常规、心电图、胸片检查，均为发现异常。
表1三组受试者年龄、身高、体重分布情况（n=20）
组别年龄/岁身高/cm体重/kg
肌肉注射组28.05±7.07162.60±7.6762.08±9.67
皮内注射组34.70±8.78163.40±5.8759.50±8.89
阳性对照组31.00±9.39165.20±5.4663.88±14.89
3.2安全性3组受试者42天随访共报告局部和全身不良反应116人次，其中28人次为局部的，88人次为全身的。接种部位疼痛是最常见的局部反应（14人次），其次是红斑、瘙痒、硬结和水肿。这些症状都比较轻微，3天内均可消除。而在88人次的全身反应中，头痛、关节痛和肌肉痛是最常见的（19人次），其次是乏力、发热、寒战、恶心和眩晕，但大多数症状都很轻微，也都在3天内自行消失，没有后遗症。同时血常规、血生化、尿常规等在接种后28天检测，各项指标均无异常。
3.3免疫原性在接种第7天，3组之间狂犬病毒中和抗体滴度≥0.5IU/ml的受试者比例的差异无统计学意义（P>1.000）。当接种后第21和42天测定结果表明，中和抗体阳转率均达到100%。3组之间在每个时间测定的几何平均滴度（GMC）均很相近，除了接种第42天的皮内注射组和阳性对照组之间存在显著性差异（P=0.0198），但认为与临床无相关性。结果见表2。
表2三组受试者接种后7、21和42天血清中和抗体GMC比较（n=20）
注：与阳性对照比，*P<0.05
4.讨论
近十年来中国狂犬病的发病率及死亡率一直维持在每年超过2000人的高位，仅次于印度，居全球第二位。狂犬病在2006年开始反弹达到高峰，而对狂犬病的思路和方式存在问题导致中国每年用于狂犬病防疫的费用超过100亿元，付出的代价世界第一，效果却是世界倒数第二。对这种死亡率达100%的传染病的知识普及和夸大宣传，不但让民众陷入敏感恐慌，也让中国狂犬病防治陷入投入高效率低的尴尬境地。我院研制的新的冻干人用狂犬病纯化疫苗（Vero细胞）成本更低，且可以通过肌肉注射和皮内注射两种途径进行免疫，用药剂量更低，研究结果表明，其安全性和免疫原性与进口疫苗相比，无统计学差异。这一结果也表明该种疫苗对于解决以往常用疫苗成本高效率低的境况具有良好的开发应用前景。我们将进一步采用肌肉和皮内注射对该疫苗进行狂犬病暴露后研究。
参考文献：
[1]KnobelDL，CleavelandS，ColemanPG，etal.Re-evaluatingtheburdenofrabiesinAfricaandAsia.BullWorldHealthOrgan2005；83（5）：360-368.
[2]WHO.Expertconsultationonrabies：firstreport.Geneva，WorldHealthOrganization，2005（WHOTechnicalReportSeries，No.931；http：//whqlibdoc.who.int/trs/WHOTRS931eng.pdf）.
[3]RabiesVaccines.WHOpositionpaper.WklyEpidemiolRec2010；85（32）：309-320.
[4]PlotkinSA.Vaccineproductioninhumandiploidcellstrains.AmJEpidemiol1971；94（4）：303-306.
[5]BriggsDJ，BanzhoffA，NicolayU，etal.AntibodyresponseofpatientsafterpostexposurerabiesvaccinationwithsmallintradermaldosesofpurifiedchickembryocellvaccineorpurifiedVerocellrabiesvaccine.BullWorldHealthOrgan2000；78：693-698.
[6]QuiambaoBP，DimaanoEM，AmbasC，etal.Reducingthecostofpost-exposurerabiesprophylaxis：efficacyof0.1mlPCECrabiesvaccineadministeredintradermallyusingtheThaiRedCrosspost-exposureregimeninpatientsseverelyexposedtolaboratory-confirmedrabidanimals.Vaccine2005；23：1709-1714.
作者简介：陈妙（1987-），女，江苏姜堰人，南京市第二医院护师，本科学历。